1、微生物學(xué)復(fù)習(xí)資料微生物學(xué)復(fù)習(xí)資料 第一章第一章 原核微生物的形態(tài)、構(gòu)造和功能原核微生物的形態(tài)、構(gòu)造和功能 伴孢晶體：少數(shù)芽孢桿菌在形成芽孢的同時(shí)，會(huì)在芽孢旁形成一顆菱形、方形或 不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體，稱為伴孢晶體（即內(nèi)毒素） 。 L 型細(xì)菌：在某些環(huán)境條件下（實(shí)驗(yàn)室或宿主體內(nèi)）通過自發(fā)突變而形成的遺傳 性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷變異型。1沒有完整而堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，細(xì)胞呈多形態(tài)，有 些能通過細(xì)菌濾器，故又稱“濾過型細(xì)菌”。對(duì)滲透敏感，在固體培養(yǎng)基上形成 “油煎蛋”似的小菌落（直徑在 0.1mm 左右） 古生菌：又稱古細(xì)菌，是一個(gè)在進(jìn)化途徑上很早就與真細(xì)菌和真核生物相互獨(dú)立 的生物類群，主要包括一些獨(dú)

2、特生態(tài)類型的原核生物，如產(chǎn)甲烷菌及大多數(shù)嗜極 菌。 4、試比較 G+和 G-細(xì)菌細(xì)胞壁的異同。 成 分革蘭氏陽性細(xì)菌革蘭氏陰性細(xì)胞 肽聚糖 磷壁酸 類脂質(zhì) 蛋白質(zhì) 含量很高（30-95） 含量較高（50） 一般無（2） 0 含量很低（520） 0 含量較高（約 20） 含量較高 5、簡(jiǎn)述革蘭氏染色法的機(jī)制并說明此法的重要性。 革蘭氏染色機(jī)制：結(jié)晶紫液初染和碘液媒染：在細(xì)菌的細(xì)胞膜內(nèi)可形成不溶于水 的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物。乙醇脫色：G細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致 密且不含類脂，把結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其保持紫色；G-細(xì)胞 壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，結(jié)晶紫與碘復(fù)

3、合物的溶出， 使細(xì)胞退成無色。復(fù)染: G-細(xì)菌呈現(xiàn)紅色，而 G+細(xì)菌則仍保留最初的紫色。 重要性: 革蘭氏染色有著十分重要的理論與實(shí)踐意義。通過這一染色，幾乎可把 所有的細(xì)菌分成革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌兩個(gè)大類， 因此它是分類鑒定菌種 時(shí)的重要指標(biāo)。又由于這兩大類細(xì)菌在細(xì)胞結(jié)構(gòu)、成分、形態(tài)、生理、生化、 遺 傳、免疫、生態(tài)和藥物敏感性等方面都呈現(xiàn)出明顯的差異，因此任何細(xì)菌只要通 過簡(jiǎn)單的革蘭氏染色，就可提供不少其他重要的生物學(xué)特性方面的信息。 第二章第二章 真核微生物的形態(tài)、構(gòu)造和功能真核微生物的形態(tài)、構(gòu)造和功能 1 子實(shí)體：是指在其里面或上面可產(chǎn)生無性或有性孢子，有一定形狀和構(gòu)造的任 何菌

4、絲體組織 2 菌物界：指與動(dòng)物界，植物界相并列的一大群無葉綠素，依靠細(xì)胞表面吸收有 機(jī)養(yǎng)料，細(xì)胞壁一般含幾丁質(zhì)的真核微生物 3 二級(jí)菌絲：又稱氣生菌絲，由基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)菌絲長(zhǎng)出培養(yǎng)基外伸向空間的菌絲。 它是擔(dān)子菌中由相應(yīng)的異性的初生菌絲進(jìn)行體細(xì)胞接合而形成的菌絲。其 具有分枝狀者稱為次生菌絲體。 4 鎖狀聯(lián)合: 擔(dān)子菌亞門中多數(shù)擔(dān)子菌的雙核菌絲，在進(jìn)行細(xì)胞分裂時(shí)，于菌絲 的分隔處形成的一個(gè)側(cè)生的喙?fàn)罱Y(jié)構(gòu)稱鎖狀聯(lián)合。 生理意義：保證了雙核菌絲在進(jìn)行細(xì)胞分裂時(shí)，每節(jié)（每個(gè)細(xì)胞）都能含有兩個(gè) 異質(zhì)（遺傳型不同）的核，為進(jìn)行有性生殖，通過核配形成擔(dān)子打下基礎(chǔ)。鎖狀 聯(lián)合是雙核菌絲的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，凡是產(chǎn)生鎖狀聯(lián)合

5、的菌絲均可斷定為雙核。鎖狀聯(lián) 合也是擔(dān)子菌亞門的明顯特征之一。 簡(jiǎn)答題 1、細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌四大類微生物的菌落有何不同？為什么？ 菌落細(xì)菌酵母菌放線菌霉菌 含水形態(tài)很濕或較濕較濕干燥或較干燥干燥 外觀形態(tài)小而突起或大而平坦大而突起小而緊 密大而疏松或大而致密 菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明 菌落與培養(yǎng)基結(jié)合程度不結(jié)合不結(jié)合牢固結(jié)合較牢固 結(jié)合 菌落顏色多樣單調(diào)，一般呈乳脂或礦燭色，少數(shù)紅色或黑 色十分多樣十分多樣 菌落正反面顏色的差別相同相同一般不同一般不同 菌落邊緣一般看不到細(xì)胞可見球狀，卵圓狀或假絲狀細(xì) 胞有時(shí)可見細(xì)絲狀細(xì) 胞 可見粗絲狀細(xì)胞 氣味一般有臭味多帶酒香味帶

6、有泥腥 味往往有霉味 原因：因?yàn)榧?xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的形態(tài)和生理類型不盡相同，所以在其 菌落形態(tài)，構(gòu)造等特征上也有各自的特點(diǎn)。 2、試比較細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌細(xì)胞壁成分的異同。 細(xì)菌分為 G+和 G-，G+肽聚糖含量高，G-含量低；G+磷壁酸含量較高，而 G- 不含磷壁酸；G+類脂質(zhì)一般無，而 G-含量較高；G+不含蛋白質(zhì)，G-含量較高。 放線菌為 G+，其細(xì)胞壁具有 G+所具有的特點(diǎn)。酵母菌和霉菌為真菌，酵母菌 的細(xì)胞壁外層為甘露聚糖，內(nèi)層為葡聚糖；而霉菌的細(xì)胞壁成分為幾丁質(zhì)、蛋白 質(zhì)、葡聚糖。 3 青霉素只對(duì)處于生長(zhǎng)繁殖旺盛時(shí)期的細(xì)胞有抑制作用，而對(duì)處于休止?fàn)顟B(tài)的細(xì) 胞沒有抑制

7、作用，請(qǐng)分析這種說法的正誤，并說明你的理由。 原因：青霉素抑制肽聚糖的合成過程，形成破裂的細(xì)胞壁，代謝旺盛的細(xì)菌才存 在肽聚糖的合成，因此此時(shí)有青霉素作用時(shí)細(xì)胞易死亡。 作用機(jī)制：青霉素破壞肽聚糖合成過程中肽尾與肽橋間的轉(zhuǎn)肽作用。 對(duì)革蘭陽性菌有效，由于革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋所以青霉素對(duì)其作用不大。 補(bǔ)充： 第三章第三章 病毒和亞病毒病毒和亞病毒 1 溫和性噬菌體：噬菌體侵染宿主后，并不增殖，裂解，而與宿主 DNA 結(jié)合， 隨宿主 DNA 復(fù)制而復(fù)制，此時(shí)細(xì)胞中找不到形態(tài)上可見的噬菌體，這種噬菌體 稱為溫和性噬菌體或溶源噬菌體。 2 溶原菌：含有溫和性噬菌體的細(xì)菌稱為溶源性細(xì)菌。 溶源性噬菌

8、體附著或整合在宿主染色體上，一道復(fù)制。 3 包涵體： 4 類病毒：是一類只含 RNA 一種成分，專性寄生在活細(xì)胞內(nèi)的分子病原體。 1、什么叫烈性噬菌體？簡(jiǎn)述其裂解性生活史。 烈性噬菌體：凡在短時(shí)間內(nèi)能連續(xù)完成吸附、侵入、增殖、成熟、 裂解這五 個(gè)階段而實(shí)現(xiàn)其繁殖的噬菌體，稱為烈性噬菌體。 吸附 噬菌體尾絲散開，固著于特異性受點(diǎn)上。侵入 尾鞘收縮，尾管 推出并插入到細(xì)胞壁和膜中，頭部的核酸注入到宿主細(xì)胞中，而蛋白質(zhì)衣殼留在 細(xì)胞壁外。增殖 增殖過程包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的生物合成。注入細(xì)胞 的核酸操縱宿主細(xì)胞代謝機(jī)構(gòu)，以寄主個(gè)體及細(xì)胞降解物和培養(yǎng)基介質(zhì)為原料， 大量復(fù)制噬菌體核酸，并合成蛋白質(zhì)外

9、殼。成熟（裝配）寄主細(xì)胞合成噬菌 體殼體(T4 噬菌體包括頭部、尾部),并組裝成完整的噬菌體粒子。裂解（釋 放）子代噬菌體成熟后，脂肪酶和溶菌酶促進(jìn)宿主細(xì)胞裂解，從而釋放出大量子 代噬菌體。 第四章第四章 微生物的營(yíng)養(yǎng)和培養(yǎng)基微生物的營(yíng)養(yǎng)和培養(yǎng)基 1 生長(zhǎng)因子：一類對(duì)微生物正常代謝必不可少且又不能從簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合 成的所需極微量的有機(jī)物。 2 基團(tuán)移位： 指一類既需特異性載體蛋白的參與， 又需耗能的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。 其機(jī)制分兩步：（1）HPr 被 PEP 激活，（2）糖經(jīng)磷酸化而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。 3 選擇性培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基是一類根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化 學(xué)、 物理因素的抗性而

10、設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的 功能， 廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。如酵母富集培養(yǎng)基中的孟加拉紅抑制細(xì)菌的生 長(zhǎng)而對(duì)酵母菌無影響，偏酸性的環(huán)境有利于酵母菌的生長(zhǎng)。 4 鑒別性培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中加入能于某一菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示 劑， 從而用肉眼就能使該菌菌落與外形相似的它種菌落相區(qū)分的培養(yǎng)基就稱鑒別 性培養(yǎng)基。 1 試比較細(xì)胞膜運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式。 比較項(xiàng)目單純擴(kuò)散促進(jìn)擴(kuò)散主動(dòng)運(yùn)輸基因移位 特異載體蛋白無 慢 由濃至稀 內(nèi)外相等 無特異性 不需要 不變 無 無競(jìng)爭(zhēng)性 無 H2O、CO2、 O2 甘油、乙 醇、少數(shù)氨基 酸、鹽類、代 謝抑制劑 有 快 由濃至稀 內(nèi)

11、外相等 特異性 不需要 不變 有 有競(jìng)爭(zhēng)性 有 SO42+、 PO43+、 糖 （真 核生物） 有 快 由稀至濃 內(nèi)部濃度高得 多 特異性 需要 不變 有 有競(jìng)爭(zhēng)性 有 有 快 由稀至濃 內(nèi)部濃度高得 多 特異性 需要 改變 有 有競(jìng)爭(zhēng)性 有 運(yùn)送速度 溶質(zhì)運(yùn)送方向 平衡時(shí)內(nèi)外濃 度 運(yùn)送分子 能量消耗 運(yùn)送前后溶質(zhì) 分子 載體飽和效應(yīng) 與溶質(zhì)類似物 運(yùn)送抑制劑 運(yùn)送對(duì)象舉例氨基酸、乳糖 等糖類、Na+、 Ca2+ 等 無 機(jī) 離子 葡萄糖、 果糖、 甘露糖、 嘌呤、 核苷、脂肪酸 等 2、什么是鑒別性培養(yǎng)基？試以 EMB 培養(yǎng)基為例，分析其鑒別作用的原理。 鑒別性培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中加入能于某

12、一菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示 劑， 從而用肉眼就能使該菌菌落與外形相似的它種菌落相區(qū)分的培養(yǎng)基就稱鑒別 性培養(yǎng)基。 EMB 作用原理 其中的伊紅和美藍(lán)兩種苯胺染料可抑制革蘭氏陽性細(xì)菌和一些難培養(yǎng)的革 蘭氏陰性細(xì)菌。 在低酸度時(shí)， 這兩種染料結(jié)合形成沉淀， 起著產(chǎn)酸指示劑的作用。 因此試樣中的多種腸道細(xì)菌會(huì)在 EMB 培養(yǎng)基上產(chǎn)生相互易區(qū)分的特征菌落，因 而易于辨認(rèn)。尤其是大腸桿菌，因其強(qiáng)烈分解乳搪而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶 H+故可染上酸性染料伊紅，又因伊紅與美藍(lán)結(jié)合，所以菌落染上深紫色，從菌 落表面的反射光中還可看到綠色金屬閃光。 3、簡(jiǎn)述配制培養(yǎng)基的基本原則:P91 培養(yǎng)基是人工配

13、制的供不同微生物生長(zhǎng)繁殖，或用于積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 所以配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意以下原則： 1 目的明確 2 營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào) 3 理化適宜 4 經(jīng)濟(jì)節(jié)約 1.根據(jù)微生物的不同選用不同的培養(yǎng)基， 2.注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度與配比。 3. 注意將培養(yǎng)基的 pH 值控制在一定范圍內(nèi)。 6、試述配制培養(yǎng)基的基本過程及應(yīng)該注意的問題。 配制培養(yǎng)基的基本過程是: 按培養(yǎng)基的配方稱取各種藥品，用量太少的藥品應(yīng)配制成溶液后再取一定量加 入。 將各種藥品加水溶解，通常是加所需水量的一半。 若配固體培養(yǎng)基，按 2%的用量稱取瓊脂，用水將瓊脂浸濕一下，用手?jǐn)D去瓊脂 中過多的水分，加入 2 的溶液中。 加熱至瓊脂全部溶解，

14、并補(bǔ)足所需的全部水量。 用 1molNaOH 和 1molHCL 調(diào)節(jié) pH 至要求值。 用分裝器將培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶中，塞上棉塞并包扎，滅菌后備用。 注意事項(xiàng): 配制過程中，在加熱熔化瓊脂時(shí)，要不斷攪拌，以防糊底。 分裝時(shí)不要讓培養(yǎng)基沾染試管口或瓶口，以防培養(yǎng)過程中容易污染雜菌。 同時(shí)還應(yīng)考慮培養(yǎng)基的氧化還原電位及原材料的經(jīng)濟(jì)、易購和來源廣泛的原則。 Ashby 無氮培養(yǎng)基：（富集好氧性自生固氮菌用） 甘露醇 1%，KH2PO4 0.25%， MgSO4.7H2O 0.02%，NaCL 0.02% ，CaSO4.2H2O 0.01%，CaCO3 0.05%。試述其碳 源 氮源 能源物質(zhì)

15、各是什么？ CaCO3 起什么作用？ 該 培 養(yǎng) 基 的 C 素 來 源 和 能 量 來 源 均 來 自 甘 露 醇 。 該 培 養(yǎng) 基 未 提 供 氮 素 來 源 ， 根據(jù) 所 學(xué) 知 識(shí) ， 只 有 能 固 氮 的 微 生 物 才 能 在 無 氮 培 養(yǎng) 基 上 生 長(zhǎng) 。該 培 養(yǎng) 基 的 礦 質(zhì) 營(yíng) 養(yǎng) 物 質(zhì) 包 括 ：Mg 2+, K+, Cu2+ , Na +, PO 4 3-, SO 4 2- HPO4 2-, PO 4 3-, CaCO 3主 要 用 來 作 緩 沖 物 質(zhì) 調(diào) 節(jié) 培 養(yǎng) 基 的 pH 值 , 以 保 持 pH 不 變 。 據(jù) 此 我 們 可 推 知 該培

16、養(yǎng) 基 可 用 于 培 養(yǎng) 自 生 固 氮 菌 等 微 生 物 。 第五章第五章 微生物的新陳代謝微生物的新陳代謝 1 次生代謝產(chǎn)物： 指某些微生物生長(zhǎng)到穩(wěn)定期前后， 以結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單， 代謝途徑明確， 產(chǎn)量較大的初生代謝產(chǎn)物作前體， 通過復(fù)雜的次生代謝途徑所合成的各種結(jié)構(gòu)復(fù) 雜的化學(xué)物。如抗生素，生物堿，信息素等。 2 ED 途徑:ED 是少數(shù) EMP 途徑不完整的細(xì)菌所特有的利用葡萄糖的替代途 徑，為微生物所特有。一分子葡萄糖經(jīng) ED 途徑可生成兩個(gè)丙酮酸并凈生成一個(gè) ATP、一個(gè) NADH+H+和一個(gè) NADPH+H+。 ED途徑的特點(diǎn)： aKDPG裂解為丙酮酸和3-磷酸甘油醛b存在一特征性酶

17、KDPG 醛縮酶 c 其終產(chǎn)物兩分子丙酮酸來歷不同，其一由 KDPG 直接裂解而成，另一 則有 3-磷酸甘油醛經(jīng) EMP 途徑轉(zhuǎn)化而來 d 產(chǎn)能效率低。 TCA 循環(huán)特點(diǎn)：a 氧雖不直接參與其中反應(yīng)，但必須在有氧條件下運(yùn)轉(zhuǎn) b 每分 子丙酮酸可產(chǎn)生 4 個(gè) NADH+H+，一個(gè) FADH2，一個(gè) GTP, 總共相當(dāng)于 15 個(gè) ATP，因此產(chǎn)能效率極高 cTCA 位于一切分解代謝和合成代謝的樞紐地位，不僅 可以為微生物的合成代謝提供各種碳架原料，而且還與人類的發(fā)酵生產(chǎn)密切相 關(guān)。 3 發(fā)酵： 目前泛指任何好氧型或厭氧型微生物來生產(chǎn)有用代謝產(chǎn)物或食品飲料的 一類生產(chǎn)方式。 （ 無氧等外源氫受體的

18、條件下，底物脫氫后產(chǎn)生的還原力不經(jīng)呼 吸鏈而直接傳遞給某一內(nèi)源性中間代謝物接受， 以實(shí)現(xiàn)底物水平磷酸化的一類生 物氧化反應(yīng)。 ） 4 異型乳酸發(fā)酵（HMP） ：凡葡萄糖經(jīng)乳酸發(fā)酵后除主要產(chǎn)生乳酸外，還產(chǎn)生乙 醇，乙酸和 CO2 等多種產(chǎn)物的發(fā)酵稱異型乳酸發(fā)酵。 5 生物固氮：大氣中的分子氮通過微生物固氮酶的催化作用而還原成氨的過程， 生物界中只有原核生物才有固氮能力。 生物固氮 6 要素：ATP 的供應(yīng)，還原力及其傳遞載體， 固氮酶，還原底物 N2， 鎂離子，嚴(yán)格的厭氧環(huán)境。 固氮酶除了催化 N2 生產(chǎn) NH3 外，還具有催化 2H+ +2e-H2 反應(yīng)的氫化酶活 性。 肽聚糖分成分 3 個(gè)階

19、段：a 在細(xì)胞質(zhì)中合成，合成 PARK 核苷酸，UDP 作為糖 載體。 B 在細(xì)胞膜中合成，合成肽聚糖單體 ， 稱作細(xì)菌萜醇的類脂載體。 C 在細(xì)胞膜外合成，交聯(lián)作用形成肽聚糖。 青霉素作用于肽聚糖的合成過程，對(duì)肽聚糖已合成好的細(xì)菌（處于停滯期）無作 用。 轉(zhuǎn)肽作用可被青霉素抑制，其作用機(jī)制是：青霉素是肽聚糖單體五鈦尾末端的 D-丙氨酰-D-丙氨酸的結(jié)構(gòu)類似物。 應(yīng)用營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株解除正常的反饋調(diào)節(jié)。舉例：a 賴氨酸發(fā)酵 b 肌氨酸的生產(chǎn) 生物氧化的形式包括某物質(zhì)與氧結(jié)合， 脫氫和失去電子 3 種。 生物氧化的過程可 分為脫 H,遞 H,受 H3 個(gè)階段，生物氧化的功能有產(chǎn)能，產(chǎn)還原力，和產(chǎn)小

20、分子 中間代謝產(chǎn)物 3 種。生物氧化的類型包括呼吸，無氧呼吸，發(fā)酵 3 種。 底物脫氫 4 種途徑：EMP,HMP,ED,TCA 循環(huán)。 EMP 途徑的特點(diǎn)和意義：供應(yīng) ATP 形式的能量和 NADH2 形式的還原力，連接 其他三個(gè)重要途徑的橋梁，為微生物合成提供多種重要的中間產(chǎn)物，通過逆向反 應(yīng)可進(jìn)行多糖合成。 HMP 當(dāng)葡萄糖經(jīng)一次磷酸化脫氫生成 6-磷酸葡萄糖酸后，在 6-磷酸葡萄糖酸脫 酶作用下，再次降解為 14 分子 CO2 和 1 分子磷酸戊糖。作用：供應(yīng)合成原 料； 產(chǎn)還原力； 作為固定 CO2 的中介； 擴(kuò)大碳源的利用范圍； 連接 EMP 途徑。特點(diǎn)：葡萄糖不經(jīng) EMP 途徑和

21、 TCA 循環(huán)而得到徹底氧化，并能產(chǎn)生大 量 NADPH+H+形式的還原力及多種重要的中間產(chǎn)物。 呼吸，又稱好氧呼吸，特點(diǎn)是底物按常規(guī)方式脫氫后，脫下的氫經(jīng)完整的呼吸鏈 又稱電子傳遞鏈傳遞， 最終被外源分子氧接受， 產(chǎn)生水并釋放 ATP 形式的能量。 無氧呼吸： 指一類呼吸鏈末端的 H 受體為外源無機(jī)氧化物(少數(shù)為有機(jī)物)的生物 氧化。特點(diǎn)：底物按常規(guī)方式脫氫后，經(jīng)部分呼吸鏈遞氫，最終由氧化態(tài)的無機(jī) 物或有機(jī)物受氫，并完成氧化磷酸化途徑產(chǎn)能反應(yīng)。 碳酸鹽呼吸：是一類以 CO2 或碳酸鹽作為呼吸鏈末端氫受體的無氧呼吸。根據(jù) 其還原產(chǎn)物不同分為兩類;產(chǎn)甲烷菌產(chǎn)生的甲烷的碳酸鹽呼吸，其二是產(chǎn)乙酸菌

22、產(chǎn)生乙酸的碳酸鹽呼吸。 第六章第六章 微生物的生長(zhǎng)及其控制微生物的生長(zhǎng)及其控制。 1 恒濁器：根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長(zhǎng)密度，借光電控制系統(tǒng)控制培養(yǎng)液流速， 以達(dá)到菌體密度高，生長(zhǎng)速率恒定的連續(xù)培養(yǎng)器。 2 恒化器：通過保持有一種生長(zhǎng)限制因子的培養(yǎng)液的流速不變，可使微生物始終 處在低于其最高生長(zhǎng)速率的條件下進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖的連續(xù)培養(yǎng)器。 3 同步生長(zhǎng)：通過獲得同步培養(yǎng)物的手段，使細(xì)胞群體中各個(gè)體都處于分裂步調(diào) 一致的生長(zhǎng)狀態(tài) 4 連續(xù)培養(yǎng)：指微生物接種到培養(yǎng)基里以后的整個(gè)生長(zhǎng)期間，微生物能持續(xù)地以 比較恒定的生長(zhǎng)速率常數(shù)進(jìn)行生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致微生物的生長(zhǎng)過程能“不斷”地進(jìn)行 下去的一種培養(yǎng)方法。 優(yōu)點(diǎn)：

23、高效、低耗、利于自控、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。 缺點(diǎn) 菌種易于退化；容易污染；營(yíng)養(yǎng)物的利用率低于分批培養(yǎng)。 因此連 續(xù)時(shí)間是有限的 5 石碳酸系數(shù)： 在一定時(shí)間內(nèi)， 被試藥劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達(dá)到 同效的石碳酸的稀釋度之比。P179 1、什么是典型生長(zhǎng)曲線？它可分幾期？劃分的依據(jù)是什么？各期特點(diǎn)如何？ 典型生長(zhǎng)曲線 ：將少量純種單細(xì)胞微生物接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 在適宜條件下，其群體就會(huì)有規(guī)律地生長(zhǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞含量，以細(xì)胞數(shù)目 的對(duì)數(shù)值作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，就可以畫出一條有規(guī)律的曲線，這就 是微生物的典型生長(zhǎng)曲線。 劃分的依據(jù)：?jiǎn)渭?xì)胞微生物。 (1)延滯期(停滯期、調(diào)

24、整期) 特點(diǎn)：a.生長(zhǎng)速率常數(shù)為零；b.細(xì)胞形態(tài)變大或 增大；c.細(xì)胞內(nèi) RNA 尤其是 rRNA 含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性。d.合成代謝活 躍；e.對(duì)外界不良條件的反應(yīng)敏感。 (2) 對(duì)數(shù)期 特點(diǎn)：此時(shí)菌體細(xì)胞生長(zhǎng)的速率常數(shù) R 最大，分裂快，代時(shí)短， 細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)，菌體內(nèi)酶系活躍，代謝旺盛，菌體數(shù)目以幾何級(jí)數(shù)增加， 群 體的形態(tài)與生理特征最一致，抗不良環(huán)境的能力強(qiáng)。 穩(wěn)定期 特點(diǎn)： a.生長(zhǎng)速率常數(shù)為零； b.菌體產(chǎn)量達(dá)到最高； c.活菌數(shù)相對(duì)穩(wěn)定； d.細(xì)胞開始貯存貯藏物；e.芽孢在這個(gè)時(shí)期形成；f.有些微生物在此時(shí)形成次生 代謝產(chǎn)物。 衰亡期 特點(diǎn)：a.細(xì)胞形態(tài)多樣；b.出現(xiàn)細(xì)胞自

25、溶現(xiàn)象；c.有次生代謝產(chǎn)物的形 成；d.芽孢在此時(shí)釋放。 2、延滯期有何特點(diǎn)？如何縮短延滯期？影響延滯長(zhǎng)短的因素。 特點(diǎn)： a.生長(zhǎng)速率常數(shù)為零； b.細(xì)胞形態(tài)變大或增大； c.細(xì)胞內(nèi) RNA 尤其是 rRNA 含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性。d.合成代謝活躍；e.對(duì)外界不良條件的反應(yīng)敏感。 消除：a. 以對(duì)數(shù)期的菌體作種子菌 ；b. 適當(dāng)增大接種量 ：一般采用 3%8% 的接種量，根據(jù)生產(chǎn)上的具體情況而定，最高不超過 1/10。c. 培養(yǎng)基的成分： 種子培養(yǎng)基盡量接近發(fā)酵培養(yǎng)基 。 影響延滯長(zhǎng)短的因素：1 接種齡 2 接種量 3 培養(yǎng)基成分。 3、微生物培養(yǎng)過程中 pH 變化的規(guī)律如何？如何調(diào)整？

26、 微生物的生命活動(dòng)過程中會(huì)自動(dòng)地改變外界環(huán)境的 pH，其中發(fā)生 pH 改變有變 酸和變堿兩種過程，在一般微生物的培養(yǎng)中往往以變酸占優(yōu)勢(shì)，因此，隨著培養(yǎng) 時(shí)間延長(zhǎng)，培養(yǎng)基的 pH 會(huì)逐漸下降。PH 的變化還與培養(yǎng)基的組分尤其是碳氮 比有很大關(guān)系，碳氮比高的培養(yǎng)基經(jīng)培養(yǎng)后 pH 會(huì)明顯下降；相反，碳氮比低的 培養(yǎng)基經(jīng)培養(yǎng)后，其 pH 常會(huì)明顯上升。 措施：分為“治標(biāo)”和“治本”兩大類，前者指根據(jù)表面現(xiàn)象而進(jìn)行直接、及時(shí)、快 速但不持久的表面化調(diào)節(jié)，后者指根據(jù)內(nèi)在機(jī)制而采用的間接、緩效但可發(fā)揮持 久作用的調(diào)節(jié)。 治標(biāo)：1）過酸時(shí)：加 NaOH 等堿液中和 2）過堿時(shí)：加 H2SO4 等酸液中和 治本

27、：1）過酸時(shí)：加適當(dāng)?shù)矗杭幽蛩?，NaNO3 或蛋白質(zhì)。提高通氣量 2）過堿時(shí)：加適當(dāng)碳源：加糖，乳酸，醋酸，檸檬酸或油脂。 降低通氣量 4、試述高溫滅菌的方法。 1、干熱滅菌法（1）原理：干熱可使細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥， 并可使各種細(xì)胞成分發(fā)生氧化變質(zhì)。 （2）應(yīng)用范圍：1）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法 （150170，12hr） ：金屬器械、洗凈的玻璃器皿。2）火焰灼燒法：接種環(huán)、 接種針等。 2、濕熱滅菌： 即以 100以上的加壓蒸氣進(jìn)行滅菌。 （1）相同溫度及相同作用 時(shí)間下，濕熱滅菌法比干熱滅菌法更有效：濕熱空氣穿透力強(qiáng)，能破壞維持蛋白 質(zhì)空間結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性的氫鍵，能加速其變性。 （

28、2）種類： 1)常壓法 a.巴氏消毒法： 用較低的溫度處理牛乳或其他液態(tài)食品， 殺死其中可能存在的無芽孢病原菌而又不損害營(yíng)養(yǎng)與風(fēng)味的消毒方法。 a)低溫維 持法(LTH)：要求 62.8保持 30min；b)高溫瞬時(shí)法(HTST)：要求 71.7維持至 少 15s； b.煮沸消毒法：a)適用范圍：一般用于飲用水的消毒。b)條件：100 下數(shù)分鐘。c.間隙滅菌法：又稱丁達(dá)爾滅菌法或分段滅菌法。a) 適用范圍：適 用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。b) 條件：80 一 100下蒸煮 1560 分鐘，三天。2) 加壓法：a.常規(guī)加壓法 a) 適用范圍：適合于一切微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)療保健機(jī) 構(gòu)或發(fā)酵工廠中對(duì)培養(yǎng)

29、基及多種器材、物料的滅菌。b) 條件：121(壓力為 lkg cm2)， 時(shí)間維持 1520 分鐘， 也可采用在較低的溫度(115， 即 0.7kgcm2 下維持 35 分鐘的方法。 b.連續(xù)加壓滅菌法：在發(fā)酵行業(yè)里也稱“連消法”。a) 適用范圍：在大規(guī)模的發(fā)酵 工廠中作。 培養(yǎng)基滅菌用。 主要操作是將培養(yǎng)基在發(fā)酵罐外連續(xù)不斷地進(jìn)行加熱、 維持和冷卻，然后才進(jìn)入發(fā)酵罐。b) 條件：在 135140下處理 5 一 l 5 秒鐘 率的菌體實(shí)驗(yàn)室為主 微生物的抗藥性：抗藥性主要通過遺傳途徑產(chǎn)生，如基因突變，遺傳重組和質(zhì)粒 轉(zhuǎn)移等。 產(chǎn)生原因：a 產(chǎn)生一種能使藥物失去活性的酶 b 把藥物作用的靶位加

30、以修飾和改變 c 形成救護(hù)途徑 d 使藥物不能透過細(xì)胞膜 e 通過主動(dòng)外排系統(tǒng)把 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出細(xì)胞外。 第八章第八章 微生物的生態(tài)微生物的生態(tài) 名詞解釋 1 互生：指兩種可以單獨(dú)生活的生物，當(dāng)其生活在一起時(shí)，通過各自的代謝活動(dòng) 而有利于對(duì)方或偏利于一方的生活方式。 2 拮抗：指由某種生物所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長(zhǎng)發(fā)育甚至殺 死它們的一種相互關(guān)系。 3 大腸菌群：指任何可發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的 G-，桿狀，無芽孢，兼性厭氧的腸 道細(xì)菌，典型代表是 E.coli。 4 BOD5：即五日生化需氧量。指在 20下，1L 污水中所含的有機(jī)物，在進(jìn)行 微生物氧化時(shí)，五日內(nèi)所消耗的分子氧的

31、 毫克數(shù)。 1 簡(jiǎn)述微生物與生物環(huán)境間五種常見的關(guān)系，并各舉一例。 互生:指兩種可以單獨(dú)生活的生物，當(dāng)其生活在一起時(shí)，通過各自的代謝活動(dòng)而 有利于對(duì)方或偏利于一方的生活方式。 共生:指兩種生物共居在一起，相互分工協(xié)作、相依為命，甚至達(dá)到難分難解、 合二為一的一種相互關(guān)系。 寄生:指一種小型生物生活在另一種較大型生物的體內(nèi)或體表，從中攝取營(yíng)養(yǎng)進(jìn) 行生長(zhǎng)繁殖，并使后者蒙受損害甚至死亡的現(xiàn)象. 拮抗: 指由某種生物所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長(zhǎng)發(fā)育甚至殺 死它們的一種相互關(guān)系。 混菌培養(yǎng): 又稱混菌發(fā)酵或混合發(fā)酵指在發(fā)酵工業(yè)中采用兩種或兩種以上的具 有互補(bǔ)性質(zhì)的菌種進(jìn)行混合培養(yǎng) 我國(guó)衛(wèi)生部

32、門對(duì)飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)為：每 ml 水細(xì)菌總數(shù)不超過 100 個(gè)，大腸菌 群數(shù)每升水不超過 3 個(gè)。 舉例 1. 互生。金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)為本來在平板上不能生長(zhǎng)的嗜血流感菌提 供生長(zhǎng)因子，后者在其菌苔周圍形成衛(wèi)星菌落。 2. 共生。根瘤菌與豆科植物間的共生形成根瘤共生體，根瘤菌固定大氣中的氣 態(tài)氮為植物提供氮素養(yǎng)料；豆科植物的根的分泌物能刺激根瘤菌的生長(zhǎng)，同時(shí) 還為根瘤菌提供保護(hù)和穩(wěn)定的生長(zhǎng)條件。 3.寄生。冬蟲夏草是子囊菌寄生于鱗翅目幼蟲而形成的。 第九章第九章 1 類毒素：若用 0.3%-0.4%的甲醛溶液對(duì)外毒素進(jìn)行脫毒處理，可獲得失去毒性 但仍保留其原有免疫原性的生物制品，稱為類毒素。

33、 2 半抗原：缺乏免疫原性而有免疫反應(yīng)性的的抗原。 3 干擾素：是高等動(dòng)物細(xì)胞在病毒或 dsRNA 等誘生劑的刺激下，所產(chǎn)生的具有高 活性的，廣譜抗病毒等功能的特異性糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量很小。 4.抗原： 抗原是指一類能誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答并能與相應(yīng)抗體或 T 淋巴細(xì)胞受 體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的大分子物質(zhì)?？乖话銘?yīng)同時(shí)具備兩個(gè)特征：a 免疫原 性 b 免疫反應(yīng)性。 外毒素：指在病原細(xì)菌生長(zhǎng)過程中不斷向外界環(huán)境分泌的一類毒性蛋白，有的屬 于酶有的屬于酶原，有的屬于毒蛋白。 內(nèi)毒素：G-細(xì)胞壁外層的組分之一，其化學(xué)成分是脂多糖。 炎癥:是機(jī)體對(duì)病原體的侵入或其他損失的一種保護(hù)性反應(yīng)，它既是一種病

34、理過 程，又是一種防御病原體入侵的積極的免疫反應(yīng)。 補(bǔ)體： 實(shí)為一補(bǔ)體系統(tǒng)，是存在于正常人體和高等動(dòng)物血清中的一組非特異性血 清蛋白。主要成分是 B 球蛋白。 抗體： 是高等動(dòng)物在抗原物質(zhì)的刺激下，由漿細(xì)胞所產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原在體內(nèi) 外發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。有 5 個(gè)特點(diǎn)：a 僅有魚類以上的脊椎動(dòng)物漿細(xì) 胞所產(chǎn)生 b 必須有相應(yīng)抗原刺激免疫細(xì)胞后才能產(chǎn)生 c 能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異 性， 非共價(jià)和可逆的結(jié)合 d 其化學(xué)本質(zhì)是一類具有體液免疫功能的球蛋白 e 因抗 體是蛋白質(zhì)，故具抗體功能也可作抗原去刺激異種生物產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，即抗抗 體。 目前，純化后的 Ig 已分五類，其統(tǒng)一名稱為 Ig

35、M，A,D,G,E. 典型的 Ig 分子是由一長(zhǎng)一短兩對(duì)多肽鏈對(duì)稱排列而成的一個(gè) Y 型分子。近對(duì)稱 軸的一對(duì)較長(zhǎng)的肽鏈稱為重鏈或 H 鏈，外側(cè)一對(duì)較短的肽鏈稱為輕鏈或 L 鏈。 8.用什么方法可獲得大腸桿菌(E.coli)的組氨酸缺陷型？ 篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株一般要經(jīng)過誘變、淘汰野生型，檢出和鑒定營(yíng)養(yǎng)缺陷型 4 個(gè)環(huán)節(jié)。 將篩選得到的缺陷型菌株分別涂在不加任何氨基酸的基本培養(yǎng)基和加有組 氨酸的基本培養(yǎng)基上，若前者不長(zhǎng)后者長(zhǎng)出菌落，即為組氨酸缺陷型。 第七章 1 質(zhì)粒：凡游離于原核生物核基因組以外，具有獨(dú)立復(fù)制能力的小型共價(jià)閉合環(huán) 狀的 dsDNA 分子。 2 F 因子：又稱 F 質(zhì)?；蛐砸蜃?，

36、是大腸桿菌等細(xì)菌決定性別并有轉(zhuǎn)移能力的質(zhì) 粒 3 溶源轉(zhuǎn)變：當(dāng)正常的溫和噬菌體感染其宿主而使其發(fā)生溶源化時(shí)，因噬菌體基 因整合到宿主的核基因組上，而使宿主獲得了除免疫性外的新遺傳性狀的現(xiàn)象。 4Ames 實(shí)驗(yàn)：利用細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型的回復(fù)突變來檢測(cè)環(huán)境或食品中是否存在化 學(xué)致癌劑的有效方法。 5 光復(fù)活作用：把經(jīng) UV 照射后的微生物立即暴露于可見光下時(shí)，就可出現(xiàn)明顯 降低其死亡率的現(xiàn)象，此即光復(fù)活作用。 6 準(zhǔn)性生殖： 是一種類似有性生殖但比它更原始的兩性生殖方式， 這是一種在同 種而不同菌株的體細(xì)胞間發(fā)生的融合， 它可不借減數(shù)分裂而導(dǎo)致低頻率的基因重 組并產(chǎn)生重組子。其過程是：a 菌絲聯(lián)結(jié) b

37、 形成異核體 c 核融合 d 體細(xì)胞交換和 單倍體化。 7 營(yíng)養(yǎng)缺陷型： 營(yíng)養(yǎng)缺陷型是指通過誘變而產(chǎn)生的缺乏合成某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基 酸、 維生素和堿基等的能力，必須在其基本培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)成分才能正 常生長(zhǎng)的變異株 1 什么叫基因重組？簡(jiǎn)述原核生物和真核生物基因重組的主要形式。P223 兩個(gè)獨(dú)立基因組內(nèi)的遺傳基因通過一定的途徑轉(zhuǎn)移到一起， 形成新的穩(wěn)定基因組 的過程，稱基因重組。 原核生物的基因重組：1 轉(zhuǎn)化 2 轉(zhuǎn)導(dǎo) 3 接合 真核：1 有性雜交 2 準(zhǔn)性雜交 2 什么叫營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株？在實(shí)驗(yàn)室中如何從野生型菌株獲得營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株， 請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)具體的方案。 3 簡(jiǎn)述營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株篩選的

38、主要步驟和方法 P221 篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株一般要經(jīng)過誘變、淘汰野生型,檢出和鑒定營(yíng)養(yǎng)缺陷型 4 個(gè) 步驟。 S1 誘變劑處理；紫外線 S2 淘汰野生型：1 青霉素法 2 菌絲過濾法 S3 檢出缺陷型： 1 夾層培養(yǎng)法； 先在培養(yǎng)皿的底部到一層不含菌的基本培養(yǎng)基， 待凝， 添加一層混有經(jīng)誘變劑處理菌液的基本培養(yǎng)基，其上再澆一層不含菌的基 本培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)后，對(duì)首次出現(xiàn)的菌落用記號(hào)筆一一標(biāo)在皿底。然后，再向培 養(yǎng)皿內(nèi)到一層含有特定生長(zhǎng)因子的基本培養(yǎng)基，長(zhǎng)出的形態(tài)較小的菌株，多數(shù)是 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。 2 限量補(bǔ)充培養(yǎng)法 3 逐個(gè)檢出法 4 影印平板法 S4 鑒定缺陷型：生長(zhǎng)譜法：把營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞制

39、成適當(dāng)濃度的懸液，取 0.1ml 與基本培養(yǎng)基混合后，傾注在培養(yǎng)基內(nèi)，待凝固，表面干燥后，然后再在培養(yǎng)皿 表面加上微量待鑒定缺陷型所需的營(yíng)養(yǎng)物粉末，如氨基酸，維生素，堿基等。 經(jīng) 培養(yǎng)后，若發(fā)現(xiàn)此營(yíng)養(yǎng)物的表面有生長(zhǎng)圈產(chǎn)生，就說明此菌就是該營(yíng)養(yǎng)物的缺陷 型突變株。 4 簡(jiǎn)述誘變育種中應(yīng)堅(jiān)持的基本原則 1 選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑 2 挑選優(yōu)良的出發(fā)菌株 3 處理單細(xì)胞或單孢子懸液 4 選用最適的誘變劑量 5 充分利用復(fù)合處理的協(xié)調(diào)效應(yīng) 6 利用和創(chuàng)造形態(tài)，生理 與產(chǎn)量間的相關(guān)指標(biāo) 7 設(shè)計(jì)高效篩選方案 8 創(chuàng)造新型篩選方法。 5 簡(jiǎn)述 5 種生物菌種保藏的方法 1 冰箱保藏法 2 石蠟油封藏法 3

40、甘油懸液保藏法 4 冷凍干燥保藏法 5 液氮保藏 法 6 試述從自然界中進(jìn)行菌種分離篩選的一般步驟 1）采集菌樣 2） 富集培養(yǎng)：利用選擇性培養(yǎng)基原理，向所采土樣中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物并創(chuàng) 造一些有利于待分離對(duì)象生長(zhǎng)的條件， 使樣品中少量的能分解利用該營(yíng)養(yǎng)物的微 生物大量繁殖，以提高其在群體中的比例，以便于分離。Eg：通過配制選擇性 培養(yǎng)基， 選擇一定的培養(yǎng)條件來控制無關(guān)的微生物至少是數(shù)量上減少盡量無關(guān)的 微生物 如：碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為 唯一碳源， 選擇利用這唯一碳源才能大量正常生長(zhǎng)的微生物， 而淘汰其它微生物。 3 ）純種分離：將增殖培養(yǎng)效果顯著

41、的優(yōu)勢(shì)菌種（混雜生長(zhǎng)的微生物） 。進(jìn)步 控制富集培養(yǎng)的選擇性條件，采用劃線分離法、稀釋分離法等純化方法獲取單菌 落 純種分離法： （1）菌落純：a 平板表面涂布法 b 平板劃線分離法 c 瓊脂培養(yǎng) 基澆注法。 （2）細(xì)胞純：a 用分離小室進(jìn)行單細(xì)胞分離 b 用顯微操縱器 c 用 菌絲尖端切割 4 ）性能測(cè)定 11、如何從土壤中分離得到一個(gè)微生物的純培養(yǎng)體? 首先要根據(jù)分離對(duì)象選擇適宜的培養(yǎng)基。若要分離真菌應(yīng)選用馬丁-孟加拉 紅選擇培養(yǎng)基；若要分離細(xì)菌應(yīng)選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；若要分離放線菌應(yīng)選 用高氏培養(yǎng)基。 土樣采回來后，用常規(guī)的十倍稀釋分離法進(jìn)行稀釋分離，若分離細(xì)菌，一般 稀至 10-8,

42、若分離放線菌,一般稀至 10-6；若分離真菌，一般稀至 10-4。取最后 三個(gè)稀釋度倒平板獲得單個(gè)菌落。 將平板上出現(xiàn)的單菌落轉(zhuǎn)接斜面培養(yǎng)，同時(shí)鏡檢菌體的純度，若不純，應(yīng)將 培養(yǎng)的單菌落斜面再次進(jìn)行稀釋分離。倒平板獲得單菌落，轉(zhuǎn)接斜面培養(yǎng)，同時(shí) 鏡檢菌體的純度。 反復(fù)幾次直到得到菌體單一的單菌落方可認(rèn)為是某一微生物的 純培養(yǎng)體。 制作菌種稀釋液：稱取 10g 甜酒曲壓成粉狀，放入已滅菌的盛有 90mL 無菌水并 帶有玻璃珠的三角燒瓶中溶解。 接著用 1mL 的無菌移液管吸取 1mL 甜酒曲稀釋液 加入盛有 9mL 無菌水的試管中充分搖勻，此為 10 -2稀釋液，以此類推制成 10-3， 10

43、-4，10-5，10-6幾種稀釋度的甜酒曲溶液2。 涂布：將上述凝固好的培養(yǎng)基平板底部用記號(hào)筆分別寫好稀釋度字樣，然后用 1mL 的無菌移液管分別由 10 -4， 10-5和 10-6的試管中吸取稀釋液 0.1mL 對(duì)號(hào)放入已 寫好稀釋度的平板中，用無菌玻璃涂棒，在各培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫 下靜置 5-10min，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基 3。 劃線：在近火焰處，蘸取 10 -2，10-3的稀釋液一環(huán)在平板上劃線。 培養(yǎng)：將上述平板倒置于 28培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1 星期。 挑菌落：取出培養(yǎng)基觀察單菌落的生長(zhǎng)情況。由根霉菌落的特點(diǎn)挑取少許單個(gè)菌 落的菌絲接到斜面培養(yǎng)基上，放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1 星期

44、。檢查其特征是否一致， 若不一致，即發(fā)現(xiàn)雜菌，則需在斜面上繼續(xù)挑取菌絲培養(yǎng)，繼續(xù)純化，直至獲得 純培養(yǎng)。 7 某藥廠生產(chǎn)林可霉素，該廠為了提高產(chǎn)量，請(qǐng)你從微生物遺傳變異的角度來為 該廠設(shè)計(jì)獲得高產(chǎn)菌株的方案。 誘變得三個(gè)環(huán)節(jié)： a 突變的誘發(fā)，b 突變株的篩選，c 突變高產(chǎn)基因的表型 基本步驟 出發(fā)菌株的選擇 處理菌懸液的制備 誘變處理 中間培養(yǎng) 分離和篩選 誘變育種基本原則：1 選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑 2 挑選優(yōu)良的出發(fā)菌株 3 處理單 細(xì)胞或單孢子懸液 4 選用最適的誘變劑量 5 充分利用復(fù)合處理的協(xié)同效應(yīng) 6 利 用和創(chuàng)造形態(tài)生理與產(chǎn)量間的相關(guān)指標(biāo) 7 設(shè)計(jì)高效篩選方案 8 創(chuàng)造新型篩選方

45、 案 出發(fā)菌株的選擇出發(fā)菌株的選擇 選擇野生型菌株，對(duì)誘變處理較敏感，效果好 出發(fā)菌株選 23 株，在處理比較后，取更適合的出發(fā)菌株作繼續(xù)誘變。 菌懸液的制備菌懸液的制備 制備單細(xì)胞和單孢子、活力類似的菌懸液。 誘變處理誘變處理 根據(jù)誘變劑特性，結(jié)合誘變對(duì)象的實(shí)際，設(shè)計(jì)誘變處理方案。 中間培養(yǎng)（穩(wěn)定性試驗(yàn)）中間培養(yǎng)（穩(wěn)定性試驗(yàn)） 突變表型有一個(gè)表現(xiàn)延遲的過程，即細(xì)胞內(nèi)原有酶量的稀釋過程(生理延遲)， 需 3 代以上的繁殖才能將突變性狀表現(xiàn)出來。 方法： 處理后細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)幾小時(shí)， 讓細(xì)胞繁殖 5 代， 以得到純的變異細(xì)胞。 分離和篩選分離和篩選 初篩以迅速篩出大量的達(dá)到初步要求的分離

46、菌落為目的，以量為主。以變色圈或 透明圈的大小將 90%的菌落淘汰 復(fù)篩則是精選，以質(zhì)為主，也就是以精確度為主。以效價(jià)和穩(wěn)定性選得優(yōu)秀菌株 操作步驟 1. 菌液以 3000rmin 離心 5min，棄上清，沉淀用無菌生理鹽水再離心洗滌 2. 將菌液用無菌玻璃珠的三角瓶?jī)?nèi)搖勻，細(xì)胞數(shù)可達(dá) 108 個(gè)ml 左右，作為待 處理菌懸液。 3.分別取梯度 105 ,106,107,108 個(gè)細(xì)胞數(shù)ml 菌液 4m1 于 9cm 培養(yǎng)皿內(nèi)，預(yù) 熱紫外燈 10min，開啟皿蓋,無菌磁力攪拌照射 1050s。操作均避免白熾光,在 紅燈下進(jìn)行，或用黑紙包住。 4. 取未照射的菌液和照射菌液各 o.5ml 進(jìn)行稀

47、釋分離，計(jì)數(shù)活菌細(xì)胞數(shù)。 5. 取照射菌液 2ml 于液體培養(yǎng)基中(300ml三角瓶?jī)?nèi)裝30ml培養(yǎng)液)， 120rmin 振蕩培養(yǎng) 46h。 6取中間培養(yǎng)液稀釋分離、培養(yǎng)。 7挑取菌落進(jìn)行篩選。 8. 計(jì)算致死率,正突變率,負(fù)突變率 出發(fā)菌株林可霉素產(chǎn)生菌 菌種復(fù)壯； 狹義； 指在菌種已發(fā)生衰退的情況下， 通過純種分離和測(cè)定典型性狀， 生產(chǎn)性能等指標(biāo)從以衰退的群體中篩選出少量未退化的個(gè)體。 措施；純種分離法；1 純種分離法 2 通過宿主體復(fù)壯 3 淘汰以衰退的個(gè)體 第十章第十章 1 試述在菌種鑒定中常用的甲基紅(MR)和 V.P.試驗(yàn)的原理 （1）甲基紅試驗(yàn)原理：）甲基紅試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌在

48、糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙 酮酸可進(jìn)一步分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的 pH 降至 4.5 以下， 當(dāng)加入甲基紅試劑則呈紅色，為甲基紅試驗(yàn)陽性。若細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少， 或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)（如醇、酮、醚、氣體和水等），則培養(yǎng)基的 酸度仍在 pH6.2 以上，故加入甲基紅指示劑呈黃色，是為陰性。 （2）培養(yǎng)基）培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。 （3）方法：）方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 24d，于培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基 紅試劑，立即觀察結(jié)果。 （4）結(jié)果：）結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽性；橘紅色為弱陽性；黃色為陰性。 （5）應(yīng)用應(yīng)用：主要用于鑒別大

49、腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。 此外腸桿菌科中沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽性， 而 腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性。 V.P 2 原理 某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮 合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧，氧化為二乙 酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱 VP（+）反應(yīng)。 2 簡(jiǎn)述微生物菌株鑒定的主要步驟和微生物的分裂鑒定方法。 a 獲得該種微生物的純種培養(yǎng) b 測(cè)定一系列必要的鑒定指標(biāo) c 查找權(quán)威性的 鑒定手冊(cè) 方法：a 經(jīng)典方法：1 經(jīng)典的鑒定指標(biāo) 2 微生物的微型，簡(jiǎn)便，快速或自動(dòng)化 鑒定技

50、術(shù) b 現(xiàn)代方法：1 通過核酸分析鑒定微生物遺傳型 2 細(xì)胞化學(xué)成分用作鑒定指標(biāo) 3 數(shù)值分類法 第十章 分類學(xué)的 3 個(gè)具體任務(wù)：分類，鑒定，命名。 微生物的種是一個(gè)基本分類單元，它是一大群表型特征高度相似，親緣關(guān)系極其 接近，與同屬內(nèi)其他物種有著明顯差異的一大群菌株的總稱。在微生物中，一個(gè) 種只能用該種內(nèi)的一個(gè)典型菌株當(dāng)做他的具體代表， 故此典型菌株就成了該種的 模式種。 雙名法是由前面一個(gè)屬名和后面一個(gè)種名加詞構(gòu)成。 菌株： 它表示任何一個(gè)由獨(dú)立分離的單細(xì)胞繁殖而成的純遺傳性群體及其一切后 代。在同一菌種的不同菌株間，作為鑒定用的一些主要形狀上雖個(gè)個(gè)相同，但不 作為鑒定用的一些小性狀卻可

51、以有很大差異，尤其是一些生化形狀，代謝產(chǎn)物的 產(chǎn)量性狀等。 三域?qū)W說：三域指古細(xì)菌域，真核生物域，真細(xì)菌域。 伯杰氏手冊(cè)，原核生物 Ainsworth 等人的菌物分類系統(tǒng)綱要，真菌 微生物分類鑒定方法的 4 個(gè)不同水平：a 細(xì)胞形態(tài)和習(xí)性水平 b 細(xì)胞組分水平 c 蛋白質(zhì)水平 d 核酸水平：包括 G+Cmol%值測(cè)定，核算分子雜交，rRNA 寡核苷 酸編目分析。 菌種鑒定基本步驟：a 獲得該微生物的純培養(yǎng)物 b 測(cè)定一系列必要的鑒定指標(biāo) c 查找權(quán)威性的菌種鑒定手冊(cè)。 數(shù)值分類法：是一種依據(jù)數(shù)值分析的原理，借助現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)對(duì)擬分類的微生 物對(duì)象按大量表型形狀的相似性程度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，歸類的方法。

52、 B.s 枯草芽孢桿菌 E.c 大腸桿菌 S.a 金黃色葡萄球菌 S.c 釀酒酵母橢圓變種 A.放線菌屬 S.g 灰色鏈霉菌 C.u 產(chǎn)朊假絲酵母 A.f 黃曲霉 A.n 黑曲霉 R o 米根霉 名詞解釋 1 伴孢晶體：少數(shù)芽包桿菌在形成芽孢的同時(shí)，會(huì)在芽孢旁側(cè)形成一顆方形，菱 形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體。 2L 型細(xì)菌：指在實(shí)驗(yàn)室或宿主細(xì)胞內(nèi)，通過自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì) 胞壁缺損菌株。 3 古生菌：又稱古細(xì)菌。是一個(gè)在進(jìn)化途徑上很早就與真核生物與真細(xì)菌相互獨(dú) 立的生物類群，主要包括一些獨(dú)特生態(tài)類型的原核生物。 4 菌物界：指和植物界動(dòng)物界相并列的一類無葉綠素，依靠細(xì)胞表面吸收有機(jī)養(yǎng) 料，細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)的真核微生物。 7 包涵體；動(dòng)植物細(xì)胞中的病毒群體，顆粒狀。 8 溫和噬菌體；噬菌體侵染宿主后，并不增殖裂解，而是與宿主 DNA 結(jié)合，隨 宿主 DNA 復(fù)制而復(fù)制，此時(shí)細(xì)胞中找不到