生物制藥層析柱裝填技師（初級）考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.層析柱常用填料基質(zhì)包括瓊脂糖、______和硅膠等。2.裝填時填料勻漿體積分?jǐn)?shù)一般為______。3.柱效評價指標(biāo)包括理論塔板數(shù)（N）和______。4.裝填前需檢查柱的______，確保無漏液。5.離子交換填料的核心是______基團。6.排除柱內(nèi)氣泡可通過______或輕敲柱壁。7.疏水層析常用______洗脫（降低鹽濃度）。8.層析柱內(nèi)徑與長度比一般不超過______。9.裝填后需用______平衡柱床。10.親和填料的核心是連接______的載體。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.不屬于層析柱裝填方法的是（）A.重力沉降法B.加壓裝填法C.離心裝填法D.攪拌裝填法2.填料勻漿應(yīng)沿柱壁______加入（避免氣泡）A.快速B.緩慢C.間斷D.大量3.柱效下降的常見原因不包括（）A.填料壓實不均B.氣泡殘留C.平衡充分D.柱床塌陷4.目標(biāo)蛋白帶負(fù)電時應(yīng)選（）A.陰離子交換填料B.陽離子交換填料C.疏水填料D.親和填料5.裝填加壓壓力一般不超過______MPaA.0.1B.0.5C.1.0D.2.06.疏水層析平衡常用______緩沖液A.低鹽B.高鹽C.酸性D.堿性7.柱床應(yīng)保留至少______cm空間（避免流出液接觸）A.1B.3C.5D.108.親和配基與載體連接需保證（）A.配基暴露B.載體暴露C.均隱藏D.無要求9.柱床塌陷最可能因（）A.平衡不足B.流速過快C.填料濃度高D.柱溫高10.評價分離選擇性的指標(biāo)是（）A.理論塔板數(shù)B.分離度C.拖尾因子D.保留時間三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.影響裝填質(zhì)量的因素包括（）A.填料濃度B.裝填壓力C.柱溫D.緩沖液pH2.裝填后驗證項目有（）A.柱效測定B.分離度驗證C.填料完整性D.氣密性檢查3.常用填料基質(zhì)包括（）A.瓊脂糖B.葡聚糖C.纖維素D.聚苯乙烯4.裝填常見問題有（）A.氣泡殘留B.柱床不均C.柱床塌陷D.漏液5.離子交換填料帶電基團類型（）A.季銨基B.羧甲基C.磺酸基D.氨基6.疏水層析洗脫方式（）A.線性梯度B.階梯洗脫C.反向洗脫D.等度洗脫7.親和層析類型（）A.抗體-抗原B.金屬螯合C.疏水親和D.離子親和8.排氣泡方法（）A.輕敲柱壁B.反向沖洗C.靜置消泡D.加熱9.柱使用前準(zhǔn)備（）A.柱清洗B.填料溶脹C.平衡液配制D.壓力測試10.柱性能評價指標(biāo)（）A.理論塔板數(shù)B.分離度C.拖尾因子D.保留時間四、判斷題（每題2分，共20分）1.填料濃度越高裝填效果越好（）2.裝填后可直接上樣（無需平衡）（）3.氣泡殘留會降低柱效（）4.離子交換緩沖液pH應(yīng)遠(yuǎn)離蛋白等電點（）5.疏水層析依賴鹽濃度變化洗脫（）6.親和配基無需固定化（）7.加壓越大柱床越穩(wěn)定（）8.柱床越高柱效一定越好（）9.柱使用后用去離子水沖洗保存（）10.理論塔板數(shù)越大柱效越高（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述層析柱裝填基本步驟答案：①填料準(zhǔn)備：用平衡液溶脹，配成50%-70%勻漿；②柱準(zhǔn)備：清洗、檢查氣密性，安裝柱網(wǎng)；③裝填：沿柱壁緩慢加勻漿，重力/低壓壓實；④排氣泡：輕敲或反向沖洗；⑤平衡：用平衡液沖洗至流出液參數(shù)穩(wěn)定；⑥驗證：測柱效、分離度。2.影響柱效的常見因素答案：①填料：粒徑不均、壓實不均、氣泡；②操作：流速過快、壓力波動、柱床塌陷；③環(huán)境：柱溫不穩(wěn)定、緩沖液參數(shù)變化；④樣品：粘度高、雜質(zhì)多導(dǎo)致污染。這些因素破壞柱床結(jié)構(gòu)，增加擴散阻力。3.疏水層析平衡與洗脫原理答案：平衡時，高鹽濃度使蛋白疏水區(qū)域暴露，與填料疏水基團結(jié)合；洗脫時，降低鹽濃度（梯度），減弱疏水作用，蛋白按疏水性從弱到強洗脫。鹽濃度降低減少疏水區(qū)域暴露，促進解吸。4.親和配基選擇原則答案：①特異性：與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合；②穩(wěn)定性：層析條件下不降解；③親和力適中：過高難洗脫，過低結(jié)合弱；④可固定化：能共價連接載體且不影響活性；⑤經(jīng)濟性：來源廣、成本低。六、討論題（每題5分，共10分）1.柱效不合格（理論塔板數(shù)低）如何排查處理？答案：①檢查氣泡：反向沖洗或輕敲排除；②填料壓實：重新裝填（調(diào)整勻漿濃度、加壓方式）；③平衡：延長平衡時間至參數(shù)穩(wěn)定；④填料：更換粒徑分布均勻的合格填料；⑤流速：控制流速避免柱床塌陷；⑥緩沖液：確認(rèn)pH/電導(dǎo)率符合要求后復(fù)測。2.裝填質(zhì)量對下游純化的影響答案：①柱效差→分離度低，雜質(zhì)難分離，后續(xù)負(fù)荷增加；②氣泡/柱床不均→峰展寬，回收率低，純度不達標(biāo)；③壓實不均→壓力過高，損壞柱/填料；④合格裝填→批次穩(wěn)定，減少返工，提高效率。不合格則需重新裝填，增加成本，影響進度。答案部分一、填空題1.葡聚糖2.50%-70%3.分離度（R）4.氣密性5.帶電6.反向沖洗7.線性梯度8.1:109.平衡緩沖液10.配基二、單項選擇題1.D2.B3.C4.A5.A6.B7.A8.A9.B10.B三、多項選擇題1.ABCD2.A