1、1,生物制品及其質(zhì)量管理,中國(guó)藥品生物制品檢定所,2,主要內(nèi)容,一、生物制品定義 二、生物制品種類 三、生物制品的基本屬性和特點(diǎn) 四、生物制品的管理 五、生物制品GMP現(xiàn)場(chǎng)檢查要點(diǎn),3,一、生物制品定義,生物制品(Biological Products)是應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備，用于疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品。,4,二、生物制品分類,按生物制品的組成和性質(zhì)可分為: 疫苗（Vaccines） 抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera) 血液制品（Blood Products

2、） 細(xì)胞因子和重組DNA產(chǎn)品（Cytokines and Recombinant DNA Products） 診斷制品(Diagnostic Reagents) 其他制品,5,細(xì)菌類疫苗,由細(xì)菌、螺旋體或其衍生物制備而成，包括： 減毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫疫苗等 滅活疫苗：霍亂菌體疫苗、鉤端螺旋體疫苗等 亞單位疫苗：腦膜炎球菌多糖疫苗、傷寒Vi多糖疫苗等 重組DNA疫苗：重組瘧疾疫苗、重組幽門螺桿菌疫苗等,6,病毒類疫苗,由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制備而成，包括： 減毒活疫苗：乙型腦炎減毒疫苗、麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、OPV等 滅活疫苗：乙型腦炎滅活疫苗、出血熱疫苗、狂犬疫苗等

3、 亞單位疫苗：重組乙肝疫苗等 重組DNA疫苗：重組乙肝疫苗等,7,聯(lián)合疫苗,由兩種或兩種以上疫苗抗原原液配制而成的具有多種免疫原性的疫苗。 例如： 吸附百白破聯(lián)合疫苗 麻風(fēng)腮三聯(lián)疫苗,8,抗毒素及免疫血清,由特定抗原免疫的動(dòng)物血清而制備 主要產(chǎn)品： 白喉抗毒素 破傷風(fēng)抗毒素 抗狂犬病血清等,9,血液制品,由健康人的血漿或特異免疫人血漿分 離、提純或由重組技術(shù)制成的血漿蛋 白組分或血細(xì)胞組分制品 。 主要產(chǎn)品：人血白蛋白 人免疫球蛋白 人凝血因子等,10,細(xì)胞因子和重組DNA產(chǎn)品,由健康人血細(xì)胞增值、分離、提純或 由重組技術(shù)制成的多肽類或蛋白類制 劑。 主要產(chǎn)品：干擾素(IFN) 白細(xì)胞介素(I

4、L) 集落刺激因子(CSF) 紅細(xì)胞生成素 (EPO)等,11,診斷制品,體外診斷制品 由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的用于體外診斷疾病的試劑或試劑盒，如傷寒、副傷寒等細(xì)菌的診斷菌液，沙門氏菌屬診斷血清，HBsAg診斷試劑盒等。 體內(nèi)診斷制品 由抗原制成的用于體內(nèi)診斷疾病的試劑，如卡介苗純蛋白衍生物（BCG-PPD）、錫克試劑毒素、標(biāo)記的單克隆抗體等。,12,其他制品,由有關(guān)生物材料或特定方法制成的，上述5類產(chǎn)品以外的生物制品，如變態(tài)反應(yīng)原、微生態(tài)制劑、重組DNA產(chǎn)品、基因治療產(chǎn)品、單克隆抗體制劑、某些細(xì)胞治療制劑等。,13,生物制品按用途分類,預(yù)防類生物制品 疫苗、類毒素、被動(dòng)免疫制劑

5、診斷類生物制品 免疫學(xué)診斷試劑、基因診斷試劑、 生化試劑 治療類生物制品 血液制劑、細(xì)胞因子制劑、酶和激素、 特異性抗體、非特異性免疫治療制劑、 基因及細(xì)胞治療制品等,14,預(yù)防類生物制品,減毒活疫苗與滅活疫苗的比較,15,三、生物制品的基本屬性和特點(diǎn)（一）,其起始材料均為生物活性物質(zhì)； 生物制品生產(chǎn)加工全過程是生物學(xué)過程，是無菌操作過程； 有些生物制品的生產(chǎn)過程是有毒或有菌的過程; 生物制品多為蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)，分子量較大，并具有復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu), 較不穩(wěn)定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破壞。,16,三、生物制品的基本屬性和特點(diǎn)（二）,其質(zhì)量控制和質(zhì)量檢定是采用生物學(xué)分析方法，其效價(jià)或生

6、物活性檢定有其變異性； 生物制品原材料、中間品、成品、運(yùn)輸、貯存、甚至使用保持在“冷鏈”系統(tǒng)中； 特別是預(yù)防制品使用對(duì)象不是病人，而是健康人群； 生物制品的質(zhì)量控制實(shí)行生產(chǎn)全過程監(jiān)控; 生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)要充分考慮這些特點(diǎn),17,四、生物制品的管理,生物制品國(guó)家管理6項(xiàng)基本職能 1完整的疫苗和生物制品審批程序和審批標(biāo)準(zhǔn)的法規(guī)文件； 2審批結(jié)論要以實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)為依據(jù)； 3國(guó)家質(zhì)控當(dāng)局對(duì)疫苗和生物制品出廠銷售實(shí)行國(guó)家批簽發(fā)制度； 4要有對(duì)疫苗和生物制品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)的法定的實(shí)驗(yàn)檢定機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)實(shí)施； 5對(duì)生物制品生產(chǎn)企業(yè)實(shí)施GMP定期檢查； 6對(duì)生物制品有效性和不良反應(yīng)進(jìn)行上市后檢測(cè)。,18,生物制

7、品實(shí)行國(guó)家批簽發(fā) 藥品管理法實(shí)施辦法中規(guī)定，國(guó)家對(duì)所規(guī)定的生物制品實(shí)行國(guó)家批簽發(fā)制度。 國(guó)家批簽發(fā)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門授權(quán)國(guó)家藥品檢定機(jī)構(gòu)，對(duì)所規(guī)定的生物制品，在出廠前或進(jìn)口時(shí)，按批進(jìn)行審查和簽發(fā)，凡審查或檢定不合格的不允許銷售或者進(jìn)口。,19,生物制品國(guó)家批簽發(fā)分為三種類型 一、僅對(duì)某種制品每批的批記錄摘要進(jìn)行審查，符合要求發(fā)給批簽發(fā)證； 二、審查批記錄摘要 對(duì)部分批次制品進(jìn)行抽檢檢定、審查和檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證； 三、審查批記錄摘要 批批檢定，審查和批批檢定符合要求發(fā)給批簽發(fā)證。,20,菌種篩選#,種子批的# 建立及檢定,菌種接種#,原液合并,半成品* 配置,殺 菌,原液收獲#,擴(kuò)大培

8、養(yǎng),原液保存,分 裝*,包 裝,檢 定,圖- 細(xì)菌疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖,10 000 級(jí),100 000 級(jí),21,毒種篩選#,種子批的# 建立及檢定,毒種接種# 培養(yǎng)細(xì)胞,原液合并,半成品* 配置,病毒滅活,病毒的收 獲過濾 #,擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng),病毒原液 保存,分 裝*,包 裝,檢 定,圖- 病毒疫苗工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖,原代細(xì)胞的 制備或傳代 細(xì)胞復(fù)蘇,減毒活疫苗,10 000 級(jí),100 000 級(jí),22,細(xì)菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點(diǎn) 1所有原輔材料符合中國(guó)藥典或中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 2采用強(qiáng)毒菌株（鼠疫、霍亂、炭疽等）、芽胞菌和強(qiáng)毒病毒株，應(yīng)有專用生產(chǎn)操作間，

9、專用生產(chǎn)設(shè)備及隔離實(shí)施，操作人員應(yīng)有安全防護(hù)設(shè)施； 3所用生產(chǎn)的菌株或病毒株，要建立原始種子批、主代種子批、生產(chǎn)種子批三級(jí)種子批系統(tǒng)；病毒疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞也要建立上述三級(jí)細(xì)胞庫系統(tǒng)； 4菌苗及疫苗原液、中間品合并、分離、純化等每道加工工序后均要做無菌試驗(yàn)和鑒別試驗(yàn)；,23,細(xì)菌和病毒類疫苗質(zhì)控要點(diǎn) 5細(xì)菌類及病毒類的滅活疫苗，加入滅活劑后，必須要做活菌或活毒試驗(yàn)，確保徹底滅活； 6原材料、半成品及成品，應(yīng)按現(xiàn)行中國(guó)生物制品規(guī)程相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢定； 7對(duì)制品的安全、效價(jià)或免疫力試驗(yàn)等項(xiàng)目檢定所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合清潔級(jí)； 8從起始材料直至使用，全過程，必須無菌操作，制品28保存； 9生物制品生產(chǎn)用水均為

10、注射用水。,24,血漿合并,病毒滅活,精 洗,滅菌除熱原,低溫乙醇法,超濾濃縮,入 庫,外包材,血漿,內(nèi)包材,圖- 血液制品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖,除菌過濾*,分 裝*,包 裝,粗 洗,10 000 級(jí),100 000 級(jí),25,血液制品質(zhì)量控制要點(diǎn) 1生產(chǎn)用具，經(jīng)過嚴(yán)格清洗、去熱原處理、滅菌處理； 2原料血漿要經(jīng)過乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、ABO定型診斷試劑檢測(cè)合格，-20以下保存； 3生產(chǎn)工藝采用低溫乙醇法分部提取各組份；工藝中應(yīng)有去除/滅活病毒工藝步驟； 4原液、半成品、成品符合現(xiàn)行中國(guó)生物制品規(guī)程相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)； 5所用血源檢測(cè)和成品檢測(cè)的乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等檢測(cè)的試劑均為國(guó)家批批檢

11、定試劑。,26,細(xì)胞復(fù)蘇,擴(kuò)大培養(yǎng),大罐培養(yǎng),粗純,擴(kuò)大培養(yǎng),發(fā) 酵,粗 純,接種,滅菌除熱原,精 洗,粗 洗,內(nèi)包材,菌種,細(xì)胞 種子,原液,除菌過濾,除菌過濾,配制及除菌過濾,分裝,包裝,入庫,外包裝,圖- 重組產(chǎn)品工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖,原核表達(dá),真核表達(dá),10 000 級(jí),100 000 級(jí),27,重組DNA產(chǎn)品質(zhì)量控制要點(diǎn) 1生產(chǎn)用工程菌株或工程細(xì)胞株要建立原始種子批、主代種子批、生產(chǎn)種子批系統(tǒng)，定期進(jìn)行質(zhì)粒穩(wěn)定性檢查； 2發(fā)酵用培養(yǎng)基應(yīng)不含抗生素，生產(chǎn)用細(xì)胞培養(yǎng)液應(yīng)不含血清和抗生素； 3發(fā)酵培養(yǎng)過程中應(yīng)根據(jù)工藝要求控制其培養(yǎng)溫度、pH、溶氧、輔料及培養(yǎng)時(shí)間； 4根據(jù)其工藝要求

12、，通過初步純化和高度純化達(dá)到規(guī)定質(zhì)量要求； 5重組產(chǎn)品的原液，應(yīng)做：蛋白質(zhì)含量、比活性、純度、效價(jià)、SDS-PAGE法、高效液相色譜法、分子量、外源性DNA殘留含量、宿主蛋白殘留含量、等電點(diǎn)、紫外光譜肽圖（至少每年1次），N末端氨基酸序列（至少每年測(cè)一次）；,28,重組DNA產(chǎn)品質(zhì)量控制要點(diǎn) 6半成品及成品應(yīng)按現(xiàn)行中國(guó)生物制品規(guī)程相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢定； 7工程菌株應(yīng)進(jìn)行菌落形態(tài)、革蘭氏染色、抗生素的抗性、電鏡檢查、生化反應(yīng)、表達(dá)量、質(zhì)粒酶切圖譜等檢查； 8工程細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行外源因子（細(xì)菌、真菌、支原體、病毒）檢查、致病性實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞鑒別試驗(yàn)、表達(dá)量測(cè)定等； 9重組DNA產(chǎn)品生產(chǎn)，必須按其生產(chǎn)所用工程菌株

13、或工程細(xì)胞株、將原核細(xì)胞系與真核細(xì)胞系徹底分離分別進(jìn)行生產(chǎn)。,29,菌種篩選#,組裝,圖-5 酶聯(lián)免疫診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域劃分示意圖,抗原包被微孔板,酶標(biāo)記抗體,其它組分,陽性對(duì)照*,100 000 級(jí),隔離區(qū),30,酶聯(lián)免疫診斷試劑質(zhì)控要點(diǎn) 1所用抗原或抗體的純度、帶型、效價(jià)及穩(wěn)定性等符合現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，來源要固定； 2辣根過氧化物酶R2不應(yīng)低于3.0； 3微孔板CV（%）不大于10%； 4選擇最佳濃度進(jìn)行抗原或抗體包被，選擇最佳濃度進(jìn)行酶標(biāo)記 5酶標(biāo)記后抗體加入有關(guān)保護(hù)劑，低溫保存； 6應(yīng)有陽性血清處理、分裝的隔離操作間。,31,菌種篩選#,組裝,圖- PCR診斷試劑工藝流程及環(huán)境區(qū)域

14、劃分示意圖,PCR組份,PCR組份,PCR組份,陽性對(duì)照*,100 000 級(jí),隔離區(qū),32,PCR診斷試劑質(zhì)控要點(diǎn) 1應(yīng)有陽性血清處理、分裝的隔離操作間； 2PCR試劑的生產(chǎn)區(qū)與檢定區(qū)嚴(yán)格分開； 3PCR引物設(shè)計(jì)要合理，引物合成要有固定場(chǎng)所及專用設(shè)備；純度達(dá)到現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)； 4DNA聚合酶活性及穩(wěn)定性達(dá)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)并有固定來源； 5PCR檢測(cè)方法要可靠，操作人員經(jīng)專門培訓(xùn)。,33,五、生物制品GMP檢查要點(diǎn),保護(hù)環(huán)境和操作者 防止交叉污染，嚴(yán)格分區(qū)，獨(dú)立空調(diào) 局部負(fù)壓 盡可能一個(gè)產(chǎn)品、一個(gè)車間 徹底消毒和清場(chǎng) 嚴(yán)格動(dòng)物使用及動(dòng)物管理 環(huán)境溫度,34,1強(qiáng)毒與弱毒 “強(qiáng)毒”系指生物制品生產(chǎn)及檢

15、定用細(xì)菌株及病毒株，其致病力強(qiáng)，傳染性強(qiáng)，感染的機(jī)率高，感染后癥狀較重，可危及生命健康，甚至引起傳染病爆發(fā)流行的細(xì)菌菌株及病毒株。 “弱毒”系指生物制品生產(chǎn)及檢定用細(xì)菌株及病毒株，經(jīng)過天然或人工改造方法，去除或封閉其毒力因子，使其致病力減弱，一般不引起感染或發(fā)病的細(xì)菌菌株及病毒株。 強(qiáng)毒株與弱毒株，不允許混放在一起，其生產(chǎn)及檢定操作場(chǎng)所須嚴(yán)格分開，并有專用設(shè)備。,生物制品GMP認(rèn)證檢查要點(diǎn),35,2死毒與活毒 “活毒”是制備滅活疫苗的第一階段或減毒活疫苗生產(chǎn)時(shí)，將生產(chǎn)用細(xì)菌或病毒株進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)制備，其生產(chǎn)過程和生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)設(shè)備、器材含有大量活的細(xì)菌或活的病毒生物體，稱之為“活毒”。 “死毒

16、”是制備滅活疫苗時(shí)，第一階段生產(chǎn)出大量活細(xì)菌或或病毒后，到第二階段，對(duì)活生物體加入一定量甲醛或適宜滅活劑，將全部細(xì)菌或病毒殺死，稱之為“死毒”。 “活毒”與“死毒”的生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)設(shè)備及器材，須嚴(yán)格分開。,36,3“脫毒前”與“脫毒后” “脫毒前”系指破傷風(fēng)梭狀菌、白喉?xiàng)U菌繁殖培養(yǎng)時(shí)，生產(chǎn)大量破傷風(fēng)毒素及白喉毒素，對(duì)人體有致病性，這一階段為“脫毒前”。 “脫毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或適宜脫毒劑，將毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性和免疫原性，稱之為“脫毒后”。 “脫毒前”與“脫毒后”的生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)設(shè)備及器材須嚴(yán)格分開。,37,4血液制品、抗血清、人和動(dòng)物組織制備的制品，其生產(chǎn)

17、所用的原材料，為人血漿、動(dòng)物免疫血清、人和動(dòng)物器官、組織及組織液等，均含有大量的人和動(dòng)物的異種蛋白質(zhì)或細(xì)胞活性物質(zhì)，具有較強(qiáng)的致敏原物質(zhì)，不經(jīng)過相應(yīng)處理和加工，可致人體過敏反應(yīng)或血清病。 因此，血液制品、抗血清、人和動(dòng)物組織生產(chǎn)制備制品時(shí)，須有專用生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)設(shè)備及器材，不可與其他生物制品混用。,38,5芽孢菌制品，系用炭疽桿菌、破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌來生產(chǎn)制備的制品，芽孢菌是微生物對(duì)外周環(huán)境抵抗力最強(qiáng)的生命單位。 芽孢菌在自然界可存活數(shù)十年及百年之久，100可耐受2小時(shí)以上，在70酒精中存活20年，低溫和干燥對(duì)其毫無作用。 生產(chǎn)芽孢菌制品的生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)設(shè)備和器材須專用，與其他制

18、品生產(chǎn)嚴(yán)格分開。,39,6卡介苗與結(jié)核菌制品生產(chǎn)場(chǎng)所，必須嚴(yán)格分開，其生產(chǎn)設(shè)備、器材、生產(chǎn)用菌種必須專用，不能混用。 1930年德國(guó)Lubeck地方，給251名嬰兒誤用結(jié)核菌液，而不是減毒的卡介苗，造成72名嬰兒死亡，病死率為28.68，有142名嬰兒感染結(jié)核，感染率為56.5，稱之為“Lubeck疫苗接種事故”。,40,7衛(wèi)生部1985年衛(wèi)藥第11號(hào)文中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌毒種保藏管理辦法，規(guī)定一類、二類菌種和毒種為“強(qiáng)毒微生物”。 一類：鼠疫桿菌、霍亂弧菌、天花病毒（已消滅）、黃熱病毒、馬腦炎病毒、Lassa病毒、Mstburg病毒、Ebola病毒、猴皰疹病毒等。 二類：布氏菌、炭疽桿菌、肉毒梭菌、麻風(fēng)桿菌、結(jié)核分枝桿菌等。 狂犬病毒（街毒）、流行性出血熱病毒、登革熱病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、艾滋病病毒（當(dāng)時(shí)尚未列上）等。,41,8強(qiáng)毒操作區(qū)空氣潔凈特殊要求 必須設(shè)置氣閘和緩沖區(qū)； 與其他區(qū)域分開，自成一區(qū)； 通過兩道連鎖門，更衣進(jìn)入； 在生物安全柜內(nèi)操作； 操作區(qū)有高壓滅菌設(shè)備； 相對(duì)操作區(qū)外部保持相對(duì)負(fù)壓，相對(duì)壓強(qiáng)-30Pa-40Pa，緩沖相對(duì)壓強(qiáng)-15Pa-20Pa。,42,9生產(chǎn)用菌、