預(yù)防用mRNA疫苗藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行) （一）抗原序列選擇及設(shè)計(jì) （二）mRNA序列設(shè)計(jì) （三）模板質(zhì)粒、種子批的建立和檢驗(yàn) （一）一般要求 （二）mRNA原液生產(chǎn) （三）制劑處方及生產(chǎn)工藝 （三）雜質(zhì)分析 （四）生物學(xué)活性研究 （一）轉(zhuǎn)錄模板 （二）mRNA原液 （三）mRNA-LNP原液（如適用） （四）半成品 （五）成品 （六）方法學(xué)研究和方法學(xué)驗(yàn)證 （七）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1主表達(dá)2）能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生體液免疫和/或細(xì)胞免揮遞送作用的同時(shí)，具有一定佐劑樣功能4）mRNA可在體2等2）基于聚合物的載體系統(tǒng)，如多聚體（polyplexes）、納在借鑒本指導(dǎo)原則時(shí)還需根據(jù)產(chǎn)品相關(guān)特點(diǎn)和屬性開(kāi)展相應(yīng)研3（一）抗原序列選擇及設(shè)計(jì)標(biāo)抗原序列設(shè)計(jì)可包括為穩(wěn)定或獲得預(yù)期空間構(gòu)象而進(jìn)行的序（氨基酸序列和對(duì)應(yīng)的mRNA核苷酸序列并結(jié)合生物信息學(xué)工具分析其與流行病原體或相關(guān)毒株的序列4表達(dá)或穩(wěn)定抗原構(gòu)象的插入序列、可刺激和/或抑制免疫原性的據(jù)證明其對(duì)疫苗有效性帶來(lái)明確獲益且安全風(fēng)險(xiǎn)可控的前提下，5（二）mRNA序列設(shè)計(jì)行了序列改造或序列優(yōu)化（如密碼子優(yōu)化、GC含量調(diào)整等），固有免疫原性、增加穩(wěn)定性等）、示意圖及支持6對(duì)于環(huán)狀RNA，應(yīng)重點(diǎn)闡述轉(zhuǎn)錄模板中為實(shí)現(xiàn)高效環(huán)化引（三）模板質(zhì)粒、種子批的建立和檢驗(yàn)7并對(duì)用于生產(chǎn)目標(biāo)mRNA分子的全長(zhǎng)核苷酸序列進(jìn)行確認(rèn)分析。種子批的檢驗(yàn)應(yīng)保證其無(wú)外源因子污染及基因序列的準(zhǔn)確因和關(guān)鍵元件測(cè)序（如poly(A)尾等）、質(zhì)粒保有率、開(kāi)展種子批貯存穩(wěn)定性和傳代穩(wěn)定性考察，8素和微生物限度等。研究。（一）一般要求行工藝開(kāi)發(fā)，并結(jié)合科學(xué)合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)（Designof9原液和制劑生產(chǎn)過(guò)程中原則上應(yīng)避免使用人源或動(dòng)物源性典》相關(guān)規(guī)定和/或參照ICHQ5A等技術(shù)指南提供外源因子安全（二）mRNA原液生產(chǎn)mRNA原液的生產(chǎn)工藝通常包括DNA其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)含有能夠充分表征主要化合物及相關(guān)雜質(zhì)的鑒別量影響的研究。（3）加尾工藝，目前多采用共轉(zhuǎn)錄加尾工藝，即在轉(zhuǎn)錄模板中預(yù)先設(shè)計(jì)poly(T)序列以實(shí)現(xiàn)poly(A)的同錄后酶促加尾法，應(yīng)對(duì)反應(yīng)時(shí)間與溫度、poly(A)聚合酶濃度和），化策略，應(yīng)明確投料濃度和比例（如夾板寡核苷酸環(huán)化的前體線性RNA（precursorRNA）、環(huán)化過(guò)磷酸線性RNA）可能引發(fā)固有免疫激活反應(yīng)，在純化工藝開(kāi)發(fā)RNaseR添加量、反應(yīng)緩沖體系、反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)等進(jìn)行優(yōu)化，考察上為考察指標(biāo)對(duì)制劑關(guān)鍵工藝步驟及工藝參數(shù)控制范圍的合理性mRNA疫苗的遞送系統(tǒng)對(duì)mRNA包載、釋放、穩(wěn)定性、免異構(gòu)體在安全性和/或效力方面存在差異，和/或產(chǎn)品設(shè)計(jì)及工藝性以及體內(nèi)遞送后免疫原性等；鼓勵(lì)開(kāi)展新脂質(zhì)及其制備的mRNA包封工藝通常將溶解于有機(jī)相中的脂質(zhì)輔料與溶解質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于自復(fù)制mRNA，如果編碼復(fù)制酶的mRNA驗(yàn)證過(guò)程中應(yīng)對(duì)不同制劑階段（包封、超濾過(guò)程、除菌過(guò)濾后）4.mRNA-LNP凍干干工藝對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量屬性影響的研究，特別是凍干前后mRNA-根據(jù)其特性及作用機(jī)制等對(duì)制劑處方及生產(chǎn)工藝開(kāi)展針對(duì)性研以及遞送效率等藥物遞送屬性的研究外，需進(jìn)一步評(píng)估m(xù)RNA分子、脂質(zhì)輔料與微針基質(zhì)輔料的相容性，關(guān)注微針制有效性，而現(xiàn)有mRNA疫苗放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚不能充分表征mRNA-LNP結(jié)構(gòu)特征等，建議結(jié)合多種互補(bǔ)分析技術(shù)、從不同性，積累并分析mRNA-LNP形態(tài)結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性等屬性與疫苗安適用）、含有poly(A)尾mRNA的相對(duì)含量（如適用）、mRNAmRNA和脂質(zhì)輔料之間的相互作用可能受其序列長(zhǎng)度及二對(duì)于環(huán)狀RNA，重點(diǎn)關(guān)注環(huán)化位點(diǎn)的序列準(zhǔn)確性、環(huán)化比相互作用還受脂質(zhì)輔料組分及結(jié)構(gòu)等因素的影響，需結(jié)合LNP與mRNA相互作用的機(jī)制及特性開(kāi)展必要的質(zhì)量研究。理化特性進(jìn)行研究，如形態(tài)結(jié)構(gòu)、粒徑大小及分布、顆粒程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)（如mRNA-脂質(zhì)mRNA-LNP形態(tài)結(jié)構(gòu)考察的常用方法，建議建立規(guī)范化的操作過(guò)程穩(wěn)定性及貯存穩(wěn)定性研究。持續(xù)積累數(shù)據(jù)開(kāi)展mRNA-LNP形態(tài)結(jié)構(gòu)及質(zhì)量屬性與疫苗生物學(xué)活性、穩(wěn)定（三）雜質(zhì)分析mRNA產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)建議關(guān)注可能影響其生物學(xué)功能或誘完全的mRNA、不同帽子結(jié)構(gòu)的相關(guān)雜質(zhì)、缺失poly(A)尾的狀RNA，應(yīng)關(guān)注其特有的雜質(zhì)類型。建議采用高通量測(cè)序技術(shù)降解產(chǎn)物、脂質(zhì)分子間化學(xué)反應(yīng)生成的雜質(zhì)（如酯交換反應(yīng)）、顆粒融合等）等也需開(kāi)展相關(guān)研究。體外生物學(xué)活性研究主要為抗原表達(dá)量的定量檢段應(yīng)按照相關(guān)指導(dǎo)原則進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)控制分析并基于工藝驗(yàn)證情況（一）轉(zhuǎn)錄模板線性化轉(zhuǎn)錄模板中進(jìn)行質(zhì)控，如宿主菌DNA、宿主菌RNA、抗（二）mRNA原液mRNA含量、加帽率、poly(A)尾長(zhǎng)度及分布、m（三）mRNA-LNP原液（如適用）基于工藝關(guān)鍵性和風(fēng)險(xiǎn)控制策略對(duì)制劑關(guān)鍵中間產(chǎn)物設(shè)置（2）含量檢測(cè)：mRNA含量、各脂質(zhì)組分含量、輔料含量（如必要）等。mRNA含量，應(yīng)對(duì)各目標(biāo)mRNA含量分別進(jìn)行粒徑大小及分布，為生產(chǎn)工藝和穩(wěn)定性考察中的敏感指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合非臨床及臨床研究數(shù)據(jù)綜合評(píng)價(jià)其對(duì)疫苗安全有效性（5）生物學(xué)活性檢測(cè)：研發(fā)早期階段應(yīng)根據(jù)質(zhì)量研究數(shù)據(jù)活性方法的性能并與體內(nèi)效力進(jìn)行比較。（6）安全性指標(biāo)：通常包括細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查等。鼓勵(lì)采用先進(jìn)方法進(jìn)行質(zhì)控，如基于三代測(cè)序技術(shù)類型及開(kāi)環(huán)位點(diǎn)等進(jìn)行檢測(cè)；采用微滴式數(shù)字PCR（Droplet標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（referencematerials）的建立及制備應(yīng)參照《中華對(duì)于自復(fù)制mRNA疫苗，由于序列較長(zhǎng)，需重點(diǎn)關(guān)注其mRNA疫苗生產(chǎn)過(guò)程中使用的所有與產(chǎn)品直接接觸的耗材按照國(guó)內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則開(kāi)展各個(gè)生產(chǎn)階段包材相容性研究或材開(kāi)展的相容性研究資料?？疾旖M合后對(duì)疫苗關(guān)鍵質(zhì)量屬性及穩(wěn)定性和/或使用中穩(wěn)定性的既有技術(shù)平臺(tái)是否可被視為平臺(tái)技術(shù)依賴于已有產(chǎn)品的驗(yàn)增元件，完全依賴宿主細(xì)胞的翻譯系統(tǒng)完成其在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)反向剪接形成單鏈閉合環(huán)狀RNA，而體外合成同時(shí)激活CD8?T細(xì)胞主導(dǎo)的細(xì)胞免疫和B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫。離脂質(zhì)質(zhì)子化/去質(zhì)子化行為所表現(xiàn)出的有效pKa，其反映的是（或總摩爾數(shù)）的比值。醛類氧化物）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后形成的共價(jià)結(jié)合產(chǎn)物，可能影響VaccinesforInfectiousDiseaBioavailability;andLabelingDocumentatio[4]FDA.GuidanceforIndustry-DrugProducts,IncludiProducts,thatContainNanomaterials(draftguidance).DecemberRNAVaccinesforthePrevenRNAvaccinesforthepreventionofinfectiousdiseases:regulatoryconsiderations.December2021.mRNAMessengerRibonucleic信使核糖核酸PCRPolymeraseChainReactionⅡ型輔助T細(xì)胞InternalRibosomeEnt