生物科技生物科技研發(fā)公司生物科技研究員實(shí)習(xí)報(bào)告一、摘要

2023年7月1日至2023年8月31日，我在一家生物科技研發(fā)公司擔(dān)任生物科技研究員實(shí)習(xí)生。核心工作成果包括完成3項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，累計(jì)處理樣本120份，其中2項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)達(dá)到預(yù)定閾值（P<0.05）；參與1個(gè)基因編輯項(xiàng)目，成功構(gòu)建5個(gè)靶向載體，通過測(cè)序驗(yàn)證成功率達(dá)92%；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析腫瘤細(xì)胞凋亡率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá)95%。專業(yè)技能應(yīng)用方面，熟練掌握分子克隆、蛋白質(zhì)印跡及高通量測(cè)序技術(shù)，提煉出標(biāo)準(zhǔn)化的樣本前處理流程，縮短單個(gè)實(shí)驗(yàn)周期約15%。通過迭代優(yōu)化培養(yǎng)基配方，使細(xì)胞增殖效率提升20%，形成可復(fù)用的質(zhì)量控制方法論。

二、實(shí)習(xí)內(nèi)容及過程

1實(shí)習(xí)目的

去2023年7月1號(hào)到8月31號(hào)這段時(shí)間，我在一家做生物技術(shù)開發(fā)的單位實(shí)習(xí)，主要是想看看自己學(xué)的那些東西在真正的工作里怎么用，感受一下實(shí)驗(yàn)室的日常，順便學(xué)點(diǎn)學(xué)校里沒教過的實(shí)操技能。

2實(shí)習(xí)單位簡介

我實(shí)習(xí)的單位主要搞基因編輯和細(xì)胞治療相關(guān)的研發(fā)，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備挺全乎，有專門的生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室，平時(shí)做實(shí)驗(yàn)多是在分子生物學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng)這些方向。

3實(shí)習(xí)內(nèi)容與過程

開始的時(shí)候跟著師傅學(xué)基礎(chǔ)的細(xì)胞操作，7月5號(hào)到10號(hào)幫忙做了一批小鼠成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)，老師讓我控制好接種密度，一開始手生，細(xì)胞貼壁率只有65%，后來調(diào)整了培養(yǎng)基里的血清濃度，到第三次做就穩(wěn)定到80%以上了。8月的時(shí)候參與了一個(gè)CRISPR項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)，我的任務(wù)是構(gòu)建靶向PD1基因的gRNA載體，用了TA克隆技術(shù)，7月25號(hào)完成的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，29號(hào)開始看轉(zhuǎn)染效率，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)到72小時(shí)后的陽性細(xì)胞比例是28%，比之前的實(shí)驗(yàn)記錄高5個(gè)百分點(diǎn)。還接觸過蛋白質(zhì)印跡，8月15號(hào)做的那個(gè)WesternBlot實(shí)驗(yàn)，為了減少背景噪聲，我改進(jìn)了封閉條件，把封閉時(shí)間從2小時(shí)延長到4小時(shí)，結(jié)果膜上的非特異性條帶明顯變淡了。

4實(shí)習(xí)成果與收獲

實(shí)習(xí)期間獨(dú)立完成的實(shí)驗(yàn)有3個(gè)，分別是細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化流程的優(yōu)化、gRNA載體的構(gòu)建和WesternBlot條件的改進(jìn)。最讓我印象深刻的是那個(gè)PD1基因編輯實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染效率的提升讓我意識(shí)到細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響多大。還學(xué)會(huì)了用GraphPadPrism做數(shù)據(jù)分析，之前都是直接看結(jié)果，現(xiàn)在能自己畫柱狀圖和散點(diǎn)圖了。最大的收獲是摸清了實(shí)驗(yàn)室的SOP，比如怎么規(guī)范處理細(xì)胞因子，怎么避免交叉污染這些，感覺比課本里看得更清楚。

5遇到的問題及解決

有一次做基因編輯實(shí)驗(yàn)，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率特別高，大概有40%的細(xì)胞沒活下來，一開始以為是試劑問題，后來師傅教我用相差顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)是接種密度太密了，換到1×10^4/mL后細(xì)胞存活率就恢復(fù)到85%以上。這個(gè)經(jīng)歷讓我知道做實(shí)驗(yàn)不能只盯著結(jié)果，得先檢查每一個(gè)環(huán)節(jié)。

6職業(yè)規(guī)劃啟發(fā)

這段時(shí)間讓我更確定自己想往細(xì)胞治療方向發(fā)展了，特別是看到那個(gè)PD1載體做完測(cè)序驗(yàn)證后的效果，就覺得這個(gè)領(lǐng)域挺有意思的。接下來打算補(bǔ)補(bǔ)AAV載體相關(guān)的知識(shí)，感覺那塊是現(xiàn)在比較火的方向。不過也發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)挺隨意的，有時(shí)候師兄師姐忙起來就不太管新生，要是單位能系統(tǒng)化安排幾場實(shí)驗(yàn)安全培訓(xùn)就好了。

三、總結(jié)與體會(huì)

1實(shí)習(xí)價(jià)值閉環(huán)

這8周，從7月1號(hào)到8月31號(hào)，跟著團(tuán)隊(duì)做細(xì)胞培養(yǎng)和基因編輯，感覺就像把課本里的抽象概念給具象化了。最初只是想學(xué)點(diǎn)實(shí)際操作，結(jié)果真的收獲超預(yù)期。比如7月15號(hào)做的那個(gè)WesternBlot實(shí)驗(yàn)，連續(xù)失敗了3次，背景一直特別重，后來反復(fù)調(diào)整抗體濃度和封閉時(shí)間，最后在8月2號(hào)終于出膜效果干凈利落，那感覺比考試考好多了。這讓我明白，科研真不是按部就班的事，得有耐心，也得會(huì)動(dòng)手解決真問題。實(shí)驗(yàn)室那套SOP流程，從細(xì)胞傳代到質(zhì)粒提取，每一步操作都像在拆解一個(gè)精密儀器，弄懂了才知其中門道。

2職業(yè)規(guī)劃聯(lián)結(jié)

做完P(guān)D1基因編輯實(shí)驗(yàn)后，8月15號(hào)那天測(cè)序結(jié)果出來，靶向位點(diǎn)插入效率92%，比文獻(xiàn)報(bào)道的均值高不少，那一刻真覺得未來可期。這段經(jīng)歷讓我確認(rèn)了想往基因治療方向深耕，現(xiàn)在正系統(tǒng)復(fù)習(xí)AAV載體包裝和純化的知識(shí)，打算下學(xué)期考個(gè)基因治療工程師認(rèn)證，把實(shí)習(xí)里沒搞透的細(xì)胞因子動(dòng)力學(xué)模型也補(bǔ)上。感覺實(shí)習(xí)最大的價(jià)值就是讓我看清了，想干這行得持續(xù)學(xué)，光靠學(xué)校那點(diǎn)課是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。

3行業(yè)趨勢(shì)展望

8月25號(hào)參加完公司組織的內(nèi)部技術(shù)分享會(huì)，才真切感受到行業(yè)變化有多快。比如那個(gè)做CART的師兄說，現(xiàn)在都在用單細(xì)胞測(cè)序做免疫細(xì)胞篩選，效率比傳統(tǒng)流式快至少60%，成本還低。這讓我意識(shí)到，自己學(xué)的那些基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)得跟上，以后可能都得會(huì)點(diǎn)單細(xì)胞分選和空間轉(zhuǎn)錄組分析。行業(yè)里現(xiàn)在特別缺既懂技術(shù)又懂?dāng)?shù)據(jù)的復(fù)合型人才，這8周跟著做數(shù)據(jù)分析，雖然只是畫些標(biāo)準(zhǔn)圖表，但真的讓我對(duì)生物信息學(xué)有了新認(rèn)識(shí)。

4心態(tài)轉(zhuǎn)變與未來行動(dòng)

以前覺得做實(shí)驗(yàn)就是按指令來就行，現(xiàn)在明白每個(gè)步驟都要有數(shù)據(jù)支撐。8月30號(hào)導(dǎo)師跟我說，做實(shí)驗(yàn)得像法官斷案一樣嚴(yán)謹(jǐn)，這讓我開始反思自己記錄實(shí)驗(yàn)日志的方式，現(xiàn)在每天都會(huì)標(biāo)注關(guān)鍵參數(shù)的變動(dòng)。最大的變化是抗壓能力，剛開始做細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，7月10號(hào)數(shù)了一下午都沒數(shù)準(zhǔn)，急得頭發(fā)都快薅禿了，后來學(xué)了自動(dòng)計(jì)數(shù)儀才搞定。現(xiàn)在想想，這比單純學(xué)技術(shù)更寶貴。接下來打算把實(shí)習(xí)里整理的細(xì)胞培養(yǎng)SOP發(fā)表在實(shí)驗(yàn)室的共享文檔里，雖然簡單，但這就是從學(xué)生到職場人的第一步吧。

致謝

1

在2023年7月1日至8月31日的實(shí)習(xí)期間，衷心感謝單位提供的學(xué)習(xí)平臺(tái)，讓我有機(jī)會(huì)將理論知識(shí)應(yīng)用于實(shí)踐。特別感謝導(dǎo)師在基因編輯實(shí)驗(yàn)上的悉心指導(dǎo)，尤其是在7月25號(hào)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率