臨床微生物檢驗(yàn)流程及操作標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)班賦能行動(dòng)檢驗(yàn)科考試試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共30分。每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確選項(xiàng)字母填入括號(hào)內(nèi)）1.血培養(yǎng)瓶在自動(dòng)化血培養(yǎng)系統(tǒng)中報(bào)陽(yáng)后，最優(yōu)先的處理步驟是（）A.立即轉(zhuǎn)種血瓊脂平板B.記錄報(bào)陽(yáng)時(shí)間并立即涂片革蘭染色C.放置4℃冰箱等待次日處理D.直接做藥敏試驗(yàn)答案：B2.對(duì)疑似結(jié)核分枝桿菌的痰標(biāo)本進(jìn)行前處理時(shí)，首選的消化-去污染試劑組合是（）A.2%NaOH+2%HClB.4%NaOH+N-乙酰-L-半胱氨酸C.1%胰酶+75%乙醇D.5%草酸+10%酚答案：B3.在厭氧菌培養(yǎng)中，下列哪種指示劑最適合用于監(jiān)測(cè)厭氧環(huán)境是否達(dá)標(biāo)（）A.酚紅B.刃天青C.溴甲酚紫D.甲基紅答案：B4.對(duì)大腸埃希菌進(jìn)行ESBLs表型確證試驗(yàn)時(shí)，CLSI推薦的底物抗生素組合為（）A.頭孢他啶30μg±克拉維酸10μgB.頭孢曲松30μg±克拉維酸10μgC.頭孢吡肟30μg±克拉維酸10μgD.頭孢噻肟30μg±克拉維酸10μg答案：A5.對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）進(jìn)行快速篩查時(shí)，最適用于普通實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的分子靶點(diǎn)是（）A.mecAB.mecCC.femAD.nuc答案：A6.下列哪項(xiàng)不是真菌血培養(yǎng)瓶與普通細(xì)菌血培養(yǎng)瓶的關(guān)鍵差異（）A.培養(yǎng)基pHB.樹(shù)脂吸附劑種類C.振蕩頻率D.報(bào)陽(yáng)算法閾值答案：C7.對(duì)腦脊液進(jìn)行革蘭染色時(shí)，正確的離心參數(shù)是（）A.500×g，5minB.1000×g，10minC.3000×g，15minD.15000×g，2min答案：C8.當(dāng)K-B法藥敏平板中抗生素紙片周圍出現(xiàn)“雙環(huán)”現(xiàn)象時(shí)，最可能的耐藥機(jī)制是（）A.產(chǎn)生AmpC酶B.產(chǎn)生碳青霉烯酶C.產(chǎn)生ESBLsD.產(chǎn)生PBP2a答案：B9.對(duì)淋病奈瑟菌進(jìn)行初分離培養(yǎng)時(shí)，最適培養(yǎng)環(huán)境為（）A.35℃，5%CO?，濕潤(rùn)B.30℃，微需氧C.42℃，厭氧D.25℃，普通大氣答案：A10.自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)中，對(duì)API20E反應(yīng)板進(jìn)行結(jié)果判讀時(shí)，若ONPG反應(yīng)孔呈黃色，應(yīng)記為（）A.陰性B.陽(yáng)性C.可疑D.無(wú)效答案：B11.對(duì)艱難梭菌毒素檢測(cè)采用PCR方法時(shí)，靶基因應(yīng)選擇（）A.tcdA+tcdBB.tcdCC.tcdRD.tcdE答案：A12.在分枝桿菌培養(yǎng)中，Middlebrook7H9液體培養(yǎng)基中添加的抑菌劑是（）A.多粘菌素BB.兩性霉素BC.萘啶酸D.甲氧芐啶答案：B13.對(duì)血培養(yǎng)報(bào)陽(yáng)標(biāo)本進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)時(shí)，菌液濃度應(yīng)調(diào)至（）A.0.5McFarlandB.1.0McFarlandC.2.0McFarlandD.0.25McFarland答案：A14.對(duì)CRE菌株進(jìn)行改良碳青霉烯酶抑制試驗(yàn)（mCIM）時(shí)，陽(yáng)性結(jié)果為（）A.抑菌圈直徑≥16mmB.抑菌圈直徑≤19mmC.抑菌圈直徑≥22mmD.抑菌圈直徑≤16mm答案：D15.對(duì)曲霉菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定時(shí)，最適合的乳酸酚棉藍(lán)染色溫度是（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃答案：B16.對(duì)VRE進(jìn)行表型確證時(shí)，若含萬(wàn)古霉素瓊脂篩查法菌落數(shù)≥1，則萬(wàn)古霉素濃度為（）A.2μg/mLB.4μg/mLC.6μg/mLD.8μg/mL答案：C17.對(duì)流感嗜血桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，必須補(bǔ)充的因子是（）A.X因子B.V因子C.X+V因子D.血紅蛋白答案：C18.對(duì)厭氧菌進(jìn)行MIC測(cè)定時(shí)，推薦使用的培養(yǎng)基是（）A.MH瓊脂B.布魯氏血瓊脂C.沙氏葡萄糖瓊脂D.營(yíng)養(yǎng)瓊脂答案：B19.對(duì)絲狀真菌進(jìn)行分子鑒定時(shí)，首選的DNA條形碼片段是（）A.ITSB.D1/D2C.TEF1-αD.β-tubulin答案：A20.對(duì)血培養(yǎng)瓶進(jìn)行無(wú)菌采血時(shí)，皮膚消毒的正確順序是（）A.70%乙醇→碘伏→70%乙醇B.碘伏→70%乙醇C.氯己定→碘伏D.碘酊→氯己定答案：A21.對(duì)CRE菌株進(jìn)行CarbaNP試驗(yàn)時(shí)，若A管顏色由紅色變?yōu)辄S色，提示（）A.產(chǎn)金屬酶B.產(chǎn)絲氨酸碳青霉烯酶C.不產(chǎn)碳青霉烯酶D.試劑失效答案：B22.對(duì)支原體進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需添加的膽固醇濃度為（）A.0.01%B.0.1%C.1%D.5%答案：B23.對(duì)白色念珠菌進(jìn)行科瑪嘉顯色培養(yǎng)時(shí)，菌落呈（）A.綠色B.藍(lán)色C.粉色D.紫色答案：A24.對(duì)腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行乳膠凝集試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)使用的陽(yáng)性對(duì)照抗原是（）A.A群多糖B.B群多糖C.C群多糖D.外膜蛋白答案：A25.對(duì)標(biāo)本進(jìn)行16SrDNA測(cè)序時(shí)，通用引物27F對(duì)應(yīng)的區(qū)域是（）A.V1B.V3C.V6D.V9答案：A26.對(duì)KPC酶進(jìn)行基因型檢測(cè)時(shí)，推薦引物序列為（）A.blaKPC-F:CGTCTAGTTCTGCTGTCTTGB.blaKPC-F:ATGTCACTGTATCGCCGTCTC.blaKPC-F:TCTGGTTCTGGCAGCAGCAGD.blaKPC-F:GCTACACTCCGGCAGCAGCA答案：A27.對(duì)曲霉半乳甘露聚糖檢測(cè)（GM試驗(yàn)）陽(yáng)性閾值是（）A.OD≥0.3B.OD≥0.5C.OD≥1.0D.OD≥2.0答案：B28.對(duì)艱難梭菌進(jìn)行厭氧培養(yǎng)時(shí)，推薦的氣體條件是（）A.80%N?,10%CO?,10%H?B.90%N?,5%CO?,5%O?C.70%N?,15%CO?,15%O?D.100%CO?答案：A29.對(duì)MRSA進(jìn)行頭孢西丁紙片法篩查時(shí)，抑菌圈直徑≤多少mm判定為耐藥（）A.19B.21C.24D.27答案：B30.對(duì)標(biāo)本進(jìn)行宏基因組測(cè)序時(shí)，去除宿主DNA常用的方法是（）A.酶解法B.物理剪切法C.甲基化親和層析D.16S富集法答案：C二、配伍題（每題1分，共20分。每組選項(xiàng)可重復(fù)選用，也可不選用）A.0.5McFarlandB.2%NaOH+2%檸檬酸C.35℃，5%CO?D.刃天青指示劑E.頭孢他啶/克拉維酸F.布魯氏血瓊脂G.1μg/mL奧沙西林H.7H9液體培養(yǎng)基I.0.1%Tween-80J.0.01%膽固醇31.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基（）32.厭氧環(huán)境指示劑（）33.真菌藥敏菌懸液濃度（）34.痰標(biāo)本去污染（）35.流感嗜血桿菌培養(yǎng)（）36.ESBLs確證試驗(yàn)（）37.厭氧菌藥敏培養(yǎng)基（）38.支原體培養(yǎng)添加物（）39.MRSA篩查平板（）40.曲霉孢子懸液分散劑（）答案：31.H32.D33.A34.B35.C36.E37.F38.J39.G40.I三、判斷題（每題1分，共20分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）41.血培養(yǎng)瓶報(bào)陽(yáng)后，若涂片未見(jiàn)細(xì)菌，可暫不轉(zhuǎn)種，繼續(xù)培養(yǎng)24h再觀察。（）答案：×42.對(duì)白色念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，可用MH瓊脂替代RPMI1640。（）答案：×43.對(duì)CRE菌株進(jìn)行mCIM試驗(yàn)時(shí)，需使用麥?zhǔn)?.5菌懸液。（）答案：√44.對(duì)曲霉進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定時(shí)，必須觀察到頂囊結(jié)構(gòu)方可報(bào)告種名。（）答案：√45.對(duì)艱難梭菌毒素檢測(cè)，若PCR陽(yáng)性但酶免毒素陰性，可報(bào)告為產(chǎn)毒株。（）答案：×46.對(duì)腦脊液進(jìn)行革蘭染色時(shí)，離心后上清液可直接丟棄。（）答案：×47.對(duì)支原體進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，若液體培養(yǎng)基顏色由紅變黃，即可報(bào)告陽(yáng)性。（）答案：×48.對(duì)VRE進(jìn)行表型確證時(shí)，若vanA陽(yáng)性，則對(duì)萬(wàn)古霉素MIC≥256μg/mL。（）答案：√49.對(duì)絲狀真菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，必須使用M38-A2方案。（）答案：√50.對(duì)血培養(yǎng)瓶進(jìn)行無(wú)菌采血時(shí)，若皮膚消毒后觸碰穿刺點(diǎn)，需重新消毒。（）答案：√51.對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行比例法藥敏時(shí)，若耐藥比例≥1%，即可判定耐藥。（）答案：√52.對(duì)厭氧菌進(jìn)行鑒定時(shí)，可用MALDI-TOFMS直接點(diǎn)靶。（）答案：√53.對(duì)大腸埃希菌進(jìn)行ESBLs篩查時(shí)，若頭孢曲松抑菌圈≥25mm，可排除ESBLs。（）答案：×54.對(duì)真菌進(jìn)行DNA提取時(shí)，需使用玻璃珠破碎法。（）答案：√55.對(duì)血培養(yǎng)瓶進(jìn)行厭氧培養(yǎng)時(shí)，無(wú)需振蕩。（）答案：√56.對(duì)腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行乳膠凝集試驗(yàn)時(shí)，若出現(xiàn)交叉凝集，需用生理鹽水稀釋后再測(cè)。（）答案：√57.對(duì)曲霉進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，需使用孢子懸液而非菌絲片段。（）答案：√58.對(duì)支原體進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)，可使用16SrRNA通用引物。（）答案：√59.對(duì)KPC酶進(jìn)行基因型檢測(cè)時(shí)，若blaKPC陰性即可排除碳青霉烯酶。（）答案：×60.對(duì)標(biāo)本進(jìn)行宏基因組測(cè)序時(shí)，需建庫(kù)片段長(zhǎng)度≥10kb方可獲得良好組裝。（）答案：×四、填空題（每空1分，共30分）61.對(duì)血培養(yǎng)瓶進(jìn)行無(wú)菌采血時(shí)，成人每瓶推薦采血量為_(kāi)_______mL，兒童為_(kāi)_______mL。答案：8–10，1–362.對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行比例法藥敏時(shí)，臨界濃度為異煙肼________μg/mL，利福平________μg/mL。答案：0.2，1.063.對(duì)白色念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，培養(yǎng)基為_(kāi)_______，培養(yǎng)時(shí)間為_(kāi)_______h。答案：RPMI1640，2464.對(duì)曲霉進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定時(shí)，頂囊上產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)稱為_(kāi)_______，其頂端延伸的稱為_(kāi)_______。答案：瓶梗，分生孢子鏈65.對(duì)艱難梭菌進(jìn)行厭氧培養(yǎng)時(shí)，推薦使用的選擇性培養(yǎng)基為_(kāi)_______，添加的抗生素為_(kāi)_______。答案：CCFA，環(huán)絲氨酸-頭孢西丁66.對(duì)MRSA進(jìn)行頭孢西丁紙片法篩查時(shí)，抑菌圈直徑≤________mm判定為耐藥，對(duì)應(yīng)mecA基因________。答案：21，陽(yáng)性67.對(duì)CRE菌株進(jìn)行CarbaNP試驗(yàn)時(shí)，A管底物為_(kāi)_______，B管添加________作為抑制劑。答案：亞胺培南，EDTA68.對(duì)腦脊液進(jìn)行革蘭染色時(shí)，若查到革蘭陰性雙球菌，需立即報(bào)告并同時(shí)進(jìn)行________試驗(yàn)以確認(rèn)________。答案：乳膠凝集，腦膜炎奈瑟菌69.對(duì)支原體進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，若液體培養(yǎng)基顏色由________變?yōu)開(kāi)_______，且澄清度下降，提示陽(yáng)性。答案：紅，黃70.對(duì)絲狀真菌進(jìn)行DNA提取時(shí)，需使用________破碎細(xì)胞壁，再用________法提取總DNA。答案：玻璃珠，酚-氯仿71.對(duì)VRE進(jìn)行基因型檢測(cè)時(shí)，vanA對(duì)萬(wàn)古霉素MIC≥________μg/mL，vanB對(duì)萬(wàn)古霉素MIC范圍為_(kāi)_______μg/mL。答案：256，4–6472.對(duì)厭氧菌進(jìn)行MALDI-TOFMS鑒定時(shí)，需使用________基質(zhì)，激光頻率為_(kāi)_______Hz。答案：HCCA，6073.對(duì)血培養(yǎng)報(bào)陽(yáng)標(biāo)本進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)時(shí)，若菌液濃度超過(guò)________McFarland，需用________稀釋。答案：0.5，生理鹽水74.對(duì)曲霉進(jìn)行GM試驗(yàn)時(shí)，若連續(xù)兩次血清OD≥________，或單次OD≥________，可判定陽(yáng)性。答案：0.5，1.075.對(duì)標(biāo)本進(jìn)行16SrDNA測(cè)序時(shí)，通用引物27F序列為_(kāi)_______，1492R序列為_(kāi)_______。答案：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG，TACGGYTACCTTGTTACGACTT五、簡(jiǎn)答題（每題10分，共30分）76.簡(jiǎn)述血培養(yǎng)瓶報(bào)陽(yáng)后實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化處理流程。答案：（1）立即記錄報(bào)陽(yáng)時(shí)間，觀察瓶?jī)?nèi)有無(wú)溶血、氣體、絮狀物；（2）無(wú)菌抽取培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色，鏡檢并初步報(bào)告；（3）根據(jù)染色結(jié)果選擇培養(yǎng)基：需氧/厭氧血瓊脂、巧克力瓊脂、麥康凱等；（4）轉(zhuǎn)種后放置于35℃，5%CO?孵育18–24h；（5）同時(shí)進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)，菌液調(diào)至0.5McFarland；（6）若鏡檢見(jiàn)真菌，加種沙氏瓊脂；若見(jiàn)分枝桿菌樣菌體，加種L-J培養(yǎng)基；（7）將涂片、培養(yǎng)、藥敏結(jié)果于24h內(nèi)錄入LIS系統(tǒng)并報(bào)告臨床；（8）剩余培養(yǎng)物放置4℃保存48h，以備復(fù)查。77.簡(jiǎn)述CRE實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略及確認(rèn)流程。答案：（1）篩查：對(duì)腸桿菌目細(xì)菌，采用厄他培南、美羅培南紙片法，抑菌圈直徑≤19mm或MIC≥1μg/mL進(jìn)入確認(rèn)流程；（2）表型確證：采用mCIM試驗(yàn)，亞胺培南紙片孵育過(guò)夜后，若抑菌圈≤16mm為陽(yáng)性；（3）酶型區(qū)分：CarbaNP試驗(yàn)，A管變黃提示絲氨酸酶，B管變黃提示金屬酶；（4）基因型檢測(cè)：采用多重PCR，覆蓋blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48；（5）測(cè)序驗(yàn)證：對(duì)陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行Sanger測(cè)序，與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)確認(rèn)亞型；（6）報(bào)告：在LIS標(biāo)注“CRE”，并備注酶型，通知感染控制科。78.簡(jiǎn)述真菌血培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程及注意事項(xiàng)。答案：（1）采血：成人每瓶8–10mL，兒童1–3mL，立即注入真菌專用樹(shù)脂瓶；（2）運(yùn)輸：室溫2h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，切勿冷藏；（3）上機(jī)：使用BacT/ALERTFA或BDBACTECMyco/F瓶，設(shè)定35℃持續(xù)監(jiān)測(cè)；（4）報(bào)陽(yáng)處理：立即涂片行革蘭染色及熒光白染色，轉(zhuǎn)種沙氏瓊脂、土豆葡萄糖瓊脂，分別置25℃與35℃；（5）鑒定：采用MALDI-TOFMS，分值≥2.0報(bào)告種名；若分值低，加做ITS測(cè)序；（6）藥敏：對(duì)念珠菌采用CLSIM27-A3微量稀釋法，對(duì)曲霉采用M38-A2；（7）注意事項(xiàng)：①避免過(guò)度振蕩防止菌絲斷裂；②轉(zhuǎn)種后立即用Parafilm封口防干燥；③若48h未報(bào)陽(yáng)，需盲傳一次；④污染率控制在≤3%。六、案例分析題（每題20分，共40分）79.病例：65歲男性，因肺炎入院，入院第3天高熱39.5℃，WBC18×10?/L，PCT5.2ng/mL，抽取雙側(cè)雙瓶血培養(yǎng)，12h左側(cè)厭氧瓶報(bào)陽(yáng)，涂片見(jiàn)革蘭陽(yáng)性球菌，呈葡萄串樣排列。次日轉(zhuǎn)種血瓊脂，35℃，5%CO?培養(yǎng)24h后，出現(xiàn)白色凸起、β溶血菌落，直徑1mm，凝固酶陽(yáng)性。問(wèn)題：（1）寫出該菌最可能的種名及鑒定路徑；（2）給出藥敏試驗(yàn)方案及耐藥表型判斷標(biāo)準(zhǔn)；（3）若該菌對(duì)頭孢西丁抑菌圈直徑為18mm，下一步如何確認(rèn)MRSA；（4）簡(jiǎn)述感染控制措施。答案：（1）種名：金黃色葡萄球菌；路徑：MALDI-TOFMS分值≥2.0，或采用Vitek2GP卡，凝固酶試管法確證。（2）方案：采用CLSIM100標(biāo)準(zhǔn)，頭孢西丁30μg紙