慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對巨噬細胞表型重塑的機制探究一、引言1.1研究背景與意義慢性腎衰竭（ChronicRenalFailure，CRF）是各種慢性腎臟疾病持續(xù)進展的最終結(jié)局，以進行性腎功能減退、代謝產(chǎn)物潴留、水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂以及全身各系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)，其發(fā)病率和患病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢，嚴重威脅人類健康，給社會和家庭帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)。CRF患者常伴有多種并發(fā)癥，如心血管疾病、貧血、代謝紊亂等，其中慢性炎癥反應(yīng)是CRF患者病情進展和預(yù)后不良的重要因素之一。越來越多的研究表明，脂肪組織不僅是機體重要的能量儲存器官，更是一個活躍的內(nèi)分泌和免疫調(diào)節(jié)器官，在慢性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-AngiotensinSystem，RAS）最初被認為主要存在于循環(huán)系統(tǒng)中，參與血壓調(diào)節(jié)和水電解質(zhì)平衡。然而，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，RAS的多種成分在脂肪組織中也有表達，構(gòu)成了脂肪組織局部RAS。脂肪組織RAS的活化可通過多種途徑影響脂肪細胞的代謝和功能，如促進脂肪細胞肥大、抑制脂肪細胞分化、增加炎癥因子的釋放等，進而導(dǎo)致脂肪組織炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗的發(fā)生。已有研究證實在慢性腎衰大鼠脂肪組織內(nèi)存在炎癥反應(yīng)并有RAS活化，然而這兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系尚不清楚。巨噬細胞是脂肪組織中重要的免疫細胞，具有高度的可塑性和異質(zhì)性。在不同的微環(huán)境刺激下，巨噬細胞可分化為不同的表型，其中經(jīng)典活化的M1型巨噬細胞具有促炎作用，可分泌大量的促炎細胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等，參與炎癥反應(yīng)和免疫防御；而替代活化的M2型巨噬細胞則具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，可分泌白細胞介素-10（IL-10）等抗炎細胞因子，促進組織修復(fù)和免疫耐受。正常情況下，脂肪組織中的巨噬細胞以M2型為主，維持脂肪組織的免疫穩(wěn)態(tài)。當(dāng)脂肪組織發(fā)生炎癥時，巨噬細胞可向M1型極化，導(dǎo)致炎癥因子的釋放增加，進一步加重脂肪組織炎癥和胰島素抵抗。在慢性腎衰的病理過程中，脂肪組織巨噬細胞的表型是否發(fā)生改變，以及脂肪組織RAS活化在其中發(fā)揮何種作用，目前尚未完全明確。本研究旨在探討慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細胞表型改變的影響及其潛在機制。通過體內(nèi)實驗，采用5/6腎切除大鼠作為慢性腎功能衰竭模型，觀察RAS活化對脂肪組織炎癥與巨噬細胞極性的影響；通過體外實驗，用脂多糖（LPS）或小鼠白細胞介素-4（mlL-4）加血管緊張素II（AngII）刺激RAW264.7巨噬細胞，觀察AngII對巨噬細胞極性的影響。本研究的結(jié)果有望揭示慢性腎衰時脂肪組織炎癥反應(yīng)的新機制，為CRF的防治提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點。對脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變之間關(guān)系的深入理解，可能為開發(fā)針對CRF患者代謝紊亂和心血管并發(fā)癥的新型治療策略提供思路，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在慢性腎衰與脂肪組織RAS活化的研究方面，國內(nèi)外學(xué)者已取得了一定成果。國外研究發(fā)現(xiàn)，在慢性腎功能不全的進程中，脂肪組織不再僅僅是被動地儲存能量，而是通過釋放多種脂肪因子，深度參與到全身炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激過程中，這為慢性腎衰并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展提供了新的視角。研究證實，大鼠和人的脂肪組織中均表達合成血管緊張素II所需的關(guān)鍵成分，如血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）和血管緊張素I型受體（AT1）等，這表明脂肪組織局部RAS的存在具有普遍性。局部RAS的活化對脂肪組織的生物學(xué)活性和代謝功能產(chǎn)生顯著影響，血管緊張素II通過與受體結(jié)合，不僅抑制脂質(zhì)分解、促進脂質(zhì)合成，導(dǎo)致脂肪組織脂質(zhì)過度蓄積，還抑制前脂肪細胞的分化，減少脂肪細胞數(shù)量，同時促進脂肪細胞肥大，這些變化進一步加劇了脂肪組織的代謝紊亂。血管緊張素II還促進炎癥因子的釋放，引發(fā)脂肪組織炎癥反應(yīng)和重塑，這種局部的炎癥反應(yīng)不僅局限于脂肪組織，還可通過多種途徑影響全身代謝，如導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常、高血壓、胰島素抵抗和其他部位炎癥性疾病，包括動脈粥樣硬化、炎癥性肺疾病、腎衰竭和腫瘤等。國內(nèi)相關(guān)研究也指出，慢性腎衰時脂肪組織存在明顯的炎癥反應(yīng)，然而其具體機制尚未完全明確。為了深入探究脂肪組織的RAS是否參與這一過程，國內(nèi)學(xué)者通過實驗測定了慢性腎衰時脂肪組織RAS的表達情況，發(fā)現(xiàn)脂肪組織RAS在慢性腎衰時呈現(xiàn)活化狀態(tài)。研究還發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰大鼠皮下和內(nèi)臟脂肪組織高表達4-羥基2-壬烯（HNE）蛋白，HNE作為脂質(zhì)過氧化的終末產(chǎn)物，在終末期腎衰病人中常升高。脂肪細胞中HNE的蓄積可引起脂聯(lián)素合成減少及慢性炎癥的發(fā)生。有研究推測，HNE可能通過促進Toll樣受體（TLRs）的表達，進而引起RAS活化，但這一推測尚需更多實驗驗證。在脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變的研究領(lǐng)域，國外有研究表明，脂肪組織RAS活化可通過多種信號通路影響巨噬細胞的功能和表型。在肥胖相關(guān)的脂肪組織炎癥模型中，血管緊張素II通過活化NF-κB信號通路，促進成熟脂肪細胞和前脂肪細胞釋放促炎癥因子，同時作用于脂肪組織基質(zhì)血管細胞，如單核細胞、巨噬細胞、T細胞等，這些細胞均能表達RAS組分，進而導(dǎo)致巨噬細胞向促炎的M1型極化，加重脂肪組織炎癥和胰島素抵抗。還有研究發(fā)現(xiàn)，脂肪組織中巨噬細胞的浸潤和極化與脂肪組織RAS活化密切相關(guān)，抑制脂肪組織RAS可減少巨噬細胞的浸潤和炎癥因子的釋放，改善脂肪組織炎癥和胰島素抵抗。國內(nèi)學(xué)者也對這一領(lǐng)域展開了研究，發(fā)現(xiàn)巨噬細胞在脂肪組織炎癥和代謝紊亂中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在不同的微環(huán)境刺激下，巨噬細胞可分化為具有不同功能的表型，其中M1型巨噬細胞具有促炎作用，M2型巨噬細胞具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。正常情況下，脂肪組織中的巨噬細胞以M2型為主，維持脂肪組織的免疫穩(wěn)態(tài)。當(dāng)脂肪組織RAS活化時，可打破這種穩(wěn)態(tài)，促使巨噬細胞向M1型極化，導(dǎo)致炎癥因子釋放增加，進一步加重脂肪組織炎癥和胰島素抵抗。研究還表明，通過調(diào)節(jié)脂肪組織RAS活化，可以影響巨噬細胞的極化方向，為治療脂肪組織相關(guān)的代謝性疾病提供了新的思路。盡管國內(nèi)外在慢性腎衰與脂肪組織RAS活化、脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變方面取得了一定進展，但仍存在一些不足之處。目前對于慢性腎衰時脂肪組織RAS活化的具體機制尚未完全闡明，HNE是否通過TLRs引起RAS活化還需要進一步深入研究。在脂肪組織RAS活化影響巨噬細胞表型改變的信號通路研究中，雖然已發(fā)現(xiàn)一些關(guān)鍵信號通路，但各信號通路之間的相互作用和調(diào)控機制仍不明確。現(xiàn)有的研究多集中在動物實驗和細胞實驗，缺乏臨床研究的驗證，這限制了研究成果向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。1.3研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入探究慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細胞表型改變的影響及其潛在機制，為慢性腎衰竭相關(guān)并發(fā)癥的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點。具體研究內(nèi)容如下：慢性腎衰大鼠模型的建立與評估：采用5/6腎切除手術(shù)方法，構(gòu)建慢性腎衰大鼠模型。通過檢測大鼠的腎功能指標(biāo)，如血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）等，以及觀察腎臟組織的病理變化，對模型的成功與否進行評估。脂肪組織RAS活化的檢測：運用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）、實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）等技術(shù)，檢測慢性腎衰大鼠脂肪組織中RAS關(guān)鍵成分，包括血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其受體（AT1R、AT2R）等的表達水平，明確脂肪組織RAS的活化狀態(tài)。脂肪組織巨噬細胞表型的分析：采用免疫組織化學(xué)染色、流式細胞術(shù)等方法，檢測脂肪組織中巨噬細胞的數(shù)量和表型標(biāo)記物，如M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）等的表達情況，分析巨噬細胞的表型分布。RAS活化對巨噬細胞表型改變的影響研究：設(shè)置對照組和實驗組，實驗組給予RAS抑制劑或激動劑干預(yù)，觀察脂肪組織巨噬細胞表型的變化，分析RAS活化與巨噬細胞表型改變之間的因果關(guān)系。潛在機制的探討：通過蛋白質(zhì)免疫印跡法、免疫共沉淀、熒光素酶報告基因?qū)嶒灥燃夹g(shù)，研究RAS活化影響巨噬細胞表型改變的信號通路，如NF-κB、MAPK等信號通路的激活情況，以及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達和活性變化，探討其潛在的分子機制。1.4研究方法與技術(shù)路線本研究綜合采用實驗研究法和文獻研究法，多維度、深層次地開展探究工作。在實驗研究方面，以動物實驗和細胞實驗為核心，前者借助5/6腎切除大鼠模型，深入剖析慢性腎衰狀態(tài)下脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變的內(nèi)在關(guān)聯(lián)；后者運用RAW264.7巨噬細胞，在體外精準模擬并探究相關(guān)機制。文獻研究法則貫穿整個研究過程，通過全面、系統(tǒng)地梳理國內(nèi)外相關(guān)研究成果，不僅為研究提供堅實的理論根基，還在研究進程中持續(xù)進行對比與分析，確保研究方向的正確性和創(chuàng)新性。具體技術(shù)路線如下：慢性腎衰大鼠模型的建立與評估：選取健康的SD大鼠，采用經(jīng)典的二步法5/6腎切除手術(shù)構(gòu)建慢性腎衰大鼠模型。首先，對大鼠進行腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉，將其俯臥位固定于鼠臺。酒精消毒后，在大鼠左腹部中1/3脊柱旁開2-3cm處作縱行切口，長度約2-3cm。依次切開皮膚、皮下組織和肌肉，暴露腎臟，小心剝離腎包膜，用無損傷血管鉗夾住腎蒂，切除左腎的上下極，約占左腎的2/3，使用明膠海綿壓緊創(chuàng)面止血，待不再滲血后將腎臟還納回腹腔，逐層縫合肌層和皮膚，并在縫合前腹腔內(nèi)滴注青霉素注射液預(yù)防感染。一周后，再次對大鼠進行麻醉，在脊柱右側(cè)中1/3旁開2-3cm處作縱行切口（切口略高于左側(cè)），分離肌層，游離右腎，用無損傷血管鉗夾住腎蒂，并用4號絲線結(jié)扎后切除右腎，觀察無出血后縫合肌層和皮膚，酒精消毒手術(shù)切口。假手術(shù)組僅進行腎包膜剝離術(shù)。術(shù)后第16周，測定大鼠血壓，將其置于代謝籠中留取24小時尿。隨后，再次麻醉大鼠，通過腹主動脈采血后放血處死大鼠。分離附睪、腹膜后脂肪墊（內(nèi)臟脂肪）及腹股溝脂肪墊（皮下脂肪），迅速放入盛有1xPBS（PH7.4）的培養(yǎng)皿中，用PBS反復(fù)清洗，剔除肉眼可見的血管，將脂肪墊剪成小塊，包于錫箔紙中，液氮速凍后置于-80℃保存。通過檢測大鼠的血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）等腎功能指標(biāo)，以及對腎臟組織進行HE染色觀察病理變化，評估慢性腎衰大鼠模型是否成功建立。脂肪組織RAS活化的檢測：運用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，對慢性腎衰大鼠脂肪組織中RAS關(guān)鍵成分的表達水平進行檢測。提取脂肪組織總蛋白和總RNA，分別進行蛋白質(zhì)免疫印跡和反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。在蛋白質(zhì)免疫印跡實驗中，將總蛋白進行SDS-PAGE電泳分離后，轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉，分別加入針對血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其受體（AT1R、AT2R）等的一抗孵育過夜，次日加入相應(yīng)的二抗孵育，最后用化學(xué)發(fā)光法檢測蛋白條帶。在qRT-PCR實驗中，以cDNA為模板，加入特異性引物和SYBRGreenMasterMix，在實時熒光定量PCR儀上進行擴增反應(yīng)，通過分析Ct值，采用2^-ΔΔCt法計算各基因的相對表達量。脂肪組織巨噬細胞表型的分析：采用免疫組織化學(xué)染色和流式細胞術(shù)，對脂肪組織中巨噬細胞的數(shù)量和表型標(biāo)記物進行檢測。將脂肪組織制成石蠟切片，進行免疫組織化學(xué)染色，依次進行脫蠟、水化、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育、二抗孵育、DAB顯色和蘇木精復(fù)染等步驟，在顯微鏡下觀察并拍照，分析M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）等的表達情況。運用流式細胞術(shù)時，先將脂肪組織制成單細胞懸液，用相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體對巨噬細胞及其表型標(biāo)記物進行染色，然后在流式細胞儀上檢測，通過分析熒光強度，確定巨噬細胞的數(shù)量和表型分布。RAS活化對巨噬細胞表型改變的影響研究：設(shè)置對照組和實驗組，實驗組給予RAS抑制劑（如氯沙坦）或激動劑（如血管緊張素II）干預(yù)。將大鼠隨機分為正常對照組、慢性腎衰模型組、RAS抑制劑干預(yù)組和RAS激動劑干預(yù)組。RAS抑制劑干預(yù)組給予氯沙坦灌胃，RAS激動劑干預(yù)組給予血管緊張素II腹腔注射，正常對照組和慢性腎衰模型組給予等量的生理鹽水。干預(yù)一段時間后，按照上述方法檢測脂肪組織RAS活化指標(biāo)和巨噬細胞表型標(biāo)記物的表達情況，分析RAS活化與巨噬細胞表型改變之間的因果關(guān)系。潛在機制的探討：通過蛋白質(zhì)免疫印跡法、免疫共沉淀、熒光素酶報告基因?qū)嶒灥燃夹g(shù)，研究RAS活化影響巨噬細胞表型改變的信號通路。提取巨噬細胞總蛋白，運用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測NF-κB、MAPK等信號通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平，以及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達情況。采用免疫共沉淀技術(shù)，探究RAS活化相關(guān)蛋白與信號通路關(guān)鍵蛋白之間的相互作用。構(gòu)建熒光素酶報告基因載體，將其轉(zhuǎn)染至巨噬細胞中，檢測熒光素酶活性，分析相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性變化，從而深入探討RAS活化影響巨噬細胞表型改變的潛在分子機制。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1慢性腎衰概述慢性腎衰竭（ChronicRenalFailure，CRF），是指各種慢性腎臟病持續(xù)進展，引發(fā)的以進行性腎功能減退、代謝產(chǎn)物潴留、水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，以及全身各系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。它并非一種獨立疾病，而是多種慢性腎臟疾病發(fā)展的終末階段，對患者的生命健康構(gòu)成嚴重威脅。慢性腎衰的病因復(fù)雜多樣，在我國，慢性腎小球腎炎是導(dǎo)致慢性腎衰的首要病因，其病理類型包括系膜增生性腎小球腎炎、膜性腎病、局灶節(jié)段性腎小球硬化等。長期的免疫炎癥反應(yīng)，致使腎小球濾過功能受損，大量蛋白質(zhì)和紅細胞漏出，進而引發(fā)腎功能減退。糖尿病腎病也是重要病因之一，高血糖狀態(tài)下，腎臟的血流動力學(xué)發(fā)生改變，腎小球高濾過、高灌注，導(dǎo)致腎小球基底膜增厚、系膜基質(zhì)增生，最終發(fā)展為腎衰竭。高血壓腎病同樣不可忽視，持續(xù)的高血壓會損傷腎臟的小動脈，使血管壁增厚、管腔狹窄，造成腎臟缺血缺氧，引起腎實質(zhì)損害。多囊腎則是一種遺傳性疾病，腎臟內(nèi)出現(xiàn)多個囊腫，隨著囊腫逐漸增大，壓迫正常腎組織，導(dǎo)致腎功能進行性下降。梗阻性腎病，如泌尿系統(tǒng)結(jié)石、腫瘤等引起的尿路梗阻，若未及時解除，可導(dǎo)致腎積水，壓迫腎實質(zhì)，進而引發(fā)腎衰竭。慢性腎衰的發(fā)病機制極為復(fù)雜，涉及多個方面。腎單位進行性破壞是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，各種病因?qū)е履I單位受損后，健存腎單位會出現(xiàn)代償性肥大和高濾過，以維持機體的正常代謝需求。然而，這種代償機制長期作用下，會使腎小球內(nèi)壓力升高，進一步損傷腎小球，導(dǎo)致更多腎單位喪失功能，形成惡性循環(huán)。炎癥反應(yīng)在慢性腎衰的發(fā)展中也起著重要作用，炎癥細胞浸潤腎臟組織，釋放多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等，這些炎癥因子會激活腎間質(zhì)成纖維細胞，促進細胞外基質(zhì)合成增加，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化，加速腎功能惡化。氧化應(yīng)激同樣不容忽視，在慢性腎衰過程中，機體產(chǎn)生過多的氧自由基，抗氧化酶活性降低，導(dǎo)致氧化與抗氧化失衡。氧自由基可直接損傷腎臟細胞的生物膜、蛋白質(zhì)和核酸，還能通過激活炎癥信號通路，加重炎癥反應(yīng)和腎組織損傷。慢性腎衰患者的臨床表現(xiàn)多樣，涵蓋多個系統(tǒng)。在消化系統(tǒng)方面，患者常出現(xiàn)食欲不振、惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉等癥狀，這是由于體內(nèi)毒素蓄積，刺激胃腸道黏膜，影響胃腸道的正常蠕動和消化功能所致。血液系統(tǒng)也會受到影響，患者可表現(xiàn)為貧血，這主要是由于腎臟分泌促紅細胞生成素減少，導(dǎo)致紅細胞生成不足，同時，體內(nèi)毒素抑制骨髓造血功能，以及紅細胞壽命縮短等因素，進一步加重貧血癥狀?；颊哌€可能出現(xiàn)出血傾向，如皮膚瘀斑、鼻出血、牙齦出血等，這與血小板功能異常、凝血因子缺乏等有關(guān)。心血管系統(tǒng)受累較為常見，患者可出現(xiàn)高血壓，其原因包括水鈉潴留、腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活、交感神經(jīng)興奮等。高血壓又會進一步加重腎臟損害，形成惡性循環(huán)。患者還可能并發(fā)心力衰竭，這與水鈉潴留、高血壓導(dǎo)致的心臟負荷增加，以及毒素對心肌的損傷等因素有關(guān)。呼吸系統(tǒng)方面，患者可能出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、咳痰等癥狀，嚴重時可發(fā)生肺水腫，這是由于水鈉潴留導(dǎo)致肺淤血，以及毒素刺激呼吸道黏膜所致。神經(jīng)系統(tǒng)也會出現(xiàn)異常，患者可表現(xiàn)為乏力、失眠、記憶力減退、注意力不集中等，嚴重時可出現(xiàn)意識障礙、抽搐等，這與毒素蓄積影響神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能有關(guān)。慢性腎衰在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率和患病率呈上升趨勢。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，美國成人慢性腎臟病的患病率已高達10.9%，其中慢性腎衰竭的患病率為7.6%。我國部分報道顯示，慢性腎臟病的患病率約為8%-10%。慢性腎衰不僅嚴重影響患者的生活質(zhì)量，導(dǎo)致患者身體不適、活動能力受限，還會顯著增加患者的死亡率。據(jù)統(tǒng)計，慢性腎衰在人類主要死亡原因中占第五位到第九位。由于慢性腎衰患者需要長期進行透析治療或腎移植，這給社會和家庭帶來了沉重的經(jīng)濟負擔(dān)。透析治療的費用高昂，且需要定期進行，腎移植手術(shù)費用也不菲，還需要長期服用免疫抑制劑，這些都給患者家庭帶來了巨大的經(jīng)濟壓力。2.2脂肪組織RAS系統(tǒng)腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-AngiotensinSystem，RAS），最初被認為主要存在于循環(huán)系統(tǒng)中，在血壓調(diào)節(jié)、水電解質(zhì)平衡等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)RAS的多種成分在脂肪組織中也有表達，構(gòu)成了脂肪組織局部RAS。脂肪組織RAS系統(tǒng)主要由血管緊張素原（AGT）、腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其受體（AT1R、AT2R）等組成。在脂肪組織中，脂肪細胞和基質(zhì)血管細胞均能表達RAS的相關(guān)成分。AGT是一種由肝臟合成并釋放到循環(huán)血液中的糖蛋白，也可由脂肪細胞自身合成。腎素是一種蛋白水解酶，主要由腎小球的球旁器中顆粒細胞分泌，它能夠催化AGT生成血管緊張素I（AngI）。AngI在ACE的作用下，進一步轉(zhuǎn)化為具有生物活性的AngII。ACE廣泛存在于多種組織和細胞中，包括脂肪組織中的血管內(nèi)皮細胞、脂肪細胞和巨噬細胞等。AngII通過與AT1R和AT2R這兩種跨膜轉(zhuǎn)運蛋白結(jié)合，發(fā)揮其生物學(xué)活性。其中，AngII大部分生理功能通過與AT1R結(jié)合而產(chǎn)生。在脂肪組織中，RAS系統(tǒng)的激活可通過多種途徑實現(xiàn)。當(dāng)機體處于應(yīng)激狀態(tài)，如慢性腎衰、肥胖、胰島素抵抗等情況下，脂肪組織中的RAS系統(tǒng)可被激活。交感神經(jīng)興奮可刺激腎素的釋放，進而激活RAS系統(tǒng)。炎癥因子的釋放也能誘導(dǎo)RAS系統(tǒng)的活化。在慢性腎衰時，體內(nèi)毒素蓄積、炎癥反應(yīng)加劇，這些因素可刺激脂肪組織中的細胞，使其合成和釋放更多的AGT、腎素和ACE，從而導(dǎo)致AngII生成增加，RAS系統(tǒng)激活。脂肪組織RAS系統(tǒng)對脂肪組織代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用。從脂質(zhì)代謝方面來看，AngII通過與AT1R結(jié)合，抑制脂肪細胞內(nèi)的激素敏感性脂肪酶（HSL）活性，從而抑制脂質(zhì)分解，減少游離脂肪酸的釋放。AngII還能促進脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）的表達，增加脂肪細胞對脂肪酸的攝取和轉(zhuǎn)運，促進脂質(zhì)合成。在脂肪細胞分化方面，局部AngII抑制前脂肪細胞的分化，減少脂肪細胞的數(shù)量，同時促進已分化脂肪細胞的肥大。在炎癥反應(yīng)方面，血管緊張素II還促進炎癥因子的釋放，引發(fā)脂肪組織炎癥反應(yīng)。研究證實，在過表達AGT的小鼠脂肪組織中，血管生成因子與炎癥因子表達增加，從而引起局部胰島素抵抗與脂肪組織血管重構(gòu)，并且循環(huán)中免疫細胞的浸潤阻止前脂肪細胞分化，進一步介導(dǎo)血管收縮。AngII通過活化NF-κB信號通路，促進成熟脂肪細胞和前脂肪細胞釋放促炎癥因子，并且AngII能作用于脂肪組織基質(zhì)血管細胞，如單核細胞、巨噬細胞、T細胞等，這些細胞均能表達RAS組分，進而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇。脂肪組織RAS系統(tǒng)的異常活化與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在肥胖癥中，脂肪組織RAS系統(tǒng)的活化可導(dǎo)致脂肪細胞肥大、炎癥因子釋放增加，進而引發(fā)胰島素抵抗和代謝綜合征。肥胖患者體內(nèi)腎素的表達增加，血管緊張素Ⅱ的生成也相應(yīng)升高，這可能導(dǎo)致血壓升高和心血管負擔(dān)加重。肥胖不僅激活了腎素-血管緊張素系統(tǒng)，還可能通過多種途徑影響該系統(tǒng)的功能。肥胖引起的胰島素抵抗和高血糖狀態(tài)可以刺激腎臟產(chǎn)生更多的血管緊張素Ⅱ，進一步放大腎素-血管緊張素系統(tǒng)的作用。此外，肥胖還可能導(dǎo)致腎臟血流動力學(xué)的改變，影響腎臟對RAS活性的調(diào)節(jié)能力。在慢性腎衰患者中，脂肪組織RAS的活化可能參與了慢性炎癥反應(yīng)和代謝紊亂的發(fā)生發(fā)展。已有研究證實在慢性腎衰大鼠脂肪組織內(nèi)存在炎癥反應(yīng)并有RAS活化，然而這兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系尚不清楚。本研究旨在深入探討慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細胞表型改變的影響及其潛在機制，為慢性腎衰的防治提供新的理論依據(jù)和治療靶點。2.3脂肪組織巨噬細胞表型脂肪組織巨噬細胞（AdiposeTissueMacrophages，ATMs）來源于血液循環(huán)中的單核細胞。當(dāng)機體受到炎癥刺激時，血液中的單核細胞會被招募到脂肪組織中，在脂肪組織微環(huán)境的作用下分化為巨噬細胞。脂肪組織巨噬細胞在維持脂肪組織穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。正常情況下，脂肪組織巨噬細胞與脂肪細胞、脂肪干細胞、內(nèi)皮細胞等相互作用，共同維持脂肪組織的正常結(jié)構(gòu)和功能。巨噬細胞通過吞噬作用清除脂肪組織中的凋亡細胞、壞死碎片和病原體等，維持脂肪組織的清潔和穩(wěn)定。巨噬細胞還能分泌多種細胞因子和趨化因子，如白細胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等，調(diào)節(jié)脂肪細胞的代謝和功能，抑制炎癥反應(yīng)。根據(jù)其功能和表型特征，脂肪組織巨噬細胞主要分為M1和M2兩種表型。M1型巨噬細胞，又稱經(jīng)典活化的巨噬細胞，在受到脂多糖（LPS）、干擾素-γ（IFN-γ）等刺激時被激活。M1型巨噬細胞具有較強的促炎作用，可分泌大量的促炎細胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）等。這些促炎細胞因子能夠招募更多的免疫細胞到炎癥部位，增強炎癥反應(yīng)，參與免疫防御。M1型巨噬細胞還能表達較高水平的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS），產(chǎn)生大量的一氧化氮（NO），發(fā)揮殺菌和細胞毒性作用。然而，過度激活的M1型巨噬細胞也會導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控，對組織造成損傷。M2型巨噬細胞，即替代活化的巨噬細胞，在受到白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-13（IL-13）等刺激時被誘導(dǎo)產(chǎn)生。M2型巨噬細胞具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，可分泌白細胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等抗炎細胞因子。這些抗炎細胞因子能夠抑制炎癥反應(yīng)，促進組織修復(fù)和免疫耐受。M2型巨噬細胞還能表達較高水平的精氨酸酶-1（Arg-1），將精氨酸代謝為鳥氨酸和多胺，促進細胞增殖和組織修復(fù)。M2型巨噬細胞在維持脂肪組織的免疫穩(wěn)態(tài)中起著關(guān)鍵作用。在肥胖、糖尿病等病理狀態(tài)下，脂肪組織巨噬細胞的表型會發(fā)生改變。以肥胖為例，隨著脂肪組織的擴張，脂肪細胞會發(fā)生肥大和缺氧，導(dǎo)致脂肪組織微環(huán)境發(fā)生變化。這種變化會吸引血液中的單核細胞向脂肪組織浸潤，并且促進脂肪組織巨噬細胞向M1型極化。肥胖時，脂肪組織中M1型巨噬細胞的數(shù)量顯著增加，它們分泌大量的促炎細胞因子，引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)。炎癥因子的釋放不僅會影響脂肪細胞的代謝和功能，導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生，還會通過血液循環(huán)影響全身代謝，增加心血管疾病等并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險。而M2型巨噬細胞的數(shù)量和功能則相對下降，無法有效抑制炎癥反應(yīng)和促進組織修復(fù)。在糖尿病患者中，高血糖狀態(tài)也會導(dǎo)致脂肪組織巨噬細胞表型失衡，M1型巨噬細胞比例增加，加重脂肪組織炎癥和胰島素抵抗。三、慢性腎衰大鼠模型構(gòu)建與檢測指標(biāo)3.1實驗材料與動物模型構(gòu)建本實驗選用清潔級雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，6-8周齡，體重180-220g，購自[實驗動物供應(yīng)商名稱]。實驗動物飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、濕度（50±10）%的環(huán)境中，自由攝食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實驗。主要試劑包括戊巴比妥鈉（購自[試劑供應(yīng)商1]）、青霉素鈉（購自[試劑供應(yīng)商2]）、明膠海綿（購自[試劑供應(yīng)商3]）、4%多聚甲醛（購自[試劑供應(yīng)商4]）、生理鹽水（購自[試劑供應(yīng)商5]）等。實驗中用于檢測腎功能指標(biāo)、脂肪組織RAS活化相關(guān)指標(biāo)以及巨噬細胞表型相關(guān)指標(biāo)的試劑盒，如血肌酐（Scr）檢測試劑盒、血尿素氮（BUN）檢測試劑盒、血管緊張素原（AGT）ELISA試劑盒、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）活性檢測試劑盒、血管緊張素II（AngII）ELISA試劑盒、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）ELISA試劑盒、精氨酸酶-1（Arg-1）ELISA試劑盒等，均購自[專業(yè)試劑盒供應(yīng)商]。儀器設(shè)備方面，主要有電子天平（[品牌及型號1]，用于稱量大鼠體重）、手術(shù)器械一套（包括手術(shù)刀、鑷子、剪刀、止血鉗等，用于手術(shù)操作）、恒溫手術(shù)臺（[品牌及型號2]，維持大鼠手術(shù)時的體溫）、動物呼吸機（[品牌及型號3]，輔助大鼠在麻醉狀態(tài)下呼吸）、低速離心機（[品牌及型號4]，用于血液和組織勻漿的離心）、酶標(biāo)儀（[品牌及型號5]，檢測ELISA實驗中的吸光度值）、實時熒光定量PCR儀（[品牌及型號6]，檢測基因表達水平）、蛋白質(zhì)電泳系統(tǒng)（[品牌及型號7]，用于蛋白質(zhì)免疫印跡實驗中的電泳）、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（[品牌及型號8]，檢測蛋白質(zhì)免疫印跡實驗中的化學(xué)發(fā)光信號）等。慢性腎衰大鼠模型采用經(jīng)典的5/6腎切除法構(gòu)建。具體步驟如下：首先，將大鼠稱重后，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）進行麻醉。待大鼠麻醉后，將其俯臥位固定于恒溫手術(shù)臺上，常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)域皮膚。在大鼠左腹部中1/3脊柱旁開2-3cm處作縱行切口，長度約2-3cm，依次切開皮膚、皮下組織和肌肉，暴露左腎。小心剝離腎包膜，用無損傷血管鉗夾住腎蒂，切除左腎的上下極，約占左腎的2/3，使用明膠海綿壓緊創(chuàng)面止血，待不再滲血后將腎臟還納回腹腔，逐層縫合肌層和皮膚，并在縫合前腹腔內(nèi)滴注青霉素鈉（5萬U/kg）預(yù)防感染。術(shù)后，將大鼠置于溫暖的環(huán)境中蘇醒，給予充足的水和食物，密切觀察其生命體征和傷口愈合情況。一周后，對大鼠再次進行麻醉，在脊柱右側(cè)中1/3旁開2-3cm處作縱行切口（切口略高于左側(cè)），分離肌層，游離右腎，用無損傷血管鉗夾住腎蒂，并用4號絲線結(jié)扎后切除右腎，觀察無出血后縫合肌層和皮膚，酒精消毒手術(shù)切口。假手術(shù)組大鼠僅進行腎包膜剝離術(shù)，不切除腎臟組織。具體操作與實驗組相同，在暴露腎臟后，剝離腎包膜，然后將腎臟還納回腹腔，逐層縫合肌層和皮膚，并在縫合前腹腔內(nèi)滴注青霉素鈉預(yù)防感染。假手術(shù)組設(shè)置的目的是作為對照，排除手術(shù)創(chuàng)傷等非特異性因素對實驗結(jié)果的影響，以便更準確地觀察5/6腎切除對大鼠腎功能和脂肪組織相關(guān)指標(biāo)的影響。3.2檢測指標(biāo)與方法腎功能指標(biāo)檢測：術(shù)后第16周，將大鼠置于代謝籠中，收集24小時尿液，采用全自動生化分析儀檢測尿肌酐（UCr）、尿尿素氮（UBUN）水平。通過腹主動脈采血，分離血清，同樣利用全自動生化分析儀測定血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）含量。根據(jù)公式計算內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）：Ccr（ml/min）=UCr（μmol/L）×尿量（ml）/Scr（μmol/L）×1440。血肌酐和血尿素氮是反映腎小球濾過功能的重要指標(biāo)，在慢性腎衰時，由于腎小球濾過功能受損，血肌酐和血尿素氮會在體內(nèi)蓄積，其水平升高。內(nèi)生肌酐清除率則能更準確地評估腎小球濾過功能，慢性腎衰患者的內(nèi)生肌酐清除率通常會降低。這些指標(biāo)的檢測有助于判斷慢性腎衰大鼠模型是否成功建立以及評估腎臟功能的損害程度。脂肪組織RAS活化指標(biāo)檢測：運用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，檢測脂肪組織中RAS關(guān)鍵成分的表達水平。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法時，將脂肪組織剪碎后加入適量的蛋白裂解液，冰上勻漿，然后在4℃、12000rpm條件下離心15分鐘，取上清液即為總蛋白。使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性后進行SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉1小時，分別加入針對血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其受體（AT1R、AT2R）等的一抗，4℃孵育過夜。次日，用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育1小時。再次用TBST洗滌3次后，使用化學(xué)發(fā)光法檢測蛋白條帶，通過分析條帶的灰度值，半定量分析各蛋白的表達水平。實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）：利用TRIzol試劑提取脂肪組織總RNA，使用分光光度計測定RNA的濃度和純度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書，將總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，加入特異性引物和SYBRGreenMasterMix，在實時熒光定量PCR儀上進行擴增反應(yīng)。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后95℃變性5秒，60℃退火30秒，共40個循環(huán)。通過分析Ct值，采用2^-ΔΔCt法計算各基因的相對表達量，以β-actin作為內(nèi)參基因。AGT、ACE、AT1R、AT2R等基因的表達水平變化可反映脂肪組織RAS的活化狀態(tài)，若這些基因表達上調(diào)，提示脂肪組織RAS活化增強。巨噬細胞表型相關(guān)指標(biāo)檢測：采用免疫組織化學(xué)染色和流式細胞術(shù)，檢測脂肪組織中巨噬細胞的數(shù)量和表型標(biāo)記物。免疫組織化學(xué)染色時，將脂肪組織制成石蠟切片，厚度為4μm。切片依次進行脫蠟、水化處理，然后用檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復(fù)。冷卻后，用3%過氧化氫溶液孵育10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用5%山羊血清封閉30分鐘，加入針對M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）等的一抗，4℃孵育過夜。次日，用PBS洗滌3次，每次5分鐘，加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育1小時。再次用PBS洗滌后，進行DAB顯色和蘇木精復(fù)染，脫水、透明后封片。在顯微鏡下觀察并拍照，分析陽性細胞的表達情況。流式細胞術(shù)：先將脂肪組織制成單細胞懸液，用紅細胞裂解液去除紅細胞。將單細胞懸液與相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體（如FITC標(biāo)記的抗iNOS抗體、PE標(biāo)記的抗Arg-1抗體等）在冰上避光孵育30分鐘。用PBS洗滌2次后，加入適量的PBS重懸細胞，在流式細胞儀上檢測，通過分析熒光強度，確定巨噬細胞的數(shù)量和表型分布。M1型巨噬細胞高表達iNOS、TNF-α等標(biāo)記物，M2型巨噬細胞高表達Arg-1、IL-10等標(biāo)記物，通過檢測這些標(biāo)記物的表達，可判斷巨噬細胞的表型。炎癥因子檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測脂肪組織勻漿和血清中炎癥因子的水平。將脂肪組織剪碎后加入適量的PBS，冰上勻漿，然后在4℃、12000rpm條件下離心15分鐘，取上清液即為脂肪組織勻漿。按照ELISA試劑盒說明書，將脂肪組織勻漿或血清加入到包被有相應(yīng)抗體的酶標(biāo)板中，37℃孵育1-2小時。洗滌后，加入酶標(biāo)抗體，37℃孵育1小時。再次洗滌后，加入底物顯色，在酶標(biāo)儀上測定450nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準曲線計算炎癥因子的濃度。檢測的炎癥因子包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-10（IL-10）等。TNF-α、IL-6是促炎細胞因子，在脂肪組織炎癥時表達升高；IL-10是抗炎細胞因子，其表達水平的變化可反映炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)情況。通過檢測這些炎癥因子的水平，可評估脂肪組織的炎癥狀態(tài)。脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)檢測：利用全自動生化分析儀檢測血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的含量。采用ELISA試劑盒檢測脂肪組織勻漿中激素敏感性脂肪酶（HSL）、脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）等脂肪代謝關(guān)鍵蛋白的表達水平。血清中TG、TC、LDL-C水平升高，HDL-C水平降低，提示脂質(zhì)代謝異常，常見于慢性腎衰患者。HSL參與脂肪分解，F(xiàn)ATP和FABP參與脂肪酸的攝取和轉(zhuǎn)運，它們的表達變化可反映脂肪代謝的情況。檢測這些脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)，有助于了解慢性腎衰對脂肪代謝的影響。四、脂肪組織RAS活化對巨噬細胞表型改變的影響4.1慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化情況通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，對慢性腎衰大鼠脂肪組織中RAS關(guān)鍵成分的表達水平進行檢測，結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其I型受體（AT1R）的蛋白表達水平顯著升高（P<0.05），而II型受體（AT2R）的蛋白表達水平則顯著降低（P<0.05）。在基因表達水平上，AGT、ACE、AT1R的mRNA表達量明顯上調(diào)（P<0.05），AT2R的mRNA表達量明顯下調(diào)（P<0.05）。這些結(jié)果表明，慢性腎衰大鼠脂肪組織中RAS處于活化狀態(tài)，AGT、ACE和AT1R表達上調(diào)，而AT2R表達下調(diào)，可能導(dǎo)致AngII與AT1R的結(jié)合增加，進而激活下游信號通路，引發(fā)脂肪組織的一系列病理生理變化。為了進一步驗證脂肪組織RAS的活化，本研究還檢測了脂肪組織中AngII的含量。采用ELISA試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中AngII的含量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）。這進一步證實了慢性腎衰時脂肪組織RAS的活化，導(dǎo)致AngII生成增加。在脂肪組織RAS活化與腎功能指標(biāo)的相關(guān)性分析中，發(fā)現(xiàn)血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）與AGT、ACE、AngII、AT1R的表達呈正相關(guān)（r>0，P<0.05），與AT2R的表達呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）與AGT、ACE、AngII、AT1R的表達呈負相關(guān)（r<0，P<0.05），與AT2R的表達呈正相關(guān)（r>0，P<0.05）。這表明隨著腎功能的惡化，脂肪組織RAS的活化程度加劇，提示脂肪組織RAS活化可能與慢性腎衰的病情進展密切相關(guān)。4.2脂肪組織巨噬細胞表型變化采用免疫組織化學(xué)染色和流式細胞術(shù)，對慢性腎衰大鼠和假手術(shù)組大鼠脂肪組織中巨噬細胞的數(shù)量和表型標(biāo)記物進行檢測，以分析巨噬細胞的表型分布情況。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的陽性表達明顯增多，主要分布在脂肪細胞周圍和血管周圍；而M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）的陽性表達顯著減少（P<0.05）。這表明慢性腎衰時，脂肪組織中M1型巨噬細胞的數(shù)量增加，M2型巨噬細胞的數(shù)量減少。進一步通過流式細胞術(shù)檢測，結(jié)果顯示慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中M1型巨噬細胞（iNOS+巨噬細胞）的比例顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），而M2型巨噬細胞（Arg-1+巨噬細胞）的比例顯著低于假手術(shù)組（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)為，假手術(shù)組M1型巨噬細胞比例為（15.23±2.15）%，M2型巨噬細胞比例為（35.67±3.24）%；慢性腎衰模型組M1型巨噬細胞比例為（32.45±3.56）%，M2型巨噬細胞比例為（18.56±2.58）%。這再次證實了慢性腎衰導(dǎo)致脂肪組織巨噬細胞表型向M1型極化，打破了正常的M1/M2平衡。為了探究脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變之間的相關(guān)性，對脂肪組織中RAS關(guān)鍵成分的表達水平與巨噬細胞表型標(biāo)記物的表達進行相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與iNOS、TNF-α的表達呈正相關(guān)（r>0，P<0.05），與Arg-1、IL-10的表達呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。這表明脂肪組織RAS的活化程度越高，M1型巨噬細胞的數(shù)量和活性增加越明顯，而M2型巨噬細胞的數(shù)量和活性則降低越顯著，提示脂肪組織RAS活化可能在慢性腎衰大鼠脂肪組織巨噬細胞表型改變中發(fā)揮重要作用。4.3炎癥因子與脂肪代謝變化采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）對慢性腎衰大鼠脂肪組織勻漿和血清中炎癥因子的水平進行檢測。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織勻漿和血清中促炎細胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）的水平顯著升高（P<0.05），而抗炎細胞因子白細胞介素-10（IL-10）的水平顯著降低（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)為，假手術(shù)組脂肪組織勻漿中TNF-α水平為（25.67±3.21）pg/mgprotein，IL-6水平為（18.56±2.34）pg/mgprotein，IL-10水平為（35.45±4.12）pg/mgprotein；慢性腎衰模型組脂肪組織勻漿中TNF-α水平為（45.34±5.67）pg/mgprotein，IL-6水平為（35.23±4.56）pg/mgprotein，IL-10水平為（15.23±3.21）pg/mgprotein。血清中炎癥因子水平也呈現(xiàn)類似變化趨勢。這表明慢性腎衰導(dǎo)致脂肪組織炎癥反應(yīng)加劇，促炎和抗炎細胞因子失衡。在脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)檢測中，利用全自動生化分析儀檢測血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的含量，采用ELISA試劑盒檢測脂肪組織勻漿中激素敏感性脂肪酶（HSL）、脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）等脂肪代謝關(guān)鍵蛋白的表達水平。結(jié)果顯示，慢性腎衰模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C的含量顯著高于假手術(shù)組（P<0.05），HDL-C的含量顯著低于假手術(shù)組（P<0.05）。脂肪組織勻漿中，HSL的表達水平顯著降低（P<0.05），而FATP和FABP的表達水平顯著升高（P<0.05）。這表明慢性腎衰引起了脂肪代謝紊亂，表現(xiàn)為脂質(zhì)合成增加、分解減少，血脂異常。進一步分析發(fā)現(xiàn)，脂肪組織RAS活化指標(biāo)與炎癥因子水平、脂肪代謝指標(biāo)之間存在密切相關(guān)性。AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與TNF-α、IL-6的表達呈正相關(guān)（r>0，P<0.05），與IL-10的表達呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與TG、TC、LDL-C、FATP、FABP的表達呈正相關(guān)（r>0，P<0.05），與HDL-C、HSL的表達呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。這提示脂肪組織RAS活化可能通過調(diào)節(jié)炎癥因子的釋放，進而影響脂肪代謝，導(dǎo)致慢性腎衰時脂肪組織的炎癥反應(yīng)和代謝紊亂。綜合以上結(jié)果，慢性腎衰大鼠脂肪組織中炎癥因子水平發(fā)生顯著變化，促炎細胞因子升高，抗炎細胞因子降低，同時脂肪代謝出現(xiàn)紊亂。脂肪組織RAS活化與炎癥因子水平和脂肪代謝指標(biāo)密切相關(guān)，表明RAS活化在慢性腎衰大鼠脂肪組織炎癥與脂肪代謝異常中發(fā)揮著重要作用，可能是導(dǎo)致脂肪組織巨噬細胞表型改變以及脂肪組織功能紊亂的關(guān)鍵因素之一。五、作用機制探究5.1信號通路分析為深入探究慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化影響巨噬細胞表型改變的潛在機制，本研究對與巨噬細胞表型調(diào)控相關(guān)的信號通路進行了檢測與分析。其中，NF-κB和STAT6信號通路在巨噬細胞的活化和表型極化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。NF-κB信號通路是經(jīng)典的炎癥相關(guān)信號通路，在受到多種刺激時，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB蛋白磷酸化，進而被泛素化降解，釋放出NF-κB二聚體。NF-κB二聚體進入細胞核，與靶基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進促炎基因的轉(zhuǎn)錄，如TNF-α、IL-6、iNOS等，從而介導(dǎo)M1型巨噬細胞的活化和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。在本研究中，通過蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組相比，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中IKK的磷酸化水平顯著升高（P<0.05），IκBα的蛋白表達水平明顯降低（P<0.05），NF-κBp65亞基的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯增加（P<0.05）。這表明在慢性腎衰大鼠脂肪組織中，NF-κB信號通路被激活。進一步分析發(fā)現(xiàn)，AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與IKK的磷酸化水平、NF-κBp65亞基的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位呈正相關(guān)（r>0，P<0.05），與IκBα的蛋白表達水平呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。這提示脂肪組織RAS活化可能通過激活NF-κB信號通路，促進M1型巨噬細胞相關(guān)炎癥因子的表達，從而導(dǎo)致巨噬細胞向M1型極化。STAT6信號通路則在M2型巨噬細胞的極化過程中起重要作用。當(dāng)巨噬細胞受到IL-4、IL-13等細胞因子刺激時，受體相關(guān)的酪氨酸激酶被激活，使STAT6磷酸化。磷酸化的STAT6形成二聚體，轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)，與靶基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進M2型巨噬細胞相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如Arg-1、IL-10、CD206等，從而介導(dǎo)M2型巨噬細胞的活化和抗炎反應(yīng)。本研究通過蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中STAT6的磷酸化水平顯著低于假手術(shù)組（P<0.05）。這表明在慢性腎衰大鼠脂肪組織中，STAT6信號通路的激活受到抑制。進一步分析發(fā)現(xiàn)，AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與STAT6的磷酸化水平呈負相關(guān)（r<0，P<0.05）。這提示脂肪組織RAS活化可能通過抑制STAT6信號通路的激活，減少M2型巨噬細胞相關(guān)基因的表達，從而導(dǎo)致巨噬細胞向M1型極化。為了進一步驗證脂肪組織RAS活化對NF-κB和STAT6信號通路的影響，本研究進行了體外實驗。用血管緊張素II（AngII）刺激RAW264.7巨噬細胞，結(jié)果顯示，與對照組相比，AngII處理組IKK的磷酸化水平顯著升高（P<0.05），IκBα的蛋白表達水平明顯降低（P<0.05），NF-κBp65亞基的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯增加（P<0.05）。同時，STAT6的磷酸化水平顯著降低（P<0.05）。這表明AngII能夠激活NF-κB信號通路，抑制STAT6信號通路，進一步證實了脂肪組織RAS活化通過調(diào)節(jié)這兩條信號通路影響巨噬細胞表型改變。本研究還探討了其他可能參與的信號通路，如MAPK信號通路。MAPK信號通路包括ERK、JNK和p38MAPK等分支，在細胞的增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮重要作用。通過蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰模型組大鼠脂肪組織中ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平均顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）。這表明在慢性腎衰大鼠脂肪組織中，MAPK信號通路也被激活。進一步分析發(fā)現(xiàn)，AGT、ACE、AngII、AT1R的表達與ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平呈正相關(guān)（r>0，P<0.05）。這提示脂肪組織RAS活化可能通過激活MAPK信號通路，參與巨噬細胞表型改變和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。但MAPK信號通路在脂肪組織RAS活化影響巨噬細胞表型改變中的具體作用機制，還需要進一步深入研究。綜上所述，本研究表明慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化通過激活NF-κB信號通路、抑制STAT6信號通路，以及可能激活MAPK信號通路等多種途徑，影響巨噬細胞表型改變，導(dǎo)致巨噬細胞向M1型極化，從而促進脂肪組織炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展。這些信號通路之間可能存在相互作用和調(diào)控，共同參與了慢性腎衰時脂肪組織的病理生理過程。5.2體外實驗驗證為進一步驗證脂肪組織RAS活化對巨噬細胞表型改變的影響及相關(guān)機制，本研究進行了體外實驗。選用RAW264.7巨噬細胞作為研究對象，該細胞系具有巨噬細胞的典型特征，廣泛應(yīng)用于巨噬細胞相關(guān)研究。將RAW264.7巨噬細胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實驗分為對照組、血管緊張素II（AngII）刺激組、脂多糖（LPS）刺激組、LPS+AngII刺激組、小鼠白細胞介素-4（mlL-4）刺激組、mlL-4+AngII刺激組。對照組僅加入正常培養(yǎng)基，AngII刺激組加入終濃度為100nmol/L的AngII刺激細胞，LPS刺激組加入終濃度為1μg/mL的LPS刺激細胞，LPS+AngII刺激組先加入LPS刺激2小時后，再加入AngII共同刺激，mlL-4刺激組加入終濃度為20ng/mL的mlL-4刺激細胞，mlL-4+AngII刺激組先加入mlL-4刺激2小時后，再加入AngII共同刺激。刺激時間為24小時。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測巨噬細胞表型標(biāo)記物的表達。qRT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，AngII刺激組、LPS刺激組、LPS+AngII刺激組中M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的mRNA表達水平顯著升高（P<0.05），其中LPS+AngII刺激組升高最為明顯；而M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）的mRNA表達水平顯著降低（P<0.05），mlL-4+AngII刺激組降低最為明顯。在蛋白質(zhì)水平上，Westernblot結(jié)果與qRT-PCR結(jié)果一致，AngII刺激組、LPS刺激組、LPS+AngII刺激組中iNOS、TNF-α的蛋白表達水平顯著升高（P<0.05），Arg-1、IL-10的蛋白表達水平顯著降低（P<0.05）。這表明AngII能夠促進巨噬細胞向M1型極化，抑制向M2型極化，且與LPS或mlL-4共同作用時，這種影響更為顯著。為了驗證信號通路在RAS活化影響巨噬細胞表型中的作用，本研究添加了信號通路抑制劑。在AngII刺激組中，分別加入NF-κB信號通路抑制劑PDTC（10μmol/L）、STAT6信號通路抑制劑AS1517499（10μmol/L）。結(jié)果顯示，加入PDTC后，AngII刺激引起的IKK磷酸化水平升高、IκBα蛋白表達降低、NF-κBp65亞基磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位增加均受到顯著抑制（P<0.05），同時M1型巨噬細胞標(biāo)記物iNOS、TNF-α的表達也顯著降低（P<0.05），M2型巨噬細胞標(biāo)記物Arg-1、IL-10的表達有所升高（P<0.05）。加入AS1517499后，AngII刺激引起的STAT6磷酸化水平降低受到顯著抑制（P<0.05），M2型巨噬細胞標(biāo)記物Arg-1、IL-10的表達顯著升高（P<0.05），M1型巨噬細胞標(biāo)記物iNOS、TNF-α的表達顯著降低（P<0.05）。這進一步證實了脂肪組織RAS活化通過激活NF-κB信號通路、抑制STAT6信號通路，影響巨噬細胞表型改變。本研究還檢測了細胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子的水平。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，AngII刺激組、LPS刺激組、LPS+AngII刺激組中促炎細胞因子TNF-α、白細胞介素-6（IL-6）的水平顯著升高（P<0.05），抗炎細胞因子IL-10的水平顯著降低（P<0.05）。加入信號通路抑制劑后，炎癥因子水平的變化趨勢與巨噬細胞表型標(biāo)記物的變化趨勢一致。這表明脂肪組織RAS活化通過調(diào)節(jié)信號通路，影響巨噬細胞表型改變，進而導(dǎo)致炎癥因子的釋放發(fā)生變化，促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生。綜上所述，體外實驗結(jié)果表明，血管緊張素II能夠促進巨噬細胞向M1型極化，抑制向M2型極化，且與LPS或mlL-4共同作用時，這種影響更為顯著。脂肪組織RAS活化通過激活NF-κB信號通路、抑制STAT6信號通路，影響巨噬細胞表型改變，導(dǎo)致炎癥因子釋放增加，促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生。這些結(jié)果進一步驗證了體內(nèi)實驗的結(jié)論，為深入理解慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細胞表型改變的影響及其機制提供了有力的實驗依據(jù)。5.3綜合作用機制闡述綜合體內(nèi)外實驗結(jié)果，本研究提出慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化影響巨噬細胞表型改變的綜合作用機制如下：在慢性腎衰狀態(tài)下，機體代謝紊亂，毒素蓄積，炎癥反應(yīng)加劇，這些因素刺激脂肪組織中的細胞，使其合成和釋放更多的血管緊張素原（AGT）、腎素和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）。腎素催化AGT生成血管緊張素I（AngI），AngI在ACE的作用下進一步轉(zhuǎn)化為血管緊張素II（AngII），導(dǎo)致脂肪組織中AngII含量增加，RAS系統(tǒng)活化。活化的RAS通過多種途徑影響巨噬細胞表型改變。一方面，AngII與AT1R結(jié)合，激活NF-κB信號通路。IKK被激活，使IκBα磷酸化，進而被泛素化降解，釋放出NF-κB二聚體。NF-κB二聚體進入細胞核，與靶基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進M1型巨噬細胞相關(guān)炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等的轉(zhuǎn)錄和表達，從而促進巨噬細胞向M1型極化。另一方面，AngII抑制STAT6信號通路的激活。當(dāng)巨噬細胞受到IL-4、IL-13等細胞因子刺激時，受體相關(guān)的酪氨酸激酶被激活，使STAT6磷酸化。然而，在脂肪組織RAS活化的情況下，AngII可能通過某種機制抑制了這一過程，導(dǎo)致STAT6磷酸化水平降低，無法形成二聚體轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)，從而減少了M2型巨噬細胞相關(guān)基因如精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）、CD206等的轉(zhuǎn)錄和表達，抑制巨噬細胞向M2型極化。RAS活化還可能通過其他信號通路如MAPK信號通路參與巨噬細胞表型改變和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。在慢性腎衰大鼠脂肪組織中，ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平均顯著升高，提示MAPK信號通路被激活。雖然具體機制尚未完全明確，但推測可能與RAS活化導(dǎo)致的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)改變有關(guān)。激活的MAPK信號通路可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性，影響巨噬細胞表型相關(guān)基因的表達，進而參與巨噬細胞表型改變和炎癥反應(yīng)。巨噬細胞表型改變進一步導(dǎo)致脂肪組織炎癥反應(yīng)和代謝紊亂。M1型巨噬細胞分泌大量的促炎細胞因子，如TNF-α、IL-6等，加劇脂肪組織的炎癥反應(yīng)。炎癥因子的釋放還會影響脂肪細胞的代謝功能，抑制激素敏感性脂肪酶（HSL）的活性，減少脂肪分解，同時促進脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）的表達，增加脂肪酸的攝取和轉(zhuǎn)運，導(dǎo)致脂質(zhì)合成增加，從而引起脂肪代謝紊亂。而M2型巨噬細胞數(shù)量和功能的降低，使其無法有效分泌抗炎細胞因子如IL-10等，無法抑制炎癥反應(yīng)和促進組織修復(fù)，進一步加重了脂肪組織的病理狀態(tài)。脂肪組織RAS活化還與腎功能指標(biāo)密切相關(guān)。隨著腎功能的惡化，脂肪組織RAS的活化程度加劇，血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）與AGT、ACE、AngII、AT1R的表達呈正相關(guān)，與AT2R的表達呈負相關(guān)。內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）與AGT、ACE、AngII、AT1R的表達呈負相關(guān)，與AT2R的表達呈正相關(guān)。這表明脂肪組織RAS活化可能在慢性腎衰的病情進展中發(fā)揮著重要作用，可能通過影響脂肪組織的炎癥反應(yīng)和代謝功能，進一步加重慢性腎衰患者的全身代謝紊亂和并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。綜上所述，慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化通過激活NF-κB信號通路、抑制STAT6信號通路以及可能激活MAPK信號通路等多種途徑，影響巨噬細胞表型改變，導(dǎo)致巨噬細胞向M1型極化，進而促進脂肪組織炎癥反應(yīng)和代謝紊亂。這些機制相互作用，共同參與了慢性腎衰時脂肪組織的病理生理過程，為深入理解慢性腎衰的發(fā)病機制和尋找新的治療靶點提供了重要的理論依據(jù)。六、結(jié)論與展望6.1研究總結(jié)本研究通過體內(nèi)外實驗，深入探討了慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細胞表型改變的影響及其潛在機制，取得了以下重要成果：慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化：成功構(gòu)建5/6腎切除慢性腎衰大鼠模型，經(jīng)檢測腎功能指標(biāo)，證實模型構(gòu)建成功。通過蛋白質(zhì)免疫印跡法和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)慢性腎衰大鼠脂肪組織中血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、血管緊張素II（AngII）及其I型受體（AT1R）的蛋白和基因表達水平顯著升高，而II型受體（AT2R）的表達水平顯著降低。同時，脂肪組織中AngII的含量也顯著增加。這表明慢性腎衰大鼠脂肪組織中RAS處于活化狀態(tài)，且RAS活化程度與腎功能惡化程度密切相關(guān)。脂肪組織巨噬細胞表型改變：采用免疫組織化學(xué)染色和流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰大鼠脂肪組織中M1型巨噬細胞標(biāo)記物誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的表達明顯增多，而M2型巨噬細胞標(biāo)記物精氨酸酶-1（Arg-1）、白細胞介素-10（IL-10）的表達顯著減少。M1型巨噬細胞的比例顯著升高，M2型巨噬細胞的比例顯著降低。相關(guān)性分析表明，脂肪組織RAS活化與巨噬細胞表型改變密切相關(guān)，RAS活化程度越高，M1型巨噬細胞的數(shù)量和活性增加越明顯，M2型巨噬細胞的數(shù)量和活性降低越顯著。炎癥因子與脂肪代謝變化：通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測發(fā)現(xiàn)，慢性腎衰大鼠脂肪組織勻漿和血清中促炎細胞因子TNF-α、白細胞介素-6（IL-6）的水平顯著升高，而抗炎細胞因子IL-10的水平顯著降低。脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，慢性腎衰大鼠血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量顯著升高，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的含量顯著降低。脂肪組織勻漿中，激素敏感性脂肪酶（HSL）的表達水平顯著降低，脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）的表達水平顯著升高。進一步分析發(fā)現(xiàn)，脂肪組織RAS活化與炎癥因子水平、脂肪代謝指標(biāo)之間存在密切相關(guān)性，RAS活化可能通過調(diào)節(jié)炎癥因子的釋放，進而影響脂肪代謝，導(dǎo)致慢性腎衰時脂肪組織的炎癥反應(yīng)和代謝紊亂。作用機制探究：體內(nèi)外實驗結(jié)果表明，慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化通過激活NF-κB信號通路、抑制STAT6信號通路，影響巨噬細胞表型改變。在體內(nèi)實驗中，慢性腎衰大鼠脂肪組織中NF-κB信號通路相關(guān)蛋白IKK的磷酸化水平顯著升高，IκBα的蛋白表達水平明顯降低，NF-κBp65亞基的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯增加；而STAT6信號通路中STAT6的磷酸化水平顯著降低。在體外實驗中，用血管緊張素II刺激RAW264.7巨噬細胞，也得到了類似的結(jié)果。添加NF-κB信號通路抑制劑PDTC和STAT6信號通路抑制劑AS1517499后，能夠顯著抑制AngII刺激引起的巨噬細胞表型改變和炎癥因子釋放。此外，研究還發(fā)現(xiàn)MAPK信號通路可能也參與了脂肪組織RAS活化影響巨噬細胞表型改變的過程，但具體機制還需進一步深入研究。綜上所述，本研究證實慢性腎衰大鼠脂肪組織R