ICS65.120CCSB46飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光法DetectionofdeoxynivalenolinfeedRapidquantitativemethodofsuperconductingdotsimmunofluorescencetechniqueIDB43/T2347—2022前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 5試劑與材料 6儀器與設(shè)備 7樣品制備 28樣品測定 29注意事項(xiàng) 2 2 附錄A（規(guī)范性）超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光快速定量檢測卡性能要求及評價 4DB43/T2347—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：湖南省飼料工業(yè)協(xié)會、湖南普菲克生物科技有限公司、湖南省獸藥飼料監(jiān)察所、湖南喜來高動物保健品有限公司、湖南綠亨世源動物藥業(yè)有限公司、湖南中科基因技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：黃勇、李艷平、李裕、周宇駿、張敏、劉亞力、胡春燦、苗超、鄒建曾、蔣岳華。DB43/T2347—20221飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇快速檢測超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光法本文件規(guī)定了飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光快速定量檢測方法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本方法基于超導(dǎo)量點(diǎn)標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)，采用熒光側(cè)向免疫層析原理。試樣提取液中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與檢測卡上標(biāo)記的抗體相結(jié)合并發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量相關(guān)。層析結(jié)束后，用免疫熒光分析儀測定檢測卡上的檢測線和控制線的熒光強(qiáng)度，儀器根據(jù)內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線自動算出試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量。5試劑與材料5.1試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中三級水的要求。5.2稀釋緩沖液：使用超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光定量檢測卡配套的稀釋緩沖液，或根據(jù)產(chǎn)品使用說明書配制。5.3提取液：三級水。5.4檢測卡：性能指標(biāo)應(yīng)符合附錄A要求。5.5濾紙：采用中速定量濾紙。6儀器與設(shè)備6.1天平：感量0.01g。6.2小型粉碎機(jī)。2DB43/T2347—20226.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.5渦旋振蕩器。6.6免疫熒光分析儀：可測定并顯示檢測卡的測定結(jié)果。6.7計(jì)時器。7樣品制備7.1采樣7.2樣品處理7.2.1取有代表性的樣品約500g，用小型粉碎機(jī)粉碎至全部通過20目分析篩，混合應(yīng)均勻。7.2.2稱取5g（精確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入25.0mL提取液，用渦旋振蕩器振蕩5min；靜置后用濾紙過濾，或取1.0mL～1.5mL混合液于離心管中，經(jīng)離心機(jī)以4000r/min離心3~5min。取濾液或離心后的上清液100μL于另一離心管中，加入100μL三級水混勻，再加入200μL稀釋緩沖液，充分混勻待測。8樣品測定8.1開啟免疫熒光分析儀。8.2將超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光定量檢測卡取出，加樣孔朝上平放。8.3準(zhǔn)確移取75μL待測液（見7.2.2加入檢測卡加樣孔中。8.4檢測卡加樣后，水平靜置15min反應(yīng)，然后在3min內(nèi)將檢測卡插入免疫熒光分析儀，儀器將自動進(jìn)行檢測。8.5免疫熒光分析儀完成數(shù)據(jù)讀取、分析，免疫熒光分析儀自動顯示試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量并保存檢測結(jié)果。8.6若免疫熒光分析儀的顯示值＞2500μg/kg，需移取100μL待測液（見7.2.2加入300μL提取液，充分混勻后取100μL至另一離心管中，加入100μL三級水混勻，再加液，充分混勻，按照8.2～8.5進(jìn)行測定，若顯示值仍＞2500μg/kg，則按8.6重復(fù)測定，直至顯示值8.7本方法檢出限為50μg/kg。9注意事項(xiàng)不同廠家超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光定量檢測卡及免疫熒光分析儀的使用方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說明中規(guī)定的方法進(jìn)行操作。10結(jié)果表述試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量由免疫熒光分析儀自動計(jì)算并顯示，單位為μg/kg。DB43/T2347—2022在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的相對偏差不應(yīng)超過10％。DB43/T2347—20224（規(guī)范性）超導(dǎo)量點(diǎn)免疫熒光快速定量檢測卡性能要求及評價A.1準(zhǔn)確性每個濃度平行測定不低于6次。計(jì)算檢測卡檢測結(jié)果與實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品的相對偏差，3個濃度的相對偏差均應(yīng)控制在-10+10％之間。A.2精密度采用1000μg/kg脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，平行測定不低于6次，計(jì)算檢測卡批內(nèi)變異系數(shù)，變異系數(shù)應(yīng)≤10％。A.3批間穩(wěn)定性采用1000μg/kg脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，隨機(jī)選取至少6個批次產(chǎn)品，每個批次產(chǎn)品測定