生物制藥純化樹脂研發(fā)工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.生物制藥中單抗捕獲常用含______配基的樹脂。2.離子交換樹脂交換容量分為靜態(tài)和______交換容量。3.凝膠過濾分離依據(jù)是目標(biāo)分子的______。4.疏水作用樹脂的配基通常為______。5.樹脂孔徑常用______單位表示。6.強(qiáng)陽離子交換樹脂功能基團(tuán)是______。7.樹脂再生常用堿性再生劑是______。8.病毒去除樹脂需______孔徑。9.反映樹脂結(jié)合能力的參數(shù)是______。10.符合cGMP的樹脂需具備______。二、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.單抗捕獲首選（）A.蛋白A樹脂B.離子交換樹脂C.疏水樹脂D.凝膠過濾樹脂2.凝膠過濾中小分子蛋白洗脫體積（）A.大于Void體積B.等于Void體積C.小于Void體積D.不確定3.帶負(fù)電蛋白應(yīng)選（）A.強(qiáng)陽離子樹脂B.弱陽離子樹脂C.強(qiáng)陰離子樹脂D.弱陰離子樹脂4.蛋白A樹脂再生常用（）A.1MNaClB.0.1MHClC.20%乙醇D.5M尿素5.動(dòng)態(tài)結(jié)合容量（DBC）單位是（）A.mg蛋白/mL樹脂B.μmol配基/mL樹脂C.mL蛋白/g樹脂D.mg配基/g樹脂6.疏水層析高鹽濃度作用是（）A.增強(qiáng)蛋白疏水性B.降低疏水性C.破壞結(jié)構(gòu)D.調(diào)節(jié)pH7.弱陰離子交換樹脂是（）A.QSepharoseB.DEAESepharoseC.SPSepharoseD.CMSepharose8.樹脂滅菌不包括（）A.濕熱滅菌B.環(huán)氧乙烷C.干熱滅菌D.180℃干烤9.疫苗純化樹脂需（）A.高交換容量B.病毒清除C.低非特異性結(jié)合D.以上都是10.離子交換穿透早的原因（）A.上樣不足B.流速慢C.結(jié)合容量低D.洗脫濃度高三、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.選樹脂需考慮（）A.目標(biāo)蛋白pIB.配基特異性C.pH穩(wěn)定性D.生產(chǎn)規(guī)模E.成本2.離子交換樹脂表征參數(shù)（）A.交換容量B.孔徑分布C.配基密度D.回收率E.流速3.親和層析樹脂包括（）A.蛋白G樹脂B.His-tag鎳柱C.谷胱甘肽樹脂D.羥基磷灰石E.凝膠過濾樹脂4.樹脂再生注意事項(xiàng)（）A.避免干燥B.控制再生劑濃度C.平衡至應(yīng)用pHD.檢測再生效果E.無限重復(fù)使用5.影響疏水層析回收率的因素（）A.鹽濃度B.溫度C.pHD.配基密度E.上樣量6.生物制藥常用層析樹脂（）A.蛋白A樹脂B.Q樹脂C.苯基樹脂D.SephadexE.混合模式樹脂7.樹脂孔徑與目標(biāo)分子關(guān)系（）A.需大于目標(biāo)分子Stokes半徑B.小孔徑阻礙進(jìn)入C.大孔徑不影響分離D.病毒去除需小孔徑E.凝膠過濾依賴孔徑分布8.樹脂清潔試劑（）A.NaOHB.鹽酸胍C.乙醇D.蛋白酶E.去垢劑9.法規(guī)要求樹脂特性（）A.無毒性B.可滅菌C.批次一致D.可追溯E.高回收率10.混合模式樹脂優(yōu)勢（）A.特異性高B.耐受高鹽C.減少步驟D.提高純度E.降低成本四、判斷題（每題2分，共20分）1.所有樹脂均可濕熱滅菌（×）2.蛋白A僅結(jié)合人源單抗（×）3.凝膠過濾無需上樣緩沖液（×）4.交換容量越高純化效果越好（×）5.疏水層析通過降低鹽濃度洗脫（√）6.DBC高于靜態(tài)結(jié)合容量（×）7.弱離子交換樹脂解離受pH影響大（√）8.病毒過濾樹脂孔徑＜20nm（√）9.再生后樹脂無需檢測直接用（×）10.混合模式樹脂利用離子+疏水作用（√）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述離子交換樹脂純化蛋白的原理及關(guān)鍵參數(shù)答案：原理：樹脂帶電基團(tuán)與目標(biāo)蛋白相反電荷發(fā)生靜電結(jié)合。關(guān)鍵參數(shù)：①pH（遠(yuǎn)離蛋白pI，穩(wěn)定電荷）；②離子強(qiáng)度（低鹽結(jié)合，高鹽洗脫）；③流速（控制樹脂允許范圍）；④上樣量（不超DBC）；⑤洗脫梯度（線性/階梯式鹽濃度變化）。2.親和層析與疏水層析樹脂適用場景差異答案：親和層析依賴特異性配基（如蛋白A），適用于粗提液中低豐度目標(biāo)物（如單抗）的高純度捕獲；疏水層析依賴疏水相互作用，適用于去除雜蛋白、濃縮蛋白，常用于親和后的精純步驟，耐受高鹽。3.樹脂再生流程及注意事項(xiàng)答案：流程：①去離子水沖洗殘留緩沖液；②再生劑（NaOH/鹽酸）沖洗污染物；③去離子水沖至中性；④平衡緩沖液平衡。注意：①避免干燥；②控制再生劑濃度/時(shí)間；③定期檢測結(jié)合容量；④不同樹脂選對應(yīng)再生劑。4.生物制藥常用樹脂類型及核心應(yīng)用答案：①蛋白A樹脂：單抗捕獲；②His-tag鎳柱：重組蛋白純化；③Q/SP樹脂：蛋白精純；④苯基樹脂：濃縮/去雜；⑤凝膠過濾樹脂：脫鹽/分子量測定；⑥混合模式樹脂：多步合并提高純度。六、討論題（每題5分，共10分）1.疏水層析回收率低的原因及優(yōu)化答案：原因：①鹽濃度不足；②鹽類型不合適；③pH偏離最適；④配基密度不匹配；⑤洗脫梯度過急。優(yōu)化：①增加鹽濃度（如(NH4)2SO4替代NaCl）；②調(diào)整pH至遠(yuǎn)離pI；③換更強(qiáng)疏水樹脂（辛基替代苯基）；④線性洗脫梯度；⑤增加樹脂體積。2.如何根據(jù)單抗特性選蛋白A樹脂答案：需考慮：①單抗種屬（如蛋白A對人IgG結(jié)合強(qiáng)）；②純度要求（選低非特異性結(jié)合的重組配基樹脂）；③生產(chǎn)規(guī)模（高DBC樹脂）；④洗脫條件（溫和酸性避免變性）；⑤再生性能（耐NaOH樹脂）；⑥法規(guī)要求（cGMP可追溯）。答案匯總一、1.蛋白A2.動(dòng)態(tài)3.分子量大小4.烷基/芳基5.埃（?）/納米（nm）6.磺酸基（-SO3H）7.NaOH溶液8.小9.動(dòng)態(tài)結(jié)合容量（DBC）10.可追溯性二、1.A2.A3.C4.B5.A6.A