病理科細胞病理診斷診療指南與技術操作規(guī)范一、引言細胞病理學診斷是病理學科的重要組成部分，它通過對人體各種細胞樣本的觀察和分析，為疾病的診斷、治療及預后評估提供重要依據(jù)。本診療指南與技術操作規(guī)范旨在規(guī)范細胞病理診斷的流程和技術操作，提高診斷的準確性和可靠性。二、標本采集（一）脫落細胞標本采集1.痰液標本采集前準備：向患者解釋采集痰液的目的和方法，囑患者晨起后用清水漱口，以減少口腔雜菌污染。采集方法：患者用力咳出深部痰液，一般收集清晨第一口痰，置于清潔、干燥的容器中。如痰液較少，可鼓勵患者多飲水，必要時可霧化吸入生理鹽水以刺激痰液排出。注意事項：標本應及時送檢，一般不超過2小時，以免細胞自溶。避免混入唾液、鼻涕等非痰液成分。2.尿液標本采集前準備：告知患者留取清潔中段尿，留尿前清洗外陰，女性患者應避開月經期。采集方法：一般留取50100ml尿液，置于無菌容器中。對于有血尿的患者，應收集全程血尿標本。注意事項：標本應盡快送檢，最好在1小時內處理，防止細胞溶解。若不能及時送檢，可加入適量的防腐劑，如甲醛，但會影響細胞形態(tài)，應盡量避免。3.胸腹水標本采集前準備：向患者說明操作目的和可能出現(xiàn)的不適，取得患者配合。常規(guī)進行局部皮膚消毒，鋪無菌巾。采集方法：在超聲或CT引導下，用穿刺針經皮穿刺進入胸腔或腹腔，抽取適量的胸腹水，一般為50200ml，置于無菌容器中。注意事項：嚴格遵守無菌操作原則，防止感染。穿刺過程中密切觀察患者的反應，如有不適及時處理。標本應及時送檢，如需保存，可加入適量的抗凝劑。（二）細針穿刺標本采集1.適應證體表可觸及的腫塊，如甲狀腺結節(jié)、乳腺腫塊、淋巴結腫大等，需要明確病變性質。深部器官的占位性病變，如肝臟、腎臟、胰腺等，在超聲、CT等影像學引導下進行穿刺活檢。2.禁忌證有嚴重出血傾向，凝血功能障礙未糾正者。穿刺部位有感染、潰瘍等病變。患者不能配合穿刺操作。3.術前準備患者準備：向患者及家屬解釋穿刺的目的、方法、可能出現(xiàn)的并發(fā)癥等，簽署知情同意書。完善血常規(guī)、凝血功能等檢查，評估患者的凝血狀態(tài)。物品準備：根據(jù)穿刺部位和病變大小選擇合適的穿刺針，一般常用2025G的穿刺針。準備無菌注射器、載玻片、固定液、局部麻醉藥等。4.操作方法定位：在超聲、CT等影像學引導下確定穿刺點和進針路徑，標記穿刺點。局部麻醉：常規(guī)消毒穿刺部位皮膚，鋪無菌巾，用局部麻醉藥在穿刺點處進行浸潤麻醉。穿刺取材：在影像學引導下，將穿刺針沿進針路徑刺入病變內，根據(jù)病變的大小和質地，抽取適量的細胞成分。一般穿刺23針，將抽取的細胞均勻涂片，立即用95%乙醇固定。術后處理：拔出穿刺針，壓迫穿刺部位數(shù)分鐘，觀察有無出血、血腫等并發(fā)癥。囑患者臥床休息12小時，密切觀察生命體征和穿刺部位情況。三、標本處理（一）涂片制作1.直接涂片法將采集的細胞標本直接均勻涂抹在載玻片上，涂片厚度要適中，避免細胞堆積或過于稀薄。涂片后立即用95%乙醇固定1530分鐘，以保持細胞的形態(tài)結構。2.液基薄層制片法原理：將細胞標本放入含有特殊固定液的標本瓶中，通過離心、過濾等方法將細胞均勻地轉移到載玻片上，制成薄層涂片。操作步驟：將采集的細胞標本加入到專用的液基保存液中，充分混勻。將標本瓶放入液基制片儀中，按照儀器的操作說明進行制片。制片后用蘇木精伊紅（HE）染色。優(yōu)點：液基薄層制片法可以減少血液、黏液等雜質的干擾，使細胞分布均勻，提高診斷的準確性。（二）固定1.固定的目的：使細胞保持生前的形態(tài)結構，防止細胞自溶和腐敗，便于染色和觀察。2.常用固定液：95%乙醇是最常用的固定液，適用于大多數(shù)細胞標本。對于一些需要進行免疫細胞化學染色的標本，可選用中性緩沖甲醛固定液。3.固定時間：一般固定1530分鐘，對于較大的標本或需要進行特殊染色的標本，固定時間可適當延長。（三）染色1.蘇木精伊紅（HE）染色原理：蘇木精是一種堿性染料，可將細胞核染成藍色；伊紅是一種酸性染料，可將細胞質染成粉紅色。通過HE染色，可以清晰地觀察細胞的形態(tài)結構。操作步驟：將固定好的涂片依次放入蘇木精染液中染色510分鐘，水洗后用鹽酸乙醇分化數(shù)秒，再用清水沖洗返藍。然后放入伊紅染液中染色13分鐘，水洗后依次用梯度乙醇脫水，二甲苯透明，最后用中性樹膠封片。2.其他染色方法巴氏染色：常用于婦科細胞學檢查，可使細胞核和細胞質的染色更加清晰，對癌細胞的診斷有較高的敏感性。免疫細胞化學染色：用于檢測細胞中的特定抗原或抗體，輔助疾病的診斷和鑒別診斷。操作時需要根據(jù)不同的抗體選擇合適的檢測方法和條件。四、診斷報告（一）報告內容1.一般信息：包括患者姓名、性別、年齡、標本來源、送檢日期等。2.標本描述：描述標本的外觀、數(shù)量、質量等情況，如痰液的顏色、性狀，穿刺標本的大小、質地等。3.鏡下所見：詳細描述細胞的形態(tài)特征，包括細胞的大小、形態(tài)、核仁、染色質等。對于異常細胞，應描述其數(shù)量、分布、形態(tài)特點等。4.診斷意見：根據(jù)鏡下所見，給出明確的診斷意見，如良性病變、惡性病變、可疑惡性病變等。對于可疑惡性病變，應建議進一步檢查或隨訪。5.備注：如有需要，可在報告中注明特殊情況或建議，如標本質量不佳可能影響診斷結果等。（二）診斷分級1.陰性：涂片內未發(fā)現(xiàn)異常細胞，提示病變?yōu)榱夹浴?.不典型細胞：細胞形態(tài)有一定的異常，但不足以診斷為惡性，可能為炎癥、化生等良性病變，也可能為早期癌前病變。建議定期隨訪。3.可疑惡性細胞：細胞形態(tài)高度懷疑為惡性，但證據(jù)不足，需要進一步檢查，如重復穿刺活檢、手術切除等。4.惡性細胞：涂片內發(fā)現(xiàn)典型的惡性細胞，可明確診斷為惡性腫瘤。同時應盡量判斷腫瘤的類型，如腺癌、鱗癌、小細胞癌等。五、質量控制（一）人員培訓1.細胞病理診斷醫(yī)師應具備扎實的病理學基礎和豐富的臨床經驗，經過專業(yè)的細胞病理學培訓，取得相應的執(zhí)業(yè)資格。2.定期組織業(yè)務學習和病例討論，不斷提高診斷水平。參加國內外學術交流活動，了解細胞病理學的最新進展。（二）標本質量控制1.標本采集人員應嚴格按照操作規(guī)程進行標本采集，確保標本的質量。對于不合格的標本，應及時與臨床醫(yī)生溝通，重新采集。2.標本處理過程中，要嚴格控制固定、染色等環(huán)節(jié)的質量，保證涂片的質量符合診斷要求。定期對制片質量進行檢查和評估，發(fā)現(xiàn)問題及時整改。（三）診斷質量控制1.建立雙簽字制度，對于疑難病例或診斷有爭議的病例，應由兩名以上的細胞病理診斷醫(yī)師共同診斷，必要時邀請上級醫(yī)師會診。2.定期進行診斷質量回顧性分析，統(tǒng)計診斷符合率、誤診率等指標，總結經驗教訓，不斷提高診斷的準確性。六、安全防護（一）生物安全1.細胞病理實驗室應具備良好的通風設施，配備生物安全柜等防護設備。2.操作人員在處理標本時應穿戴工作服、手套、口罩等防護用品，避免直接接觸標本和固定液等有害物質。3.標本和廢棄物應按照生物安全的要求進行處理，防止交叉感染和環(huán)境污染。（二）化學安全1.固定液、染色液等化學試劑應妥善保存，避免泄漏和揮發(fā)。使用時應在通風良好的環(huán)境中進行，嚴格按照操作規(guī)程操作。2.接觸化學試劑后，應及時洗手，避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，應立即用大量清水沖洗，并及時就醫(yī)。七、新技術應用（一）分子病理學技術1.熒光原位雜交（FISH）技術：可用于檢測細胞中的染色體數(shù)目和結構異常，輔助腫瘤的診斷和預后評估。例如，在乳腺癌中檢測HER2基因的擴增情況，指導靶向治療。2.聚合酶鏈反應（PCR）技術：可用于檢測細胞中的特定基因序列，如病毒感染的檢測、腫瘤基因突變的檢測等。（二）人工智能技術1.人工智能圖像識別技術可以對細胞涂片進行自動分析和診斷，提高診斷的效率和準確性。通過大量的細胞圖像數(shù)據(jù)進行訓練，人工智能模型可以識別細胞的形態(tài)特征，輔助病理醫(yī)師進行診斷。2.目前，人工智能技術在細胞病理診斷中的應用還處于研究和探索階段，但具有廣闊的發(fā)展前景。八、與臨床的溝通與協(xié)作（一）及時反饋診斷結果細胞病理診斷醫(yī)師應及時將診斷結果反饋給臨床醫(yī)生，對于重要的診斷信息，如惡性