人體血液涂片實(shí)驗(yàn)流程及報(bào)告范例一、實(shí)驗(yàn)流程（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆杖梭w血液涂片的制備、染色技術(shù)，熟悉顯微鏡下各類(lèi)血細(xì)胞的形態(tài)特征，學(xué)會(huì)識(shí)別并初步計(jì)數(shù)各類(lèi)白細(xì)胞，為臨床血液學(xué)檢驗(yàn)打下基礎(chǔ)。（二）實(shí)驗(yàn)原理血液涂片是將少量血液均勻涂抹在載玻片上制成的薄片。經(jīng)過(guò)適當(dāng)染色（常用瑞氏染色法）后，不同類(lèi)型的血細(xì)胞因胞質(zhì)內(nèi)化學(xué)成分不同，對(duì)染料的親和力各異，從而呈現(xiàn)出特定的顏色和形態(tài)，便于在顯微鏡下觀察和區(qū)分。瑞氏染液中的酸性伊紅和堿性美藍(lán)在適宜的pH環(huán)境下，分別與細(xì)胞內(nèi)的堿性和酸性物質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞核、胞質(zhì)及顆粒等結(jié)構(gòu)清晰可辨。（三）實(shí)驗(yàn)材料與試劑1.標(biāo)本來(lái)源：人體末梢血（通常為指尖或耳垂血）。2.試劑：瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液（pH6.4-6.8）、甲醇（用于固定，部分商品化瑞氏染液已含固定成分）。3.器材：一次性采血針、載玻片（潔凈、無(wú)劃痕）、推片（邊緣光滑）、消毒棉球、75%乙醇、吸水紙、染色架、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙。（四）實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備工作：*用75%乙醇消毒采血部位皮膚及操作者手指。*檢查載玻片和推片是否潔凈完好。*準(zhǔn)備好瑞氏染液和緩沖液，置于染色架旁。2.采血：*待乙醇揮發(fā)干后，用一次性采血針刺破采血部位皮膚，深度適中，以血液能自然流出為宜。*用干棉球擦去第一滴血（避免組織液混入）。*待血液再次流出形成一小滴血時(shí)，用載玻片邊緣輕觸血滴，使血液均勻附著在載玻片一端（距邊緣約1厘米處）。3.涂片：*將載玻片水平放置，取另一張邊緣光滑的推片，以約30-45度角置于血滴前方，輕輕向后移動(dòng)，使推片邊緣與血滴接觸，待血液沿推片邊緣均勻展開(kāi)。*保持角度不變，平穩(wěn)、勻速地將推片向前推進(jìn)至載玻片另一端，制成一張頭體尾分明、厚薄適宜的血涂片。理想的涂片應(yīng)是薄而均勻，尾部呈羽毛狀。4.干燥：*將制成的血涂片水平放置于空氣中自然干燥。避免陽(yáng)光直射或高溫烘烤，以免細(xì)胞變形。5.固定與染色（瑞氏染色法）：*固定：待血膜完全干燥后，用甲醇滴加或浸泡血膜面進(jìn)行固定，固定時(shí)間約1-2分鐘。若使用的瑞氏染液已含甲醇固定成分，此步可省略，直接進(jìn)行染色。*染色：將固定好的血涂片置于染色架上，滴加瑞氏染液覆蓋整個(gè)血膜，染色約1-2分鐘，使細(xì)胞初步著色并固定。*復(fù)染：滴加等量或稍多于染液的磷酸鹽緩沖液，用洗耳球輕輕吹動(dòng)液面，使染液與緩沖液充分混合，形成一層均勻的泡沫。此時(shí)染液顏色會(huì)發(fā)生變化。復(fù)染時(shí)間約5-10分鐘（具體時(shí)間需根據(jù)染液濃度、室溫及個(gè)人經(jīng)驗(yàn)調(diào)整）。6.沖洗：*染色完成后，用細(xì)緩的流水從載玻片的一端輕輕沖洗，直至沖洗液無(wú)色或呈淡粉色為止。注意水流不可過(guò)急，避免沖掉血膜。7.干燥：*將沖洗后的血涂片斜置，用吸水紙吸干或置于空氣中自然干燥。8.鏡檢：*將干燥后的血涂片置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡（10×物鏡）觀察血涂片的整體質(zhì)量，包括細(xì)胞分布是否均勻、有無(wú)重疊、染色是否良好等，選擇細(xì)胞分布均勻、染色清晰的區(qū)域（通常在涂片的體尾交界處）。*轉(zhuǎn)換至高倍鏡（40×物鏡）觀察各類(lèi)血細(xì)胞的大致形態(tài)。*最后轉(zhuǎn)換至油鏡（100×物鏡），在油鏡下仔細(xì)觀察紅細(xì)胞、白細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞）的形態(tài)特征，并可進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)。觀察時(shí)注意調(diào)節(jié)焦距和光線。（五）實(shí)驗(yàn)后處理1.用過(guò)的一次性采血針、棉球等放入醫(yī)用垃圾桶。2.載玻片、推片等若為一次性使用則按醫(yī)療廢物處理；若需重復(fù)使用，則需按規(guī)定消毒清洗。3.清潔顯微鏡鏡頭及載物臺(tái)，整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)。（六）注意事項(xiàng)1.采血時(shí)嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免交叉感染。2.涂片是關(guān)鍵步驟，推片速度和角度要適宜，血滴大小要適中。血滴過(guò)大、推片過(guò)慢或角度過(guò)大，涂片會(huì)過(guò)厚；反之則過(guò)薄。3.染色時(shí)間和染液、緩沖液比例需根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握，染色過(guò)深或過(guò)淺均會(huì)影響觀察效果。4.沖洗時(shí)水流要緩，避免血膜脫落。5.油鏡觀察后，需用擦鏡紙蘸取少量二甲苯（或?qū)Ｓ苗R頭清潔劑）清潔油鏡鏡頭。二、報(bào)告范例人體血液涂片制備與血細(xì)胞形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)日期：[填寫(xiě)具體日期]實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：[填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)]實(shí)驗(yàn)者：[填寫(xiě)姓名]學(xué)號(hào)/編號(hào)：[填寫(xiě)學(xué)號(hào)或編號(hào)]同組實(shí)驗(yàn)者：[若有，填寫(xiě)姓名]指導(dǎo)教師：[填寫(xiě)教師姓名]一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握血液涂片的制備技術(shù)。2.掌握瑞氏染色法的操作步驟。3.識(shí)別顯微鏡下紅細(xì)胞、常見(jiàn)白細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞）及血小板的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理概述血液涂片經(jīng)瑞氏染液染色后，由于不同血細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分（如蛋白質(zhì)、核酸等）的差異，對(duì)酸性染料（伊紅）和堿性染料（美藍(lán)）的親和力不同，從而使各類(lèi)血細(xì)胞呈現(xiàn)出特定的顏色和形態(tài)。伊紅為酸性染料，主要染細(xì)胞質(zhì)中的堿性物質(zhì)，呈粉紅色；美藍(lán)為堿性染料，主要染細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)，呈藍(lán)紫色。通過(guò)顯微鏡觀察，可區(qū)分不同類(lèi)型的血細(xì)胞。三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑1.標(biāo)本：本人末梢血（指尖采血）。2.試劑：瑞氏染液，磷酸鹽緩沖液（pH6.4-6.8），甲醇（分析純），75%乙醇。3.器材：一次性采血針，載玻片，推片，消毒棉球，顯微鏡，染色架，吸水紙，擦鏡紙，香柏油。四、實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)述1.指尖皮膚消毒后采血，制成薄而均勻的血涂片。2.血涂片自然干燥后，用甲醇固定1分鐘。3.瑞氏染液染色1.5分鐘，加等量緩沖液混合染色8分鐘。4.流水沖洗，自然干燥后鏡檢。5.依次用低倍鏡、高倍鏡、油鏡觀察血細(xì)胞形態(tài)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與觀察記錄1.血涂片質(zhì)量評(píng)估：本次所制血涂片厚薄較均勻，頭體尾分明，尾部呈羽毛狀，染色效果良好，細(xì)胞著色清晰，無(wú)明顯染料沉渣，細(xì)胞分布較均勻，適合鏡檢觀察。2.血細(xì)胞形態(tài)描述：在油鏡下觀察到以下血細(xì)胞：*紅細(xì)胞（RBC）：呈雙凹圓盤(pán)狀，無(wú)細(xì)胞核，胞質(zhì)呈均勻的淡粉紅色。大小較為一致，形態(tài)規(guī)則。未見(jiàn)明顯異形紅細(xì)胞。*白細(xì)胞（WBC）：*中性粒細(xì)胞：數(shù)量較多。細(xì)胞核呈分葉狀，一般為2-5葉，葉間有染色質(zhì)絲相連，核染色質(zhì)致密呈深紫藍(lán)色。胞質(zhì)豐富，呈淡粉紅色，內(nèi)含有細(xì)小、分布均勻的淡紫紅色顆粒。*淋巴細(xì)胞：數(shù)量次之。細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，一側(cè)常有小凹陷，核染色質(zhì)致密呈深紫藍(lán)色，核仁不明顯。胞質(zhì)較少，呈清澈的淡藍(lán)色，一般無(wú)顆?；蚩梢?jiàn)少量粗大的嗜天青顆粒。*單核細(xì)胞：數(shù)量較少。體積較大，細(xì)胞核形態(tài)多樣，可呈圓形、腎形、馬蹄形或不規(guī)則形，核染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀，淡紫藍(lán)色。胞質(zhì)豐富，呈灰藍(lán)色或淡粉紅色，內(nèi)含有細(xì)小的灰塵樣紫紅色顆粒。*嗜酸性粒細(xì)胞：偶見(jiàn)。細(xì)胞核多為2葉，呈“八”字形。胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大、均勻、圓形的鮮紅色嗜酸性顆粒。*嗜堿性粒細(xì)胞：未觀察到。*血小板（PLT）：體積小，呈不規(guī)則形，無(wú)細(xì)胞核，呈淡紫紅色，常聚集成群或散在分布于紅細(xì)胞之間，可見(jiàn)細(xì)小的紫紅色顆粒。（可在此處附手繪血細(xì)胞形態(tài)圖或粘貼顯微攝影圖片，并加以標(biāo)注）3.白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)（100個(gè)白細(xì)胞）：（注：實(shí)際操作中需分類(lèi)計(jì)數(shù)____個(gè)白細(xì)胞，此處為示例）*中性粒細(xì)胞：約65%*淋巴細(xì)胞：約30%*單核細(xì)胞：約4%*嗜酸性粒細(xì)胞：約1%*嗜堿性粒細(xì)胞：0%六、討論1.實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素：本次實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于推片時(shí)角度（約35度）和速度控制得當(dāng)，使得血涂片厚薄適中；染色時(shí)間和染液緩沖液比例掌握較好，細(xì)胞著色清晰，結(jié)構(gòu)分明。2.可能存在的問(wèn)題及改進(jìn)：在染色過(guò)程中，初期染液與緩沖液混合時(shí)泡沫不夠均勻，后期用洗耳球輕輕吹動(dòng)后得到改善。今后操作應(yīng)注意使染液與緩沖液充分混合。油鏡觀察時(shí)，部分區(qū)域細(xì)胞略有重疊，需仔細(xì)尋找細(xì)胞分散良好的視野。3.血細(xì)胞形態(tài)的臨床意義：各類(lèi)血細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量變化對(duì)臨床疾病的診斷具有重要價(jià)值。例如，中性粒細(xì)胞增多常見(jiàn)于細(xì)菌感染；淋巴細(xì)胞增多常見(jiàn)于病毒感染；嗜酸性粒細(xì)胞增多可能與過(guò)敏或寄生蟲(chóng)感染相關(guān)。準(zhǔn)確識(shí)別血細(xì)胞形態(tài)是血液學(xué)檢驗(yàn)的基礎(chǔ)。七、結(jié)論1.本次實(shí)驗(yàn)成功制備了合格的人體血液涂片，并通過(guò)瑞氏染色法獲得了良好的染色效果。2.在顯微鏡下能夠清晰分辨紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及血小板的典型形態(tài)特征。3.初步掌握了白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)的方法（示例數(shù)據(jù)為中性粒細(xì)胞65%，淋巴細(xì)胞30%，單核細(xì)胞4%，嗜酸性粒細(xì)胞1%）。八、思考題1.瑞氏染色中，緩沖液的作用是