新冠病毒核酸檢測作為疫情防控的關(guān)鍵技術(shù)手段，其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到疫情的精準(zhǔn)研判與有效控制。整個流程環(huán)環(huán)相扣，任何一個環(huán)節(jié)的疏漏都可能導(dǎo)致結(jié)果偏差，甚至造成誤診、漏診。本文將從標(biāo)本采集、送檢運輸至實驗室處理的全流程進行詳細闡述，旨在為一線操作人員提供一套相對完整且具操作性的實踐指南。一、標(biāo)本采集：源頭把控，規(guī)范操作是前提標(biāo)本采集是核酸檢測的“第一關(guān)”，其質(zhì)量直接決定了后續(xù)檢測的成敗。規(guī)范的采集操作能夠最大限度地保證所采標(biāo)本中含有足夠量的目標(biāo)病毒核酸。（一）采集前準(zhǔn)備與人員防護采集前，需對采集環(huán)境進行必要的清潔與消毒。采集人員必須嚴(yán)格按照生物安全防護要求，穿戴好個人防護用品，通常包括醫(yī)用防護口罩、護目鏡或面屏、防護服、一次性乳膠手套、鞋套等。每采集一人次，均需更換手套，并進行手消毒，避免交叉感染。同時，應(yīng)提前準(zhǔn)備好合格的采集管（內(nèi)含病毒保存液）、一次性使用無菌采樣拭子、密封袋、標(biāo)簽、手消毒劑等物資，并確保其在有效期內(nèi)。對于受檢者，應(yīng)提前告知其采集流程及配合要點，如采集前半小時避免進食、飲水、吸煙、嚼口香糖等，以減少對采集過程的干擾。（二）常用標(biāo)本類型與采集方法目前，新冠病毒核酸檢測最常用的標(biāo)本類型為鼻咽拭子和口咽拭子。1.鼻咽拭子采集：受檢者頭部微仰，采集人員一手輕扶其頭部，另一手持帶有拭子的采集管。將拭子貼鼻孔進入，沿下鼻道的底部向后緩緩深入，待拭子頂端到達鼻咽腔后壁時，輕輕旋轉(zhuǎn)一周（約3-5秒），然后緩緩取出拭子，立即將拭子頭浸入含保存液的采集管中，折斷拭子桿，使拭子頭完全浸泡在保存液內(nèi)，旋緊管蓋。此方法能較好地采集到鼻咽部上皮細胞，病毒載量相對較高，是目前推薦的首選采集方法。2.口咽拭子采集：受檢者頭部微仰，嘴張大，并發(fā)出“啊”音，充分暴露咽喉部。采集人員將拭子越過舌根，在咽腭弓兩側(cè)或扁桃體隱窩、扁桃體表面稍微用力來回擦拭至少3次，然后取出拭子，同樣立即浸入含保存液的采集管中，折斷拭子桿，旋緊管蓋?？谘适米硬杉鄬啽悖軝z者不適感較低，但可能因采集部位不當(dāng)、受檢者配合度不高等因素影響標(biāo)本質(zhì)量。無論采用何種采集方式，均需確保拭子頭部充分接觸采集部位黏膜，輕柔旋轉(zhuǎn)并適當(dāng)停留，以保證足夠的細胞量被采集。采集后，應(yīng)立即在采集管上標(biāo)注清楚受檢者信息、采集時間、采集地點及采集人員等關(guān)鍵信息。（三）采集后即時處理單個標(biāo)本采集管應(yīng)放入密封袋內(nèi)，若為混采，則需將同一批次的采集管一同放入密封袋，并確保密封完好。疑似病例或確診患者的標(biāo)本，應(yīng)按照生物安全規(guī)定進行雙層包裝，并明確標(biāo)識。二、標(biāo)本送檢：安全高效，無縫銜接是保障采集后的標(biāo)本應(yīng)盡快送至指定的核酸檢測實驗室進行檢測。送檢過程需嚴(yán)格遵守生物安全和冷鏈運輸相關(guān)規(guī)定，確保標(biāo)本在運輸途中的安全性、完整性和穩(wěn)定性。（一）標(biāo)本包裝與標(biāo)識標(biāo)本在送檢前必須進行規(guī)范包裝，通常采用三層包裝體系。第一層為密封的采集管，第二層為防滲漏的密封袋（可放置冰排以維持低溫），第三層為堅固的運輸箱。運輸箱外需粘貼醒目的生物危害標(biāo)識、易碎標(biāo)識，并注明標(biāo)本類型、數(shù)量、接收單位、發(fā)送單位、發(fā)送日期、所需溫度條件等信息。（二）運輸條件與時限標(biāo)本運輸應(yīng)符合《病原微生物實驗室生物安全管理條例》及相關(guān)運輸規(guī)范的要求。對于使用含病毒保存液的標(biāo)本，通常建議在2-8℃條件下冷藏運輸。運輸時限應(yīng)盡可能縮短，理想情況下，標(biāo)本采集后應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)送達實驗室。若無法及時送達，需根據(jù)保存液的特性，在合適的條件下暫存，但不宜過長，以免影響病毒核酸的穩(wěn)定性。運輸過程中，應(yīng)避免劇烈震蕩、陽光直射和極端溫度。運輸人員需熟悉運輸路線，確保運輸過程安全、高效。（三）交接與記錄標(biāo)本送達實驗室后，送樣人員與實驗室接收人員需進行嚴(yán)格的交接核對。核對內(nèi)容包括標(biāo)本數(shù)量、標(biāo)識信息、包裝完好性、運輸條件是否符合要求等。雙方確認無誤后，在交接記錄上簽字，并注明接收時間。對于不合格的標(biāo)本，實驗室有權(quán)拒收，并及時與送樣單位溝通。三、實驗室處理流程：精細操作，質(zhì)量控制是核心實驗室是核酸檢測的核心區(qū)域，其處理流程復(fù)雜且對環(huán)境、設(shè)備、人員技能均有較高要求。實驗室需嚴(yán)格分區(qū)，通常包括試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)（或三區(qū)合一，根據(jù)具體檢測系統(tǒng)而定），各區(qū)獨立運行，防止交叉污染。（一）標(biāo)本接收與核對實驗室接收標(biāo)本后，首先在生物安全柜內(nèi)對標(biāo)本進行外部消毒。然后，由專人負責(zé)核對標(biāo)本信息，包括受檢者姓名、編號、采集管完整性、保存液是否滲漏、標(biāo)本量是否充足等。對于信息不全、標(biāo)識不清、標(biāo)本管破損或滲漏的情況，應(yīng)及時與相關(guān)部門溝通處理。核對無誤后，對標(biāo)本進行唯一編號，并錄入實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS）。（二）標(biāo)本滅活與前處理根據(jù)實驗室規(guī)定和所使用的檢測試劑要求，部分標(biāo)本可能需要進行滅活處理。常用的滅活方式為56℃孵育一定時間。滅活過程需在生物安全柜內(nèi)進行，以確保操作人員安全。滅活后的標(biāo)本，在生物安全柜內(nèi)打開采集管蓋，進行后續(xù)的核酸提取操作。對于冷凍保存的標(biāo)本，需先在室溫或規(guī)定溫度下解凍，并充分混勻。（三）核酸提取核酸提取是實驗室處理的關(guān)鍵步驟，其效率和純度直接影響后續(xù)的擴增反應(yīng)。目前實驗室多采用自動化核酸提取儀配合商品化的核酸提取試劑盒進行操作。操作時，需嚴(yán)格按照試劑盒說明書和儀器操作規(guī)程進行，注意加樣體積的準(zhǔn)確性，避免氣溶膠污染。提取過程中，應(yīng)設(shè)置陰性對照（如無核酸酶水）和陽性對照（已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品），以監(jiān)控提取過程是否受到污染以及提取效率。提取完成后的核酸產(chǎn)物應(yīng)妥善保存，盡快進行擴增檢測。（四）核酸擴增與檢測核酸擴增通常采用實時熒光RT-PCR方法。在試劑準(zhǔn)備區(qū)，按照試劑說明書配制PCR反應(yīng)體系，包括酶、引物探針、緩沖液等。配制好的反應(yīng)體系需在低溫條件下保存，并盡快轉(zhuǎn)移至標(biāo)本制備區(qū)或擴增區(qū)。在指定區(qū)域內(nèi)，將提取的核酸模板加入到PCR反應(yīng)管中，注意避免交叉污染。加樣完成后，將反應(yīng)管密封，離心去除氣泡，然后放入熒光定量PCR儀中。設(shè)置好儀器參數(shù)（如循環(huán)數(shù)、退火溫度、熒光采集通道等），啟動擴增程序。擴增過程中，儀器會實時監(jiān)測熒光信號的變化。實驗人員需密切關(guān)注儀器運行狀態(tài)。（五）結(jié)果判讀與報告擴增反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)試劑盒說明書提供的判讀標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合陽性對照、陰性對照、內(nèi)參（如人RNaseP基因）的擴增情況，對每一份標(biāo)本的結(jié)果進行判讀。結(jié)果通常分為陽性、陰性和不確定（可疑）。對于不確定結(jié)果，需進行復(fù)核，必要時重新采集標(biāo)本進行檢測。檢測結(jié)果確認后，由授權(quán)人員審核并簽發(fā)報告。報告內(nèi)容應(yīng)包括受檢者基本信息、標(biāo)本類型、采集時間、檢測時間、檢測方法、檢測結(jié)果、參考范圍及必要的解釋說明等。同時，檢測數(shù)據(jù)應(yīng)及時上傳至相關(guān)信息平臺，以便疫情防控部門掌握情況。結(jié)語新冠病毒核酸檢測是一項系統(tǒng)性工程，從標(biāo)本采集的規(guī)范操作，到運輸環(huán)節(jié)的安全保障，再到