ICS65.020.20

CCSB05

21

遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB21/TXXXX—2024

液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

第5部分：紅托竹蓀

Technicalregulationsforthepreparationofliquidspawn

Part5:Hongtuozhusun

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB21/TXXXX—2024

液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

第5部分：紅托竹蓀

1范圍

本文件規(guī)定了紅托竹蓀（學(xué)名為紅托鬼筆，Phallusrubrovolvatus(M.Zang,D.G.Ji&X.X.Liu)Kreisel）

液體菌種的術(shù)語和定義、生產(chǎn)基本要求、生產(chǎn)工藝流程、搖瓶液體菌種生產(chǎn)技術(shù)、發(fā)酵罐菌種生產(chǎn)技術(shù)、

放罐接種等內(nèi)容。

本文件適用于紅托竹蓀液體菌種的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB150壓力容器

GB4789.28食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范

GB/T12728食用菌術(shù)語

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范

NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求

NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程

3術(shù)語和定義

GB/T12728和NY/T528界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

紅托竹蓀Phallusrubrovolvatus(M.Zang,D.G.Ji&X.X.Liu)Kreisel

紅托竹蓀（學(xué)名為紅托鬼筆，Phallusrubrovolvatus(M.Zang,D.G.Ji&X.X.Liu)Kreisel），又稱織金

竹蓀，隸屬真菌門Eumycota、擔(dān)子菌亞門Basidiomycotina、腹菌綱Gasteromycetes、鬼筆目Phallales、鬼

筆科Phallaceae、鬼筆屬Phallus。

3.2

固體菌種solidspawn

在玻璃試管、培養(yǎng)皿或聚丙烯瓶等固體培養(yǎng)基內(nèi)生長的純食用菌菌絲體培養(yǎng)物。

3.3

1

DB21/TXXXX—2024

液體菌種liquidspawn

用于生產(chǎn)和銷售的菌絲體及其生長基質(zhì)組成的液體繁殖材料，包括搖瓶液體菌種、發(fā)酵罐液體菌種。

3.4

液體菌種發(fā)酵罐cultivationapparatusforliquidspawn

進(jìn)行液體菌種培養(yǎng)的專用發(fā)酵設(shè)備，應(yīng)符合GB150要求。

3.5

發(fā)酵罐空消emptyfermentersterilization

對尚未加水投料的空發(fā)酵罐進(jìn)行高壓滅菌。

3.6

發(fā)酵罐實消fermentersterilization

對投料后的發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

3.7

罐壓jarpressure

在液體菌種發(fā)酵制備過程中發(fā)酵罐內(nèi)保持的空氣壓力（表壓），單位：MPa。

3.8

通風(fēng)量ventilationvolume

液體菌種培養(yǎng)過程中每分鐘通入發(fā)酵罐中無菌空氣體積與發(fā)酵罐實際料液體積的比例。用V/V表

示。

4生產(chǎn)技術(shù)要求

4.1人員要求

具有食用菌菌種生產(chǎn)從業(yè)資格的人員，包括檢驗人員，操作符合NY/T1731要求。

4.2場地環(huán)境要求

生產(chǎn)場地符合NY/T528的要求，場地開闊、交通方便、水源和電源充足、路面硬化、衛(wèi)生清潔、

排水良好，遠(yuǎn)離畜禽養(yǎng)殖場、排污口、工礦業(yè)“三廢”及微生物、煙塵和粉塵等污染源。

4.3生產(chǎn)車間要求

液體菌種生產(chǎn)車間應(yīng)包含原料庫、配料間、滅菌室、冷卻間、接種間、培養(yǎng)室、化驗室、菌種室等，

并配備相應(yīng)設(shè)施設(shè)備，規(guī)模配套，布局合理，設(shè)計符合GB50073要求。車間地面要具備防水、防腐、

防滲漏、防滑性能，易清洗，應(yīng)有1.0°~1.5°的排水坡度和良好的排水系統(tǒng)。墻壁和天花板應(yīng)具有防潮、

防霉、防水性能。門窗應(yīng)設(shè)置防蚊蠅紗網(wǎng)。車間安裝排氣管道或者排風(fēng)設(shè)備。車間設(shè)封閉式廢物桶。

4.4主要生產(chǎn)設(shè)備要求

2

DB21/TXXXX—2024

應(yīng)具有磅秤、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、發(fā)酵罐、液體菌種接種器、超凈工作臺、調(diào)溫設(shè)備、除濕設(shè)

備、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫?fù)u床或磁力攪拌器、冰箱、顯微鏡等滅菌設(shè)備及常規(guī)用具。壓力容器應(yīng)經(jīng)政府有

關(guān)部門檢驗合格，符合GB150要求。應(yīng)具有備用電源。

4.5生產(chǎn)原料

化學(xué)試劑類、生物制劑及天然材料類應(yīng)符合NY/T528要求，同時水不溶物物料需過40目篩；生

產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749要求。

5生產(chǎn)工藝流程

工藝流程見圖1

圖1液體菌種生產(chǎn)工藝流程

6母種制備

按照附錄A.1配方制備培養(yǎng)基，母種培養(yǎng)操作流程應(yīng)符合NY/T528要求，并按NY/T1846規(guī)定抽

樣，進(jìn)行感官檢驗和菌絲微觀特征檢驗，合格菌種進(jìn)入生產(chǎn)流程。母種質(zhì)量要求符合NY/T1742關(guān)于母

種質(zhì)量的規(guī)定。

7搖瓶液體菌種生產(chǎn)技術(shù)

7.1液體培養(yǎng)基的制作

7.1.1培養(yǎng)基配制與分裝

按照附錄A.2配方配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)物料先用水?dāng)嚢杈鶆蚝?，裝入搖瓶中，裝液量為150mL/500mL，

瓶口用12~16層紗布塞封口，外用15cm×15cm聚丙烯膜或牛皮紙包扎，并用線繩扎緊。

7.1.2滅菌

將分裝好的三角瓶放入滅菌鍋內(nèi)，鍋內(nèi)留有一定的空隙。檢查鍋內(nèi)水位，立即滅菌。滅菌蒸汽壓力

升至0.1MPa~0.12MPa，溫度達(dá)121℃時，滅菌30min。

3

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7.1.3冷卻

將滅菌后的液體培養(yǎng)基放入超凈工作臺中，冷卻至室溫。

7.2接種

在超凈工作臺中嚴(yán)格按無菌操作規(guī)程，將合格的母種斜面菌絲體切割成（3~5）mm×（3~5）mm

的菌塊，接種到已冷卻的搖瓶液體培養(yǎng)基中，每150mL液體培養(yǎng)基中接入20塊~30塊。接種完成后及

時貼好標(biāo)簽，即為一級液體菌種。取檢測合格的一級液體菌種，按照10%的接種量接入搖瓶液體培養(yǎng)

基中，培養(yǎng)可制備二級液體菌種。

7.3培養(yǎng)

菌種培養(yǎng)溫度26℃，避光振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速150r/min。每日檢查生長狀態(tài)，及時檢出不合格菌

種。

搖瓶靜置1min后，菌絲球體積占比液體培養(yǎng)基體積的80%以上，可結(jié)束培養(yǎng)。培養(yǎng)時間約為15d

左右。

7.4搖瓶菌種檢驗

期間每天觀察，及時去除污染菌種。培養(yǎng)液應(yīng)澄清透明，無雜菌、無異味；鏡檢無雜菌、菌絲形態(tài)

正常；菌絲球、菌絲片段密集，菌球均勻懸浮于液體培養(yǎng)基中不分層。

7.5入庫與記錄

完成培養(yǎng)的搖瓶液體菌種應(yīng)登記入庫。搖瓶液體菌種生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。

7.6留樣

菌種應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個批號3份~5份，于4℃下貯存，貯存至經(jīng)發(fā)酵罐菌種轉(zhuǎn)接

的菌棒出菇結(jié)束為止。

8發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)

8.1空氣過濾器的檢查

使用前應(yīng)拆分檢查空氣過濾器濾芯，要求無油污、料污、無破損，外殼內(nèi)外壁要求無污物、光亮潔

凈。

8.2發(fā)酵罐檢查與清洗

檢查罐上全部閥門、壓力表，要求完好、工作正常。對罐體內(nèi)、外和全部閥門用流水進(jìn)行沖洗，達(dá)

到無死角、內(nèi)壁無任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。

8.3空消滅菌

發(fā)酵罐空消條件：罐體壓力0.120Mpa~0.140Mpa、溫度達(dá)121℃~126℃時，高壓蒸汽滅菌30min。

4

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發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置、更換品種等情況出現(xiàn)其一時，需進(jìn)行間歇空消，即空消一

次后間隔2h~3h再空消一次。

8.4投料定容

將配制好的液體培養(yǎng)基原料充分溶解，加適量溫水?dāng)嚢杈鶆?，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，加水定容

至所需體積（液體培養(yǎng)基占罐體總?cè)莘e的70%），擰緊上料口蓋。

8.5實消與冷卻

投料定容完成后，利用外源蒸汽實消滅菌。滅菌條件：罐壓0.120Mpa~0.140Mpa、滅菌溫度121℃，

滅菌時間30min。

實消滅菌結(jié)束后將冷水通入發(fā)酵罐夾層或者內(nèi)置冷卻系統(tǒng)中循環(huán)，使液體培養(yǎng)基降溫至26℃以下。

降溫過程中及時向發(fā)酵罐內(nèi)通無菌空氣防止罐壓回零。

8.6接種

利用火焰保護(hù)接種法接入搖甁菌種，接種量為5~10%。把火圈放在投料口的上方點(diǎn)燃，此時打開

進(jìn)料口蓋，把搖瓶液體菌種迅速投入罐中，迅速蓋好進(jìn)料口蓋、擰緊。移走火焰圈，液體菌種進(jìn)入培養(yǎng)

階段。

8.7培養(yǎng)

培養(yǎng)時控制進(jìn)氣閥的無菌空氣通風(fēng)量1：1V/V、罐壓保持在0.02Mpa~0.05Mpa之間、培養(yǎng)溫度

26℃。培養(yǎng)約10d后，發(fā)酵罐菌種即可達(dá)到放罐指標(biāo)。

8.8留樣、取樣及檢測

8.8.1留樣、取樣

留存搖瓶液體菌種樣品，發(fā)酵罐滅菌后的空白培養(yǎng)基樣品，定期取樣，進(jìn)行鏡檢和無菌檢測，上述

樣品應(yīng)放4℃冰箱內(nèi)保存一周以上。

8.8.2檢測

培養(yǎng)過程中定期從發(fā)酵罐中取出樣品應(yīng)及時鏡檢與無菌檢測，同時確定菌絲生長發(fā)育狀態(tài)與排除雜

菌污染。

a)按照GB4789.28中的規(guī)定，接種后置于28℃~30℃恒溫培養(yǎng)24h~48h，觀察是否有細(xì)菌污染，同時

進(jìn)行鏡檢和感官檢測。

b)按照GB4789.28中的規(guī)定，接種后置于23℃~25℃恒溫培養(yǎng)48h~72h，觀察是否有霉菌污染，同時

進(jìn)行鏡檢和感官檢測。

8.9發(fā)酵罐菌種放罐指標(biāo)

發(fā)酵罐菌種放罐感官與理化指標(biāo)見附錄B。

9放罐接種

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液體菌種達(dá)到放罐指標(biāo)并經(jīng)鏡檢等檢驗合格后即可放罐。使用液體菌種接種器將液體菌種注入菌棒。

按照接種器接種規(guī)程，接種動作迅速、準(zhǔn)確，接種量為25mL~30mL/菌棒（17cm×33cm）。

10液體菌種臨時儲存

液體菌種生產(chǎn)后應(yīng)及時使用，如不能及時使用，需進(jìn)行儲存。在發(fā)酵罐內(nèi)通入無菌空氣，保持罐壓

0.02Mpa~0.05Mpa時，料溫4℃保存小于6d。

11記錄與存檔

母種、搖瓶液體菌種和發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)的每個環(huán)節(jié)（如：滅菌、培養(yǎng)、檢測環(huán)節(jié)）都要有詳實

的記錄，由具體操作人員現(xiàn)場填寫，定期審核，簽字后歸檔保存，檔案應(yīng)保存3年以上。

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附錄A（資料性）

紅托竹蓀液體菌種培養(yǎng)基建議配方

A.1母種培養(yǎng)基配方（1L）：

柞木屑20g（小于40目，加水1.1~1.2L煮沸15~20min，4層紗布過濾）、葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷

酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、瓊脂20g，加水定容至1L，pH自然。

A.2液體培養(yǎng)基配方（1L）：

柞木屑40g（小于40目，加水1.1~1.2L煮沸15~20min，4層紗布過濾），紅糖30g，蛋白胨3g，

磷酸二氫鉀2.0g，硫酸鎂1.0g，加水定容至1L，pH自然。

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附錄B（規(guī)范性）

放罐指標(biāo)

放罐感官指標(biāo)參見表B.1，放罐理化指標(biāo)參見表B.2。

表B.1放罐感官指標(biāo)

項目要求

菌液色澤菌絲球或菌絲片段呈淡黃色，菌液呈淡黃色至淺棕色

菌液形態(tài)菌液粘稠、半透明，菌絲球、菌絲片段均勻懸浮于液體中，不分層

有紅托竹蓀液體培養(yǎng)時特有的香氣，無酸、臭等異味，發(fā)酵罐排氣口氣味

菌液氣味

正常，無明顯改變

表B.2放罐理化指標(biāo)

理化指標(biāo)要求

pH