1、.,PSA的檢測及臨床意義,微生物科 肖征,.,前列腺特異抗原(Prostate Specific Antigen, PSA)是與前列腺癌相關(guān)的一種抗原。它是公認(rèn)的診斷前列腺癌的較好的腫瘤標(biāo)志物。前列腺癌在男性所有類型癌中占10%20%,是男性最常見的癌腫。該病進(jìn)展緩慢,是威脅50歲以上男性生命的主要癌癥,在西方國家占男性死亡率的第二位。美國FDA已批準(zhǔn)將PSA檢測作為50歲以上男性的普查指標(biāo)。 流行病學(xué)調(diào)查表明,隨著我國居民生活水平的改善,環(huán)境污染的加劇以及飲食結(jié)構(gòu)的改變,前列腺癌的發(fā)病率日趨上升,已引起臨床上的高度重視。,.,PSA的表達(dá)及生物學(xué)特性,1.PSA是Wang等于1979年首先

2、采用免疫沉淀技術(shù)從前列腺組織中分離出來的。其主要由前列腺組織上皮細(xì)胞分泌,尿道周圍腺體也分泌PSA,但后者很少進(jìn)入血液。近來研究發(fā)現(xiàn),PSA并非前列腺組織特異性,甲狀腺也可分泌PSA。而Kamenov Z等報道,在女性的乳腺,卵巢,子宮內(nèi)膜等組織以及其血清、乳汁和胎兒羊水中都可檢測到PSA,并認(rèn)為PSA與女性體內(nèi)的類固醇激素尤其是雄激素和孕激素的水平調(diào)節(jié)密切相關(guān),并推測PSA可能是一種表明正常組織以及腫瘤生長情況的因子。,.,2.PSA為單鏈糖蛋白,分子量為3234Kd,由237個氨基酸殘基組成。編碼PSA的mRNA全長為1729bp。PSA為一種中性絲氨酸蛋白激酶,有酶的活性,但活性水平較低

3、,能溶解精液中的蛋白質(zhì),在精囊包的分裂和精液的液化上發(fā)揮生理作用。PSA能刺激前列腺癌細(xì)胞產(chǎn)生活性氧,該效應(yīng)有濃度依賴性,PSA濃度愈高,刺激作用愈明顯,而抗PSA抗體可抑制PSA的刺激作用。F-PSA在血液中的半衰期為110min,而TPSA的半衰期則為23d。,.,3.結(jié)構(gòu)與表達(dá) PSA是人類組織激肽釋放酶基因家族的一個成員,位于染色體19q13.4上。人類組織激肽釋放酶已被識別的有三個：hK1（胰、腎激肽釋放酶），hK2（腺體激肽釋放酶），hK3（PSA）。人類基因組序列測定顯示在染色體19q13.3/q13.4上有15個組織激肽釋放酶基因，并有相似的氨基酸序列。hK2基因與hK3相鄰，

4、基氨基酸序列與PSA有80%同源，它具有胰蛋白酶樣活性，在前列腺中也有具分泌功能的上皮組織。hK2在血清中的水平如果升高，前列腺癌的風(fēng)險也會增加。,.,4.同構(gòu)型: PSA在前列腺管腔內(nèi)可被蛋白酶分裂而變?yōu)橥瑯?gòu)型PSA（PSA isoforms）,也可有以proPSA被去頂（truncated form of proPSA）的形式存在，又叫-2pPSA。-2pPSA似乎也和前列腺癌有相關(guān)性。,.,PSA在血清中形態(tài) 1.非結(jié)合形態(tài)，即游離PSA（freePSA,FPSA）。2.結(jié)合形態(tài) PSA在血液中有60-90%與多種內(nèi)源性蛋白酶抑制物結(jié)合形成復(fù)合形PSA（C-PSA）： 與1抗糜蛋白酶(1

5、-antichymotrypsin)結(jié)合,稱為PSA-ACT，分子量約80-90kda. 與2巨球蛋白(2-macroglobulin)結(jié)合，稱為PSA-AMG， 與蛋白酶C抑制體(protease C inhibitor)結(jié)合,稱為PSA-PCI， 與1抗胰蛋白酶（1-antitrypsin）結(jié)合，稱為PSA-AAT。,.,其中，PSA-ACT是血清中C-PSA的主要構(gòu)成形式，也是目前免疫學(xué)方法能測到的主要成分.其它幾種結(jié)合形式，由于抗原決定部位被掩蔽，不能為檢測抗體所識別。 在精液中,PSA還與蛋白抑制物構(gòu)成復(fù)合物。,.,二、檢測,目前檢測的方法主要有放射免疫法、ELISA法及發(fā)光法。放射

6、免疫法應(yīng)用較早，其檢測靈敏度高，準(zhǔn)確性也較好。ELISA法的檢測試劑國內(nèi)外都有生產(chǎn)。,.,由于PSA的濃度較低，而且測到的值（絕對值）直接關(guān)系到對患者病情的判斷，對檢測試劑要求穩(wěn)定性好，也就是重復(fù)性要好。但ELISA方法的影響因素比較多，尤其是低濃度標(biāo)本的OD值容易受操作條件的影響。所以在用ELISA方法作檢測的時候，要嚴(yán)格控制實驗條件，操作人員要有一定的經(jīng)驗。另外，每塊酶標(biāo)板必須作單獨的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。對于酶標(biāo)法，接近本底孔的OD值所算出來的PSA值其準(zhǔn)確性已大打折扣。一般來說OD值在0.15以上的結(jié)果就比較具有可比性了。按我們的經(jīng)驗，也就是2.0ng/ml以上的結(jié)果。,.,而

7、發(fā)光法一般是應(yīng)用在全自動分析儀上的，準(zhǔn)確性和重復(fù)性都是比較好的，比較適合于對PSA這樣微量又必須定量的指標(biāo)進(jìn)行測定。要注意的是，如要對TPSA和FPSA都進(jìn)行測定的話，應(yīng)選用同一廠家出廠的產(chǎn)品。不同測定原理的方法（等克分子法或等重量法）所測出的結(jié)果，不適宜用來計算F/T比值。即使只對于總PSA，不同廠家的產(chǎn)品因針對的抗原不同，測出的結(jié)果也不太適宜用來直接比較。 國外還有一些產(chǎn)品，用金標(biāo)試紙條作半定量檢測，適用于家庭和門診。但由于結(jié)果不太精確，只適合于初篩。,.,美國臨床生化委員會（National Academy of Clinical Biochemistry,NACB）和歐洲腫瘤標(biāo)志小組（

8、European Group on Tumour Markers, EGTM ）建議對常規(guī)腫瘤標(biāo)志物測定的變異系數(shù)： 批內(nèi)CV50ml 25ml 25ml 50ml 50ml 25ml 25ml BPH 100 4.75 9.23 4.31 9.66 0.139 0.113 0.336 0.212 PCa 53 0.85 10.95 12.26 10.88 0.358 0.162 1.174 0.339 注:檢驗,兩組比較,均為0 01,.,數(shù)據(jù)表明，當(dāng)前列腺體積50Ml時,BPH與PCa組間PSA均值的差異有顯著性(0.05)。 隨前列腺及移行帶體積的增加,無論BPH還是PCa組中的PSA平均值都增加,而PSAD和PSA-TZ的均值則有所下降。 不論前列腺或移行帶體積大小,BPH組和PCa組間的PSAD及PSA-TZ值間的差異均有顯著性(10ng/ml時,IGF-1水平和PCa不再相關(guān)。,.,IGFBP-3被前列腺的上皮細(xì)胞生產(chǎn),而且體外