1、T淋巴細胞功能測定,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,實驗內容,小鼠摘眼球取血、分離血清淋巴細胞轉化試驗,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,教學要求,掌握小鼠血清的分離掌握淋巴細胞轉化試驗的基本原理及基本操作,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,淋巴細胞轉化試驗(Lymphocytetransformationtest),原理檢測方法操作步驟應用,本文由探生科技技術

2、人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,實驗分組及材料,器材酒精棉球若干無菌紗布塊1塊/組無菌平皿1塊/組無菌吸頭（大、中、小）4盒/room無菌96孔培養(yǎng)板1塊/組可調微量加樣器4套/room細胞計數(shù)板1套/組顯微鏡1臺/組EP管若干眼科剪、小鑷子4套/room細胞培養(yǎng)箱（375%CO2),酶標儀離心機2個/room超凈臺2個/room動物及試劑小鼠2只/組(NS,OVA)培養(yǎng)液（IMDM)無FCS100ml/room培養(yǎng)液（IMDM)20%FCS30ml/roomConA（2.5,5,10g/ml)各1.5ml/tube白細胞計數(shù)液（2%冰醋酸）2瓶/roomMT

3、T（5mg/ml)1.5ml/room二甲亞砜（DMSO)5ml/組,分組：每組四人，兩人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾臟,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,免疫血清分離過程,摘眼球取血,RTfor2hrs,Rotation3000rpmfor20min,TransferserumtoanewEP,Doublediffusion,Storeat4,ELISA,1.5mlEP,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,實驗步驟,單細胞懸液的制備：小鼠脫臼處死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。于超凈臺內取出脾和胸腺

4、組織(各1/2)，分別放入預先盛有2mlIMDM培養(yǎng)液的平皿內。將3-4層紗布覆蓋到組織上，用直頭鑷子固定組織，用彎頭鑷子輕壓組織，將其搗碎。然后用1000l加樣器隔著紗布將細胞懸液吸出，放入1.5mlEP管中。細胞計數(shù)：取上述制備好的細胞懸液混勻后取出20l，加到盛有980l計數(shù)液的EP管中，在顯微鏡下計數(shù)，計數(shù)方法見后。調細胞濃度至1107/ml，所需量為1.5ml，設需要的細胞懸液體積為Aml,可按公式：?/mlA=1.51107NOTE:在稀釋前一定將原細胞懸液混勻，否則細胞長時間沉淀使細胞數(shù)不準。,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,細

5、胞計數(shù)板,查出四個大方格的總細胞數(shù)(X)算出每個大方格的細胞數(shù)：Y=X/4每個大方格的體積為V=1mm1mm0.1mm=0.1mm3=10-4ml制備的細胞懸液的細胞濃度（/ml)=Y104稀釋倍數(shù)(50),4,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,細胞培養(yǎng)：按圖所示加板。將板做好標記，在倒置顯微鏡下觀察細胞，然后放于375%C02培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48小時。MTT摻入：（隔一天下午2:00）在終止培養(yǎng)前2小時，在顯微鏡下觀察細胞轉化情況。每孔內加入MTT（5mg/ml)10l，加完后輕輕搕板，使MTT和細胞混勻。在375%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2小時

6、，然后離心2000rpm，5min，輕輕棄去上清，（注意不要將孔底部的顆粒物棄出）。加入100l二甲亞砜（DMSO)，將顆粒溶解。（隔一天下午4:00）結果測定：結果測量：用酶標儀測定光密度值：A570nm（用空白孔調零），記錄結果。結果判定：SI（刺激指數(shù)）=ConA刺激孔A值/對照孔A值,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,預習內容,單克隆抗體的制備（理論P70，實驗P106）雙向免疫擴散（理論P241，實驗P116）,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,八個人一塊培養(yǎng)板，兩人加脾，兩人加胸腺每

7、孔加入100l調好的細胞懸液1-3孔加入10%FCS-IMDM培養(yǎng)液，100l4-6孔加入2.5g/ml的ConA,100l7-9孔加入5g/ml的ConA,100l10-12孔加入10g/ml的ConA,100lNOTE:ConA用10%FCS-IMDM培養(yǎng)液配制,N.S.,OVA,N.S.,OVA,加樣方法,返回,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,八個人一塊培養(yǎng)板，兩人加脾，兩人加胸腺每孔加入100l調好的細胞懸液1-3孔加入10%FCS-IMDM培養(yǎng)液，100l4-6孔加入2.5g/ml的ConA,100l7-9孔加入5g/ml的ConA,100l10-12孔加入10g/ml的ConA,100l,N.S.,OVA,N.S.,OVA,加樣方法,本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,感謝您瀏覽,需要相關抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機構與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效