1、第一章微生物培養(yǎng)技術(shù),第一章微生物培養(yǎng)技術(shù),第1節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng),學習導(dǎo)航1.了解有關(guān)微生物及其培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識。2.理解消毒和滅菌的原理、方法、進行無菌技術(shù)的操作。重點3.理解微生物接種的方法步驟，進行大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)。重、難點,一、培養(yǎng)基1.含義：由于微生物代謝方式的不同，因而對營養(yǎng)物質(zhì)的需求也是有差異的。根據(jù)微生物_的需要，將各種營養(yǎng)物質(zhì)混合在一起，配制成適合微生物生存的營養(yǎng)基質(zhì)。,生長繁殖和代謝,2.平板培養(yǎng)基將_后的固體培養(yǎng)基基質(zhì)倒入_，冷卻凝固后制成的培養(yǎng)基。二、接種技術(shù)1.含義：把相應(yīng)的研究對象移入_中的過程。,溶化,無菌培養(yǎng)皿,培養(yǎng)基,2.方法在平板培養(yǎng)基上接種的方

2、法有平板劃線法、_法、_法等。平板劃線法又包括連續(xù)劃線法和交叉劃線法。,稀釋涂布平板,稀釋混合平板,判一判(1)微生物是指由細胞組成的一類個體微小的生物。()(2)在微生物分離和純培養(yǎng)時，需要無菌操作。()(3)一般我們飲用的奶制品，多采用高溫滅菌法。()(4)滅菌和消毒都能夠殺死細菌的芽孢等休眠體。(),三、無菌技術(shù)1.目的和要求在微生物的分離和純培養(yǎng)過程中，為了防止_污染，必須采用_進行操作。在實驗過程中，要對所用的器材、培養(yǎng)基進行嚴格的滅菌，對工作場所進行消毒。,外來雜菌,無菌技術(shù),2.滅菌和消毒,強烈,所有,溫和,高溫滅菌,射線,化學藥劑,四、大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)1.方法：_。2.步

3、驟,平板劃線分離法,牛肉膏蛋白胨瓊脂,接種環(huán),連續(xù),交叉,菌落,倒置,想一想劃線法為什么可以分離出大腸桿菌？【提示】隨著線的延長，菌數(shù)越來越少,最終可分離得到由一個細菌繁殖而來的菌落。,要點一無菌技術(shù)1.概念：無菌技術(shù)不僅能防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染，保持微生物的純培養(yǎng)，而且在分離、轉(zhuǎn)接時亦能防止其他微生物污染。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括以下幾個方面：,(1)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。雙手用肥皂洗凈，擦干后用75%酒精消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。培養(yǎng)基用高壓蒸

4、氣滅菌，接種環(huán)用火焰灼燒來滅菌。(3)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。,(4)實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。2.常見消毒滅菌方法及其適用范圍,特別提醒無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效避免操作者自身被微生物感染。,細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽滅菌鍋、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A接種環(huán)、手、培養(yǎng)基B高壓鍋、手、接種環(huán)C培養(yǎng)基、手、接種環(huán)D接種環(huán)、手、高壓鍋,【解析】此題考查學生對無菌技術(shù)的掌握。高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙

5、手是消毒的一種方法。火焰灼燒可以迅速徹底地滅菌，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)?！敬鸢浮緾,變式訓練下列操作錯誤的是()A用酒精擦拭雙手B用氯氣消毒水源C實驗室用紫外線進行消毒D玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)用酒精直接擦拭即可達到徹底滅菌的目的,解析：選D。玻璃器皿、金屬用具等耐高溫、需要保持干燥的物品，應(yīng)采用干熱滅菌法進行滅菌，而用酒精直接擦拭達不到徹底滅菌的目的。,要點二探究微生物的分離和純培養(yǎng)1.菌落的含義及菌種的鑒定在固體平板培養(yǎng)基上，由單個微生物細胞或孢子繁殖而來的一個具有特定形狀的子細胞群體，稱為菌落。其各方面特征，如形狀、大小、表面、邊緣、隆起、透明度、顏色等均可作為菌種鑒定的依據(jù)。

6、,2.純化培養(yǎng)純培養(yǎng)過程中如果劃線接種形成的菌落特征不一致,說明含雜菌，需要進一步劃線挑菌，直至純化。3.培養(yǎng)不同的微生物，需要不同的pH,(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。,(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行_(消毒、滅菌)；操作者的雙手需要進行清洗和_；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。,(3)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應(yīng)嚴格操作、多次重

7、復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_。(4)通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的_。,(5)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_。(6)若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散，造成污染。,【解析】(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點,培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。,(2)滅菌是用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌；而消毒是用較為溫和的物理或化學方法僅殺死

8、物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物，所以操作者的雙手需要進行清洗和消毒；紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。,(3)稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品稀釋的比例合適。(4)對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的鑒定。,(5)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(6)因為有的大腸桿菌會釋放一種強烈的毒素,并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散，造成污染。,【答案】(1)溫度酸堿度易培