2025年大學(xué)生物科學(xué)（分子生物學(xué)實驗）上學(xué)期期末測試卷

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______一、選擇題（總共10題，每題3分，每題只有一個正確答案，請將正確答案填寫在括號內(nèi)）1.在分子生物學(xué)實驗中，用于提取DNA的常用試劑是（）A.乙醇B.氯仿C.異丙醇D.蛋白酶K2.以下哪種技術(shù)可用于檢測特定基因的表達水平（）A.PCRB.WesternblotC.NorthernblotD.Southernblot3.限制性內(nèi)切酶的作用是（）A.合成DNAB.切割DNAC.連接DNAD.修飾DNA4.構(gòu)建重組DNA分子時，常用的載體是（）A.質(zhì)粒B.噬菌體C.病毒D.以上都是5.進行PCR反應(yīng)時，需要的酶是（）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.限制性內(nèi)切酶6.在DNA測序中，常用的方法是（）A.Sanger法B.化學(xué)降解法C.焦磷酸測序法D.以上都是7.用于蛋白質(zhì)分離的技術(shù)是（）A.SDSB.離子交換色譜C.親和色譜D.以上都是8.以下哪種方法可用于檢測蛋白質(zhì)與DNA的相互作用（）A.凝膠遷移實驗B.染色質(zhì)免疫沉淀C.酵母雙雜交D.以上都是9.在分子生物學(xué)實驗中，常用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.PBSC.TED.以上都是10.以下哪種技術(shù)可用于基因編輯（）A.CRISPR/Cas9B.TALENsC.ZFNsD.以上都是二、多項選擇題（總共5題，每題5分，每題有兩個或兩個以上正確答案，請將正確答案填寫在括號內(nèi)）1.分子生物學(xué)實驗中常用的儀器有（）A.離心機B.移液器C.PCR儀D.凝膠成像系統(tǒng)2.以下哪些方法可用于DNA的定量（）A.紫外分光光度法B.熒光定量PCRC.凝膠電泳D.Bradford法3.在構(gòu)建重組DNA分子時，需要用到的工具酶有（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.堿性磷酸酶4.以下哪些技術(shù)可用于蛋白質(zhì)的純化（）A.離子交換色譜B.凝膠過濾色譜C.親和色譜D.疏水相互作用色譜5.分子生物學(xué)實驗中常用的檢測方法有（）A.凝膠電泳B.免疫印跡C.熒光定量PCRD.基因測序三、判斷題（總共10題，每題2分，請判斷下列說法是否正確，正確的打“√”，錯誤的打“×”）1.在分子生物學(xué)實驗中，所有的操作都需要在無菌條件下進行。（）2.PCR反應(yīng)中，引物的設(shè)計對擴增結(jié)果沒有影響。（）3.限制性內(nèi)切酶可以識別特定的DNA序列，并在該序列處切割DNA。（）4.構(gòu)建重組DNA分子時，載體和目的基因的連接是隨機的。（）5.Westernblot可用于檢測蛋白質(zhì)的分子量和表達水平。（）6.在DNA測序中，Sanger法是最常用的方法。（）7.蛋白質(zhì)分離技術(shù)中，SDS可以根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷和分子量進行分離。（）8.凝膠遷移實驗可用于檢測蛋白質(zhì)與DNA的相互作用。（）9.在分子生物學(xué)實驗中，常用的緩沖液可以隨意配制。（）10.CRISPR/Cas9技術(shù)可用于對特定基因進行編輯。（）四、簡答題（總共3題，每題10分）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理和步驟。2.請說明構(gòu)建重組DNA分子的主要步驟和方法。3.簡述蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）的原理和操作流程。五、實驗設(shè)計題（總共1題，20分）設(shè)計一個實驗，從細胞中提取總RNA，并檢測某個基因的表達水平。請詳細描述實驗步驟、所用試劑和儀器，以及預(yù)期結(jié)果。答案：一、選擇題1.B2.C3.B4.D5.A6.D7.D8.A9.D10.D二、多項選擇題1.ABCD2.AB3.AB4.ABCD5.ABCD三、判斷題1.×2.×3.√4.×5.√6.√7.√8.√9.×10.√四、簡答題1.PCR反應(yīng)的基本原理是在模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。步驟包括：變性，將模板DNA加熱至95℃左右使其變性解鏈；退火，降溫至合適溫度，使引物與模板互補序列結(jié)合；延伸，在DNA聚合酶作用下，以dNTP為原料合成新的DNA鏈。2.構(gòu)建重組DNA分子的主要步驟：獲取目的基因，可通過PCR擴增、從基因組文庫或cDNA文庫中獲取等方法；選擇合適載體，如質(zhì)粒、噬菌體等；用限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體；用DNA連接酶連接目的基因和載體形成重組DNA分子。方法有黏性末端連接、平端連接等。3.Westernblot原理：蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相載體上，然后用特異性抗體與目標蛋白結(jié)合，再通過酶標二抗顯色來檢測目標蛋白。操作流程：樣品處理與電泳；轉(zhuǎn)膜；封閉；一抗孵育；二抗孵育；顯色檢測。五、實驗設(shè)計題實驗步驟：1.細胞收集：取適量細胞，離心收集。2.RNA提取：使用Trizol試劑提取總RNA，按說明書操作，包括加試劑、振蕩、離心分層等步驟，取上清用異丙醇沉淀RNA。3.RNA定量：用紫外分光光度計測定RNA濃度和純度。4.cDNA合成：以提取的RNA為模板，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。5.PCR擴增：設(shè)計該基因特異性引物，以cDNA為模板進行PCR擴增。6.電泳檢測：將PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察條帶。所用試劑