急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測質(zhì)量管理專家共識2026國家疾病預(yù)防控制局自2024年開展全國急性呼吸道傳染病哨點監(jiān)測，旨在掌握流感、新型冠狀病毒感染等急性呼吸道傳染病流行規(guī)律及病原學(xué)特征，從而防范化解傳染病重大疫情風(fēng)險。為保證監(jiān)測科學(xué)規(guī)范、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠、網(wǎng)絡(luò)實驗室運行高效，來自疾病預(yù)防控制系統(tǒng)、哨點醫(yī)院、相關(guān)高校和科研院所等機構(gòu)的多學(xué)科領(lǐng)域?qū)＜?，結(jié)合國家監(jiān)測方案、技術(shù)指南、科研成果以及實踐經(jīng)驗，經(jīng)過多輪研討、調(diào)研、意見征詢等，形成了急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測質(zhì)量管理專家共識。該共識以構(gòu)建急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測全流程質(zhì)量控制體系為核心，內(nèi)容涵蓋監(jiān)測對象、樣本采集、運輸、分裝和保存、實驗室設(shè)施、設(shè)備管理、呼吸道多病原檢測、基因測序、檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證、實驗室生物安全、人員培訓(xùn)和考核、監(jiān)測數(shù)據(jù)管理和分析等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以期為我國急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測全流程質(zhì)量控制提供技術(shù)指導(dǎo)。急性呼吸道傳染病傳播速度快、流行范圍廣、新發(fā)病原體不斷出現(xiàn)，易造成大規(guī)模暴發(fā)流行，給人民生命健康造成重大損害，給社會經(jīng)濟(jì)造成巨大損失。新型冠狀病毒感染疫情后，不斷出現(xiàn)肺炎支原體、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒等病原體的高發(fā)流行，給當(dāng)前公共衛(wèi)生帶來持續(xù)挑戰(zhàn)。為掌握呼吸道傳染病病原體的流行規(guī)律，及早發(fā)現(xiàn)新發(fā)、突發(fā)呼吸道病原體和其導(dǎo)致的公共衛(wèi)生風(fēng)險，防范化解傳染病重大疫情風(fēng)險，國家疾病預(yù)防控制局于2024年印發(fā)了《全國急性呼吸道傳染病哨點監(jiān)測方案(試行)》(國疾控綜監(jiān)測發(fā)〔2024〕4號),在全國開展流感、新型冠狀病毒感染等多種急性呼吸道傳染病的哨點監(jiān)測，監(jiān)測急性呼吸道傳染病流行水平和趨勢、多種呼吸道病原體流行特征，以及部分重要病原體的基因變異變遷情況，監(jiān)測的病原體種類包括新型冠狀病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、人偏肺病毒、副流感病毒、普通冠狀病毒、博卡病毒、鼻病毒、腸道病毒、肺炎支原體、A族鏈球菌、百日咳鮑特菌、肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等，以期為呼吸道傳染病預(yù)警預(yù)測、疫情應(yīng)急處置、疫苗研發(fā)、藥物使用策略等提供重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐[13]。為保證監(jiān)測科學(xué)規(guī)范、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠、監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室運行高效，來自疾病預(yù)防控制系統(tǒng)、公共衛(wèi)生學(xué)院、科研院所、哨點醫(yī)院等單位的多學(xué)科領(lǐng)域?qū)＜?，結(jié)合國家監(jiān)測方案、相關(guān)技術(shù)指南、科研成果以及實踐經(jīng)驗，經(jīng)過多輪研討、調(diào)研、意見征詢等后，形成本專家共識，旨在為實現(xiàn)我國急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測的病例監(jiān)測、樣本采集、運輸、分裝和保存、樣本檢測、基因測序、檢測結(jié)果質(zhì)量保證、實驗室生物安全、監(jiān)測數(shù)據(jù)管理及分析利用等全流程質(zhì)量控制提供技術(shù)指導(dǎo)。一、共識制訂方法及適用范圍本共識由北京市疾病預(yù)防控制中心會同中國疾病預(yù)防控制中心、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院群醫(yī)學(xué)及公共衛(wèi)生學(xué)院、中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會公共衛(wèi)生監(jiān)測專業(yè)委員會、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物研究所、中國食品藥品檢定研究院、相關(guān)哨點醫(yī)院等多家機構(gòu)共同制訂。(一)共識制訂方法共識工作組：成立共識制定專家組，成員涵蓋流行病學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、病原生物學(xué)、實驗室檢測、質(zhì)量控制、實驗室生物安全等多個領(lǐng)域的專家。文獻(xiàn)檢索及共識形成過程：在國家疾病預(yù)防控制局政策引導(dǎo)下，通過檢索PubMed、中國知網(wǎng)等國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，以及國內(nèi)外機構(gòu)發(fā)布的相關(guān)文件、指南、方案，吸納我國“十一五”“十二五”“十三五”國家傳染病重大專項相關(guān)科研成果，總結(jié)北京等地區(qū)呼吸道傳染病多病原監(jiān)測實踐經(jīng)驗，撰寫共識初稿。共識制定專家組通過召開多輪工作會議，對共識初稿進(jìn)行深入研討、修改完善；隨后廣泛征求了省、市疾病預(yù)防控制中心、公共衛(wèi)生學(xué)院、海關(guān)、研究院所以及相關(guān)專業(yè)委員會等領(lǐng)域?qū)＜业囊庖?，并開展了共識度調(diào)查，最終形成了專家共識終稿。專家推薦程度：共識度調(diào)查專家對每一條共識進(jìn)行評分，1~5分別為非常不同意、不同意、中立、同意、非常同意。針對單條共識，以評分為5分的專家數(shù)量占參與評分專家數(shù)量的比例超過80%作為共識標(biāo)準(zhǔn)[4]。(二)共識適用范圍本共識適用于急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測的疾病預(yù)防控制人員、哨點醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員、實驗室檢驗檢測人員、實驗室質(zhì)量管理人員、傳染病監(jiān)測關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)人員、公共衛(wèi)生管理者與研究者。(三)利益沖突的聲明本共識制訂過程中，所有參與本共識專家研討會的專家和共識工作組成員均已簽署書面利益聲明，不存在共識相關(guān)的利益沖突。二、技術(shù)框架基于《全國急性呼吸道傳染病哨點監(jiān)測方案(試行)》(以下簡稱國家監(jiān)測方案)要求、相關(guān)科研成果及監(jiān)測實踐，為保障監(jiān)測科學(xué)規(guī)范、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，應(yīng)建立急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測質(zhì)量控制體系，實施監(jiān)測對象、樣本采集、樣本分裝、運輸和保存、樣本檢測、檢驗結(jié)果質(zhì)量保證、實驗室生物安全、人員培訓(xùn)和考核及監(jiān)測數(shù)據(jù)管理與分析利用等全流程質(zhì)量控制，為呼吸道傳染病監(jiān)測預(yù)警、疫情應(yīng)急處置、防控策略制訂提供重要技術(shù)支撐。監(jiān)測對象：哨點醫(yī)院的選擇、病例報告、采樣培訓(xùn)樣本采集：對象選擇、采樣質(zhì)量控制、樣本標(biāo)識與送檢要求樣本運輸：樣本包裝、運送時間、運輸溫度控制樣本分裝和保存：樣本接收、分裝操作、保存條件實驗室設(shè)施：實驗室分區(qū)、生物安全防護(hù)、意外事故應(yīng)急演練設(shè)備管理：檢測設(shè)備定期校準(zhǔn)、維護(hù)記錄呼吸道多病原檢測：樣本檢測、原微生物檢測、結(jié)果判讀檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證：內(nèi)部質(zhì)量控制、外部質(zhì)量控制、盲樣考核人員培訓(xùn)和考核：哨點醫(yī)院培訓(xùn)、網(wǎng)絡(luò)實驗室培訓(xùn)、定期考核監(jiān)測數(shù)據(jù)管理和分析：監(jiān)測信息的描述性分析、統(tǒng)計學(xué)分析、數(shù)據(jù)共享共識1:監(jiān)測對象、樣本采集、樣本運輸、分裝和保存、樣本檢測、人員培訓(xùn)和考核、實驗室生物安全、監(jiān)測數(shù)據(jù)管理與分析等應(yīng)實施全流程質(zhì)量控制，以保障呼吸道傳染病多病原監(jiān)測科學(xué)規(guī)范、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠(共識度：97%)。三、監(jiān)測目的監(jiān)測流感、新型冠狀病毒感染等多種急性呼吸道傳染病的流行趨勢，識別急性呼吸道傳染病流行等重大公共衛(wèi)生風(fēng)險。監(jiān)測急性呼吸道傳染病主要病原譜構(gòu)成，以及流感病毒、新型冠狀病毒等重點呼吸道病原體變異，開展病原學(xué)特征分析，發(fā)現(xiàn)病原體新型別及新病原。為防范應(yīng)對潛在大流行疾病提供技術(shù)支持，為疫情趨勢分析研判、疫苗應(yīng)用研發(fā)、藥物使用策略以及公共衛(wèi)生策略評估提供依據(jù)。四、監(jiān)測對象(一)哨點醫(yī)院的選擇急性呼吸道傳染病多病原監(jiān)測(以下簡稱呼吸道多病原監(jiān)測)的哨點醫(yī)院選擇應(yīng)具有代表性，建立分區(qū)抽樣和審查機制。醫(yī)院類型、監(jiān)測診室嚴(yán)格按照國家監(jiān)測方案設(shè)立，以保證監(jiān)測覆蓋急性呼吸道感染的不同年齡組人群和病例類型。共識2:明確哨點醫(yī)院的覆蓋地區(qū)和人口，有利于監(jiān)測結(jié)果的解讀和利用。對哨點監(jiān)測系統(tǒng)進(jìn)行持續(xù)質(zhì)量評估，可識別數(shù)據(jù)收集、樣本代表性及報告流程中的潛在不足，從而提高監(jiān)測效率和數(shù)據(jù)可靠性(共識度：97%)。(二)病例報告既往監(jiān)測系統(tǒng)主要依靠醫(yī)療機構(gòu)工作人員對流感樣病例/嚴(yán)重急性呼吸道感染(influenzalikeillness/severeacuterespiratoryinfection:ILI/SARI)監(jiān)測病例進(jìn)行信息收集、匯總和上報。目前，我國國家層面正在持續(xù)優(yōu)化國家傳染病智能前置軟件，開發(fā)與完善自動抓取、統(tǒng)計上報功能，大大提升基層數(shù)據(jù)采集和上報的效率，為實現(xiàn)傳染病“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早報告、早隔離、早治療”的防控要求提供有力支撐[511]。共識3:國家傳染病智能前置軟件實現(xiàn)病例信息自動獲取和報告流程自動化，大大提升基層數(shù)據(jù)采集和報告效率以及監(jiān)測數(shù)據(jù)質(zhì)量(共識度：100%)。五、樣本采集呼吸道多病原監(jiān)測采樣的質(zhì)量控制，是確保樣本質(zhì)量、提高檢測準(zhǔn)確性的核心環(huán)節(jié)。(一)采樣對象、采樣種類和樣本量時間分布均衡:(1)門急診ILI病例：采集發(fā)病3d內(nèi)ILI病例，排除重復(fù)就診者；避免集中進(jìn)行，原則上在上半周完成采樣量的50%。(2)住院SARI病例：采集發(fā)病1周內(nèi)的住院SARI病例，若樣本量不足，放寬至發(fā)病10d內(nèi)病例，需在患者入院3d內(nèi)采集樣本。年齡分布有代表性:按照當(dāng)?shù)厝丝趯W(xué)分布特點及醫(yī)療服務(wù)覆蓋人群特征，科學(xué)設(shè)置兒童、成人和老年病例的采樣比例，確保各年齡組樣本占比合理，以全面反映各年齡群體的感染現(xiàn)狀。病例類型分布均衡:(1)門急診ILI病例：合理設(shè)定上呼吸道感染和肺炎病例等下呼吸道感染病例的占比(比如2∶1),確保兩類病例樣本分布均衡。(2)住院SARI病例：采樣應(yīng)包含普通住院病例、重癥與危重癥病例，覆蓋不同病情嚴(yán)重程度的患者。樣本種類匹配:(1)上呼吸道感染病例：采集咽拭子、鼻咽拭子和鼻咽吸取物等。(2)下呼吸道感染病例：采集深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液和呼吸道吸取物等。樣本量足量、穩(wěn)定:(1)門急診ILI病例：每家哨點醫(yī)院每周采集20份樣本。(2)住院SARI病例：每家哨點醫(yī)院每周采集10份SARI病例樣本；若當(dāng)周SARI病例不足10例，則對全部病例進(jìn)行樣本采集。不同呼吸道病原體流行存在季節(jié)差異，為精準(zhǔn)反映不同病原體的分布特征和病原譜的動態(tài)變化，呼吸道多病原監(jiān)測需確保每月樣本量均衡、穩(wěn)定，以排除樣本量波動對不同病原體陽性率的影響[1,3,12]。共識4:為真實反映急性呼吸道傳染病病原譜組成及流行、變異變遷規(guī)律，呼吸道多病原監(jiān)測樣本采集應(yīng)具代表性，并保證足量、穩(wěn)定的樣本量，肺炎等下呼吸道感染病例應(yīng)采集下呼吸道樣本(共識度：97%)。(二)采樣過程質(zhì)量控制采樣部位精準(zhǔn)及樣本足量:口咽拭子、鼻咽拭子采集嚴(yán)格按照《新型冠狀病毒感染防控方案(第九版)》附件12《新冠病毒標(biāo)本采集和檢測技術(shù)指南》[13]?？谘适米討?yīng)越過舌根到咽后壁或懸雍垂的后側(cè)，力度適中，并適當(dāng)旋轉(zhuǎn)以增加接觸面積，注意避免觸及舌部；鼻咽拭子貼鼻孔進(jìn)入，沿下鼻道的底部向后緩緩深入，待拭子頂端到達(dá)鼻咽腔后壁時，輕輕旋轉(zhuǎn)一周后緩緩取出拭子，樣本量需采集≥3ml,拭子樣本需確保拭子完全浸潤于保存液中，避免樣本量不足影響樣本檢測。污染防控:采樣時避免拭子接觸非目標(biāo)區(qū)域(如鼻孔外側(cè)、口唇),采樣后立即將拭子頭折斷放入無菌采集管，蓋緊蓋子，防止樣本泄漏或干燥。特殊人群采樣質(zhì)控要點:兒童與嬰幼兒采樣按照《兒童呼吸道感染微生物檢驗標(biāo)本采集轉(zhuǎn)運與檢測建議(病毒篇)》操作[14]。采集口咽拭子時，避免患兒哭鬧影響采集到正確部位；采鼻咽拭子時，應(yīng)先清除鼻腔前端的分泌物，拭子應(yīng)朝向耳方向而不是頭頂方向。兒童支氣管肺泡灌洗部位：影像學(xué)及臨床提示為局灶性病變，支氣管鏡應(yīng)嵌頓在相應(yīng)病變部位的支氣管段進(jìn)行灌洗；如果為彌漫性/肺間質(zhì)病變，一般嵌頓在右中葉、右下葉或左肺舌葉進(jìn)行灌洗。灌洗液量：體重小于20kg,每次灌洗量為1ml/kg;體重大于20kg,每次灌洗量為20ml。合格的灌洗液應(yīng)達(dá)到規(guī)定的回收量，不混有血液(紅細(xì)胞數(shù)<10%),不應(yīng)混有大量上皮細(xì)胞(<3%)。樣本標(biāo)識與送檢要求:信息記錄完整性：樣本管需標(biāo)注患者姓名、采樣日期、唯一編號，確?？勺匪?，可以采用條碼形式，減少手寫偏差；同步登記采樣人員、檢測項目等信息。送檢要求：標(biāo)本采集后應(yīng)在2~8℃條件下保存，24~48h內(nèi)送至網(wǎng)絡(luò)實驗室；超過48h送檢的樣本應(yīng)放于-70℃或以下的超低溫冰箱保存，無-70℃或以下的超低溫冰箱，可在-20℃冰箱暫存(不超過5d);病原體培養(yǎng)類樣本保存條件和時效性要求更高，不建議在-20℃冰箱暫存，應(yīng)盡快送檢。(三)定期反饋采樣質(zhì)量建立樣本質(zhì)量反饋機制，實驗室對不合格樣本注明原因，如樣本污染、采樣量不足、實驗室檢測采樣質(zhì)控內(nèi)標(biāo)(如核糖核酸酶P:RNaseP、RNP)檢測不合格等，不同采樣人員的陽性率、樣本合格率分析，定期反饋給采樣部門，持續(xù)優(yōu)化采樣流程。共識5:規(guī)范的采樣質(zhì)量控制是實現(xiàn)呼吸道多病原精準(zhǔn)檢測的前提。醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)對采樣人員同質(zhì)化培訓(xùn)、考核，對采樣進(jìn)行全流程質(zhì)量控制，并定期反饋采樣質(zhì)量，及時發(fā)現(xiàn)問題，持續(xù)優(yōu)化采樣流程(共識度：94%)。六、樣本運輸、分裝和保存呼吸道病原體監(jiān)測的準(zhǔn)確性高度依賴于分析前質(zhì)量控制，樣本正確的保存溫度與及時的運輸能最大限度地保持病原體的感染活性，以及抗原和核酸的完整性，是確保病原分離鑒定與各類檢測成功的關(guān)鍵保障。樣本采集應(yīng)盡快送達(dá)實驗室，病原體培養(yǎng)類樣本時效性要求更高，須優(yōu)先轉(zhuǎn)運。運輸時須使用符合生物安全規(guī)定的三層包裝系統(tǒng)(初級容器、吸水材料、二級硬質(zhì)外包裝),外包裝上應(yīng)有清晰的生物危害標(biāo)識，并全程使用2~8℃冷藏包控溫運輸，確保樣本運輸安全與質(zhì)量。網(wǎng)絡(luò)實驗室收到樣本后，根據(jù)檢測種類和每種檢測需要的樣本量，至少分裝3份：1份用于核酸檢測，1份用于分離培養(yǎng)，1份用于復(fù)核或平行檢測。分裝應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，操作者需佩戴個人防護(hù)裝備，防止樣本污染和人員感染。樣本分裝旨在實現(xiàn)“一管一檢”,避免反復(fù)凍融。每個分裝管上需粘貼清晰、防水的標(biāo)簽，注明患者信息、樣本類型及采集日期；樣本管標(biāo)簽要耐低溫、不脫落，選用前應(yīng)做-70℃或以下的超低溫冰箱或液氮保存測試實驗。樣本采集后能在48h內(nèi)檢測，可置于2~8℃冰箱短期保存；48h之內(nèi)無法檢測或長期保存的樣本，應(yīng)置于-70℃及以下的超低溫冰箱或液氮中保存。須嚴(yán)格避免樣本反復(fù)凍融，因每次凍融會導(dǎo)致病原體滴度下降和抗原降解，不利于病原分離、檢測和鑒定[1517]。共識6:標(biāo)準(zhǔn)化的呼吸道樣本運輸、分裝和保存流程，是連接樣本采集與實驗室檢測的橋梁，也是保障病原檢測乃至整個呼吸道多病原監(jiān)測質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)(共識度：94%)。七、實驗室設(shè)施和設(shè)備管理(一)核酸檢測實驗室嚴(yán)格分區(qū)呼吸道多病原核酸檢測實驗室分3個獨立區(qū)域：試劑儲備和準(zhǔn)備區(qū)、核酸提取區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū)域應(yīng)有明確標(biāo)識，其設(shè)備、試劑及清潔用具等不得混用，人員工作服亦不可交叉使用，防止交叉污染。實驗人員進(jìn)入PCR實驗區(qū)應(yīng)嚴(yán)格遵循單一方向順序，從試劑儲備和準(zhǔn)備區(qū)、核酸提取區(qū)到擴增和產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向返回，以確保人、樣本單向流動，避免污染[1820]。(二)定期校準(zhǔn)和維護(hù)檢測設(shè)備呼吸道多病原檢測設(shè)備要定期校準(zhǔn)和維護(hù)，以保證設(shè)備功能正常；有條件的實驗室可使用自動化設(shè)備，減少人員操作差錯。主要設(shè)備的維護(hù)管理如下:核酸自動提取儀:核酸自動提取儀轉(zhuǎn)移液體過程中可能產(chǎn)生氣溶膠，易造成樣本的交叉污染。在多病原檢測過程中，若發(fā)現(xiàn)連續(xù)的多孔樣本為同種病原陽性，在排除聚集性疫情的基礎(chǔ)上，應(yīng)排查是否發(fā)生交叉污染，并及時對儀器進(jìn)行清理消毒或更換處理。如果同批次樣本內(nèi)標(biāo)和病原體均未檢出，應(yīng)排查核酸自動提取儀是否出現(xiàn)故障。參照《(自動)核酸提取儀校準(zhǔn)規(guī)范》(JJF18742020)[21],根據(jù)使用頻率、提取儀性能穩(wěn)定情況等，建議每年至少校準(zhǔn)1次。熒光定量PCR儀:熒光定量PCR分析儀因頻繁使用可能導(dǎo)致其熒光檢測系統(tǒng)靈敏度下降，進(jìn)而引起實驗結(jié)果偏差。依據(jù)《實時熒光定量PCR儀性能評價通則(GB/T427532023)》[22],建議根據(jù)使用頻率每年至少校準(zhǔn)一次。若儀器經(jīng)過重大維修或受到強烈震動等情況，需立即進(jìn)行校準(zhǔn)。封膜:PCR上機前需對反應(yīng)板進(jìn)行封膜。手動封膜時，應(yīng)使用無痕刮板沿單一方向刮壓至少三次，并重點強化邊緣，沿板周用力刮壓至少兩圈，以確保密封性，防止樣本揮發(fā)。有條件的實驗室可使用自動封膜儀封膜，若使用自動封膜儀，要定期消毒壓板頭。移液器:根據(jù)《移液器檢定規(guī)程(JJG6462006)》[23],移液器應(yīng)每年檢定1次；對使用頻率高的移液器，應(yīng)根據(jù)使用頻率縮短檢定周期。同時，為預(yù)防核酸殘留污染，需定期對移液器進(jìn)行消毒和清潔。共識7:呼吸道多病原核酸檢測實驗室應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)，檢測設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)和維護(hù)，有條件的實驗室盡量使用自動化檢測設(shè)備，以減少人員操作差錯(共識度：94%)。八、呼吸道多病原檢測呼吸道多病原檢測相比單一病原檢測質(zhì)量要求更高，不同試劑盒及同一試劑盒中不同病原體的檢測靈敏度存在差異。這要求樣本質(zhì)量、試劑性能、儀器狀態(tài)和人員操作等環(huán)節(jié)具備更高的穩(wěn)定性，任何細(xì)微偏差均可能引起假陽性或假陰性結(jié)果。因此，應(yīng)始終秉持質(zhì)量與安全優(yōu)先于速度的理念，落實每一步的嚴(yán)格質(zhì)量控制。實驗室應(yīng)根據(jù)自身檢測條件，制定呼吸道多病原檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及質(zhì)量控制措施，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確與可靠。(一)樣本接收呼吸道多病原檢測實驗室接收樣本時，需在生物安全柜內(nèi)打開外包裝，核對樣本數(shù)量與送檢信息。若發(fā)生樣本遺灑，應(yīng)立即將受污染物品置于安全柜內(nèi)盛有消毒液的容器中處理。同時，需核查樣本標(biāo)識是否清晰完整，確保樣本編碼、姓名、采樣單位、采樣日期、樣本類型等信息與患者流行病學(xué)資料等基本信息一致，實現(xiàn)“人員樣本信息”一一對應(yīng)。有條件的實驗室可建立樣本信息管理系統(tǒng)，實現(xiàn)從采集、運送、接收、檢測、報告到長期保存的全流程信息化追溯。(二)樣本檢測核酸提取:(1)特殊樣品需進(jìn)行前處理以保證核酸提取效率，例如黏稠的下呼吸道樣本則需先經(jīng)痰消化液徹底消化。消化處理后，樣本應(yīng)呈均勻透明或半透明液體狀，無肉眼可見絮狀物或團(tuán)塊，且傾斜時液體能順暢流動。(2)樣本處理須嚴(yán)格遵循“單管操作閉環(huán)”原則：每完成一份樣本的分裝或前處理，應(yīng)立即蓋緊管蓋再開始下一份操作；嚴(yán)禁同時開啟多份樣本管，以避免樣本暴露過久或交叉污染。(3)核酸提取須設(shè)置陽性對照與空白對照，以驗證提取過程是否正常。若對照結(jié)果異常，應(yīng)及時排查原因(如試劑污染、操作失誤等)并重新提取。(4)核酸提取完成后應(yīng)盡快進(jìn)行PCR檢測；若不能及時檢測，須將核酸置于-70℃保存，避免室溫下長時間放置導(dǎo)致核酸降解。PCR檢測:(1)PCR反應(yīng)體系配置：加模板吸樣時檢查槍頭是否成功吸取核酸，避免漏吸、吸量不足等情況；加樣完成后應(yīng)檢查槍頭，確保槍頭無殘留液體。(2)對照設(shè)立：核酸擴增實驗遵循“三對照”原則：即每個檢測批次必須同時包含陰性對照(不含靶核酸的基質(zhì)，用于監(jiān)控環(huán)境污染和試劑本底)、陽性對照(含有特定低濃度靶核酸的樣本，用于確認(rèn)整個檢測體系有效)和空白對照(無模板水，用于監(jiān)控試劑污染)。所有對照品結(jié)果均符合預(yù)期，該批次檢測結(jié)果才可接受。(3)PCR擴增：配置完成的PCR板應(yīng)盡快上機檢測，若不能盡快上機，需將PCR板置于4℃冰箱暫存，暫存時間最長不得超過4h,避免長時間低溫導(dǎo)致試劑活性下降或核酸降解。上機時，PCR儀的檢測軟件中應(yīng)標(biāo)注每個檢測孔對應(yīng)的樣本編號，以保證結(jié)果可溯源。PCR儀啟動運行后須等儀器顯示倒計時后方可離開，防止因機器運行不穩(wěn)定導(dǎo)致實驗中斷。(4)結(jié)果判定：在陰性對照與陽性對照結(jié)果成立的基礎(chǔ)上，樣本擴增曲線呈標(biāo)準(zhǔn)“S”型，循環(huán)閾值(Cyclethreshold,Ct值)小于或等于試劑盒說明書中規(guī)定的陽性判定閾值。實驗室應(yīng)設(shè)立復(fù)測標(biāo)準(zhǔn)，對于可疑結(jié)果、臨界值結(jié)果、內(nèi)標(biāo)異常但靶標(biāo)陽性的結(jié)果等，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測。共識8:實驗室應(yīng)制定覆蓋樣本接收、核酸提取、PCR檢測及結(jié)果判定等全流程的呼吸道多病原檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程與質(zhì)量控制措施，并確保其得到嚴(yán)格執(zhí)行(共識度：97%)。共識9:樣本接收須確保“人員樣本信息”一一對應(yīng)，并支持全流程追溯；核酸提取與PCR反應(yīng)須設(shè)置陰性、陽性及空白對照，以監(jiān)控提取效率、試劑污染、樣本交叉污染及環(huán)境污染等情況(共識度：91%)?；驕y序:基因測序能夠?qū)崿F(xiàn)精準(zhǔn)溯源與分型、監(jiān)測病原體基因變異、發(fā)現(xiàn)未知病原，從而及時預(yù)警；也可分析混合感染、檢測耐藥基因，為臨床抗感染治療提供精準(zhǔn)依據(jù)。但測序過程易造成實驗室環(huán)境污染，環(huán)境中的基因片段也可能污染樣本，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。因此，實驗室應(yīng)建立基因測序的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并制定各環(huán)節(jié)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。(1)核酸質(zhì)控：核酸提取后需通過紫外分光光度計、瓊脂糖凝膠電泳儀及核酸定量儀，評估核酸的純度、完整性和濃度，以確保其滿足下游建庫要求[24]。核酸應(yīng)分裝保存，避免反復(fù)凍融。(2)基因組建庫質(zhì)控：文庫構(gòu)建是高通量測序的重要步驟。RNA建庫前需先去除rRNA,構(gòu)建鏈特異性文庫，以保障轉(zhuǎn)錄本來源分析準(zhǔn)確性。建議宏基因組和全基因組文庫的片段長度控制在300~500bp(長讀長測序可適當(dāng)延長)[25]。文庫構(gòu)建推薦采用雙端唯一標(biāo)簽接頭以防范交叉污染，并須嚴(yán)格監(jiān)控實驗操作及試劑中可能引入的微生物污染。(3)上機前文庫質(zhì)控：上機前需測定文庫總濃度，達(dá)標(biāo)后方可上機；并分析片段大小分布，確保主帶符合預(yù)期[25]。(4)測序數(shù)據(jù)質(zhì)控：一代測序序列峰圖應(yīng)基線平整，峰形尖銳、單一且分離良好；確保序列前端信號清晰，末端衰減可控，保證整段讀長的可靠性。二代測序數(shù)據(jù)中的Q30(錯誤率≤0.1%)堿基比例應(yīng)不低于85%[26]。同時，需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行過濾，去除低質(zhì)量的序列和冗余數(shù)據(jù)，確保最終數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可用性。共識10:實驗室應(yīng)建立覆蓋核酸提取、建庫、上機前文庫及測序數(shù)據(jù)質(zhì)控等核心環(huán)節(jié)的全面基因測序標(biāo)準(zhǔn)操作與質(zhì)控流程(共識度：94%)。新發(fā)突發(fā)及高致病性病原微生物檢測:新發(fā)突發(fā)及高致病性病原體引起的急性呼吸道感染，早期癥狀常與其他病原體感染相似，采樣時難以鑒別。若后續(xù)檢出高致病性禽流感病毒、可疑新發(fā)病原體、輸入性病原體或重要變異株等，須立即上報上級疾病預(yù)防控制部門，并組織相關(guān)部門及專家開展風(fēng)險評估。根據(jù)評估結(jié)果，啟動網(wǎng)絡(luò)實驗室進(jìn)行樣本復(fù)核、平行檢測與基因組測序等鑒定工作。網(wǎng)絡(luò)實驗室應(yīng)使用首次檢測時分裝的樣本進(jìn)行復(fù)核，以避免樣本污染。若采樣時經(jīng)問診高度懷疑為新發(fā)突發(fā)或高致病性病原體感染，應(yīng)同時采集雙份平行樣本：一份送常規(guī)實驗室檢測，另一份送指定網(wǎng)絡(luò)實驗室進(jìn)行平行檢測。兩份樣本應(yīng)嚴(yán)格分開處理，避免交叉污染。共識11:呼吸道多病原監(jiān)測中檢出新發(fā)突發(fā)或高致病性病原微生物，應(yīng)立即上報上級疾病預(yù)防控制部門；網(wǎng)絡(luò)實驗室進(jìn)行平行檢測或鑒定應(yīng)使用首次檢測時分裝的樣本；采樣時高度懷疑新發(fā)突發(fā)、高致病性病原微生物感染，應(yīng)同時采集雙份平行樣本，分別送不同網(wǎng)絡(luò)實驗室進(jìn)行平行檢測(共識度：100%)。九、檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證實驗室應(yīng)通過內(nèi)部和外部質(zhì)量控制活動確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性[2731]。(一)內(nèi)部質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制旨在確保檢測的穩(wěn)定性，衡量精密度，是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)與核心。實驗室應(yīng)建立覆蓋人員、設(shè)備、方法、試劑、質(zhì)控品及檢驗過程的全要素內(nèi)部質(zhì)量控制程序。實驗人員培訓(xùn):開展手把手培訓(xùn)、并進(jìn)行考核(如開展人員比對、留樣再測等)。人員比對每年至少完成1次，結(jié)果一致性應(yīng)≥90%,未達(dá)標(biāo)者需重新培訓(xùn)并考核至合格方可上崗。儀器校準(zhǔn)和維護(hù):移液器、封膜儀、PCR儀等儀器應(yīng)根據(jù)使用頻率定期校準(zhǔn)、檢定，及時發(fā)現(xiàn)并解決問題。具體見第七章節(jié)“實驗室設(shè)施、設(shè)備管理”。檢測方法、試劑選擇及試劑驗收:在選擇呼吸道多病原檢測試劑盒時，實驗室應(yīng)采用多種方法(如使用標(biāo)準(zhǔn)毒株、質(zhì)控品、陽性臨床樣本進(jìn)行平行檢測比較等)評估其靈敏度與特異性。對不同批次購置的試劑盒，須在驗收合格后方可投入使用。檢測過程質(zhì)量控制:內(nèi)部質(zhì)控可通過以下方法實施:(1)定期使用呼吸道多病原質(zhì)控品進(jìn)行檢測，包括有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、臨床陽性培養(yǎng)物、原始樣本或核酸、合格商品化質(zhì)控品等。(2)采用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)對比檢測，結(jié)果一致性應(yīng)≥90%。(3)對留存樣本進(jìn)行重復(fù)檢測，其Ct值的變異系數(shù)應(yīng)≤5%。(4)開展實驗室內(nèi)部比對，包括不同人員與設(shè)備間的比較。(5)分析同一樣本所有檢測指標(biāo)間的相關(guān)性及一致性。(6)設(shè)置陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控及空白對照。陰性及空白對照應(yīng)無擴增，陽性質(zhì)控同批次Ct值的變異系數(shù)應(yīng)≤5%;若超出范圍，需驗證設(shè)備性能及試劑有效性[31,3435]。(二)外部質(zhì)量控制外部質(zhì)量控制旨在確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，通過衡量準(zhǔn)確度以實現(xiàn)實驗室間結(jié)果可比。實驗室應(yīng)積極參加能力驗證、測量審核、實驗室間比對或盲樣考核等外部質(zhì)量控制活動。呼吸道多病原監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室應(yīng)主動參加中國疾病預(yù)防控制中心、國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗中心、認(rèn)可委等機構(gòu)組織的相關(guān)能力驗證或盲樣考核，每年至少1次，并盡可能覆蓋全體檢驗人員，避免僅少數(shù)技術(shù)骨干參加，從而確保實驗室常規(guī)檢測人員均具備相應(yīng)能力。共識12:實驗室應(yīng)根據(jù)自身條件建立呼吸道多病原檢測內(nèi)部質(zhì)量控制程序，保障日常檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠；同時積極參加外部質(zhì)量控制活動，包括能力驗證、實驗室間比對或盲樣考核等(共識度：94%)。共識13:實驗室選擇呼吸道多病原檢測試劑盒時，應(yīng)驗證其性能并選用符合檢測要求的試劑；不同批次的試劑盒須經(jīng)驗收合格后方可投入使用(共識度：91%)。(三)實驗室間質(zhì)評或盲樣考核結(jié)果不一致的原因分析網(wǎng)絡(luò)實驗室的上級實驗室應(yīng)對下級實驗室開展日常質(zhì)量控制，包括樣本復(fù)核、平行檢測、留樣檢測及盲樣考核。常見實驗室間質(zhì)評或盲樣考核不結(jié)果一致的原因見表1。表1實驗室室間質(zhì)量評估或盲樣考核結(jié)果不一致的常見原因類型結(jié)果不一致的原因樣本原因(1)樣本儲存不當(dāng)，例如收樣后在室溫下放置時間過長、檢測后未及時低溫冷凍保存等，導(dǎo)致核酸降解，重復(fù)檢測結(jié)果不一致；(2)首次檢測時未及時分裝樣本、分裝過程發(fā)生污染、樣本復(fù)融混勻不充分或反復(fù)凍融等，引起核酸降解；(3)運輸過程中樣本管破裂或管蓋未擰緊，與同包裝其他樣本發(fā)生交叉污染；(4)樣本條碼或標(biāo)識信息缺失、錯誤，操作時樣本混淆，或上機時樣本編碼錄入錯誤；(5)加模板時移液器未吸到核酸或加樣量不足等試劑原因(1)新批號試劑未驗收，試劑批次間質(zhì)量不穩(wěn)定、或個別指標(biāo)檢測不靈敏；(2)檢測指標(biāo)覆蓋不全面、不同試劑盒對各病原體檢測靈敏度差異顯著、試劑儲存環(huán)節(jié)未嚴(yán)格遵循規(guī)范要求；(3)檢測中不合理或未正確使用試劑，體系配置不準(zhǔn)或錯配，未遵守分子生物學(xué)分區(qū)原則，未在試劑準(zhǔn)備區(qū)配置體系導(dǎo)致試劑污染；(4)檢測過程中未設(shè)置陽性對照、陰性對照或空白對照，無法定位出現(xiàn)問題的環(huán)節(jié)；(5)不同實驗室使用的試劑存在差異，各指標(biāo)的檢測靈敏度不一，導(dǎo)致檢測結(jié)果不一致結(jié)果判讀原因(1)未嚴(yán)格按照說明書判讀結(jié)果；(2)不同實驗室、檢驗人員之間的判讀結(jié)果存在差異，在低濃度或處于灰區(qū)的樣本中尤為突出，容易造成陰陽性判斷不一致；(3)結(jié)果上報前未核對項目間的邏輯關(guān)系，有的試劑盒檢驗項目有重疊，可以輔助提示樣本檢測結(jié)果的正確性當(dāng)室間質(zhì)評或盲樣考核結(jié)果不一致時，須啟動整改閉環(huán)流程，包括：及時復(fù)測、原因分析與整改計劃、實施整改、效果驗證(通過內(nèi)部比對、陽性標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)部質(zhì)控品檢測等方式),并對相關(guān)問題事項持續(xù)跟蹤，防止類似問題再次發(fā)生[18,28,36]。共識14:網(wǎng)絡(luò)實驗室應(yīng)開展日常質(zhì)量控制，認(rèn)真查找和分析質(zhì)控過程中出現(xiàn)結(jié)果不一致原因，提出糾正措施，以持續(xù)提高網(wǎng)絡(luò)實驗室的呼吸道多病原檢測能力(共識度：97%)。十、實驗室生物安全實驗室應(yīng)按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》和《人間傳染的病原微生物目錄》在規(guī)定的生物安全級別實驗室中進(jìn)行[3738]。呼吸道多病原的樣本檢測均在生物安全二級(BSL2)實驗室進(jìn)行。部分病毒如新型冠狀病毒的分離培養(yǎng)在生物安全三級(BSL3)實驗室進(jìn)行。呼吸道多病原檢測應(yīng)嚴(yán)格做好個人防護(hù)，規(guī)范操作。個人防護(hù)包括實驗服、手套、帽子、外科口罩或N95口罩、實驗專用鞋。工作人員須接受全面的生物安全培訓(xùn)。所有臨床樣本操作，如分裝、核酸提取等，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。實驗室應(yīng)制定應(yīng)急預(yù)案和意外事故的處置程序，對所有人員進(jìn)行培訓(xùn)，確保人員熟悉應(yīng)急預(yù)案，熟練掌握樣本溢灑等應(yīng)急處置流程，確保在突發(fā)情況發(fā)生時能迅速、規(guī)范處置。每年至少組織演練一次。共識15:完善的生物安全防護(hù)與有效的應(yīng)急處置，是呼吸道多病原監(jiān)測工作得以安全、有效運行的基石(共識度：97%)。十一、人員培訓(xùn)和考核哨點醫(yī)院每年至少開展一次針對數(shù)據(jù)上報人員及各科室主管人員的病例定義、上報流程和采樣時間等培訓(xùn)；每年至少開展兩次核查病例報告，檢查上報科室是否齊全、時間是否及時、年齡分組是否規(guī)范、各省市上報醫(yī)院是否完整、采樣是否集中等。每年組織醫(yī)護(hù)人員采樣技術(shù)培訓(xùn)與再培訓(xùn)，制定咽拭子、鼻咽拭子采集操作規(guī)程考核表，定期開展實操考核并實時反饋，推動采樣規(guī)范化。持續(xù)開展實驗室檢測技術(shù)培訓(xùn)班，定期舉辦手把手教學(xué)，覆蓋呼吸道多病原檢測、結(jié)果報告、質(zhì)量控制和新技術(shù)進(jìn)展各環(huán)節(jié)，確保人員均具備相應(yīng)資質(zhì)，考核合格后上崗。系統(tǒng)實施生物安全培訓(xùn)，深入理解并內(nèi)化安全要求，將生物安全理念融入檢測全過程，通過生物安全考核合格后方可上崗。共識16:定期開展醫(yī)護(hù)人員病例報告、采樣技術(shù)培訓(xùn)和再培訓(xùn)；強化網(wǎng)絡(luò)實驗室呼吸道多病原檢測技術(shù)和生物安全的手把手培訓(xùn)，培訓(xùn)考核合格后方能上崗(共識度：100%)。十二、監(jiān)測數(shù)據(jù)管理和分析(一)監(jiān)測數(shù)據(jù)信息化管理監(jiān)測數(shù)據(jù)需要持續(xù)收集、管理與分析，對監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行信息化管理是保證數(shù)據(jù)安全與數(shù)據(jù)質(zhì)量的關(guān)鍵措施。呼吸道多病原監(jiān)測數(shù)據(jù)應(yīng)涵蓋人口學(xué)資料、發(fā)病信息(發(fā)病日期、癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸等)、樣本信息(采樣單位、姓名、日期、樣本類型等)、實驗室檢測結(jié)果、流行病學(xué)調(diào)查及干預(yù)措施記錄(如疫苗接種情況)等。公共衛(wèi)生部門需制定標(biāo)準(zhǔn)化信息收集流程，實現(xiàn)數(shù)據(jù)完整、準(zhǔn)確采集；充分利用國家傳染病智能前置軟件，自動采集醫(yī)院信息系統(tǒng)(hospitalinformationsystem,HIS)及實驗室信息系統(tǒng)(laboratoryinformationsystem,LIS)數(shù)據(jù)，提高監(jiān)測效率和自動化水平。監(jiān)測信息平臺應(yīng)建立數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)化、邏輯校驗及異常追溯的數(shù)據(jù)質(zhì)量控制體系，確保監(jiān)測數(shù)據(jù)采集、傳輸與管理的規(guī)范化和一致性。為此，應(yīng)建立可操作的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范。第一，統(tǒng)一數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)。信息平臺需制定統(tǒng)一的數(shù)據(jù)字典和編碼體系，包括病例信息字段、樣本編號規(guī)則、實驗室檢測字段等，明確人口學(xué)變量、臨床特征、檢測結(jié)果、病原代碼等字段及取值范圍，確保各哨點醫(yī)院和網(wǎng)絡(luò)實驗室上傳的數(shù)據(jù)在格式、字段含義及編碼體系上的一致性。第二，完善邏輯一致性校驗。數(shù)據(jù)自動接入后，平臺可自動執(zhí)行邏輯一致性驗證，如采樣日期必須早于檢測日期、報告日期不得早于檢測完成時間、樣本類型與檢測項目是否對應(yīng)、病例年齡與就診科室是否合理等，對異常數(shù)據(jù)自動提示或攔截，保證源頭數(shù)據(jù)的真實性與可靠性。第三，構(gòu)建哨點醫(yī)院與網(wǎng)絡(luò)實驗室的閉環(huán)管理機制。平臺可支持異常數(shù)據(jù)的自動追溯，如樣本信息缺失、編號重復(fù)、結(jié)果與原始記錄不符等情況，并向相關(guān)單位發(fā)送糾錯通知，完成核實、更正與再次校驗的閉環(huán)處理，確保數(shù)據(jù)從采樣、檢測到上報均可追蹤、可糾偏、可驗證，從而提升多病原監(jiān)測的整體一致性與質(zhì)量控制水平。第四，關(guān)注數(shù)據(jù)安全與隱私保護(hù)。包括分級訪問控制、加密傳輸和數(shù)據(jù)脫敏處理，確保數(shù)據(jù)安全與質(zhì)量。通過以上標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制措施，可系統(tǒng)提升監(jiān)測數(shù)據(jù)的規(guī)范性、一致性和安全性，有效實現(xiàn)字段定義準(zhǔn)確、值域范圍統(tǒng)一、邏輯校驗合理、缺失與異?？煽?，確保數(shù)據(jù)完整性、準(zhǔn)確性與可比性，為傳染病風(fēng)險研判和防控決策提供可靠支撐。共識17:呼吸道多病原監(jiān)測需建立統(tǒng)一的信息化平臺，整合多源數(shù)據(jù)并應(yīng)用智能技術(shù)，在保證數(shù)據(jù)安全和質(zhì)量的前提下，實現(xiàn)及時、高效的數(shù)據(jù)采集、處理、管理與分析(共識度：100%)。(二)監(jiān)測信息的分析監(jiān)測信息分析的目的是指導(dǎo)區(qū)域數(shù)據(jù)驅(qū)動的循證公共衛(wèi)生實踐。呼吸道多病原監(jiān)測數(shù)據(jù)分析，用于呈現(xiàn)人群、時間和空間分布，概括流行特征與變化趨勢；并通過構(gòu)