1、 氨基柱是同時(shí)可以用于正相條件和反相條件的這一點(diǎn)很多用戶都已經(jīng)知道；但是要注意到的是：正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，對這一點(diǎn)的忽略可能會帶給使用者一些麻煩。 對于新購買到的柱子，首先請注意打開分析測試說明書，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶，請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大，會導(dǎo)致柱壓很高，適當(dāng)調(diào)低流速即可。如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類，建議在用分析流動相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。 柱效檢測： 我用于判斷一個用戶是否有經(jīng)驗(yàn)的指標(biāo)之一，是用戶是否習(xí)慣配制一些柱效檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液。說到柱效檢測

2、，我可以向大家提供一個方法，而且很通用，你也可以用同樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液和流動相來檢測硅膠柱和氰基柱。 流動相： 10乙酸乙酯90正己烷 流速1.0 標(biāo)準(zhǔn)溶液： 乙苯（如乙苯找不動就用甲苯代替唄）苯甲酸甲酯 檢測波長254nm 這個方法特別適用于新購柱子（新購柱子往往保存在正相溶劑中）時(shí)即進(jìn)行檢測，如有問題，可及時(shí)與供應(yīng)商溝通。也適合在柱子在準(zhǔn)備放置相當(dāng)長一段時(shí)間之前進(jìn)行充分清洗后進(jìn)行檢測作為記錄留檔。在平常的使用過程中，如果分析物是固定重復(fù)的，我們當(dāng)然可以從對分析物的分離分析情況來作出判斷；但如果分析物和分析條件不同時(shí)，定期檢測柱效可以避免柱效下降導(dǎo)致分離不佳再分析查找原因這樣浪費(fèi)人力物力的過程。不

3、過特別要注意的是，當(dāng)氨基柱（或氰基柱）在反相條件中使用時(shí)，如用該條件檢測，請注意流動相的換相過渡 氨基柱的使用： 需要注意的是，氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用壽命稍遜的心理準(zhǔn)備，特別是當(dāng)你的使用條件是反相條件下時(shí)。 反相條件下使用時(shí)，要特別注意控制PH值范圍，PH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。所以，在使用后以及準(zhǔn)備長時(shí)間放置該柱時(shí)，必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。 有一種情況是，當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)如果汁的分析時(shí)（分析其中的糖份），酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子

4、的存在，可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。這時(shí)，Kromasil專家所給的建議是：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動相中略微添加少許氨如0.1。 氨基柱的清洗： 簡單說起來，正相條件下使用的氨基柱你就參照硅膠柱的清洗方法；反相條件下使用的氨基柱你就參照C18的清洗方法。 平時(shí)在正相條件下使用： 首先用50倍柱體積的異丙醇清洗，因異丙醇粘度較大可適當(dāng)放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用異丙

5、醇過渡回到平常使用的正相流動相，即可。 平時(shí)在反相條件下使用： 緩沖鹽應(yīng)及時(shí)沖洗，以及不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等，屬常識就不作特別交待了。 用50倍純甲醇沖洗；之后，用異丙醇過渡后，用二氯甲烷沖洗色譜柱；之后，再用異丙醇過渡回來到甲醇條件下。 這些清洗方法，主要是針對當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法，色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等LUNA氨基柱的使用方法 1. 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中，例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。 2. 正相使用 2.1 新柱子可

6、直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再根據(jù)流動相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積，最后換成流動相。 2.2正相使用時(shí)，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析；流動相要徹底脫氣，并不得含有羰基化合物和過氧化物（質(zhì)量不好的乙醚、四氫呋喃含有少量）。 2.3 任何時(shí)候更換流動相時(shí)都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。 3 反相使用 3.1先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）沖柱子。 3.2以0.5ml/min的

7、流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉（LUNA）水溶液沖柱子（注意pH值切不可超過11.0），立即用水（0.5ml/min的流速，30倍柱體積）沖洗，再換成流動相。 3.3 配制流動相時(shí)，應(yīng)各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。 3.4反相條件下使用時(shí)，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。最理想的pH范圍在pH 3.0-7.0 3.5如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類，建議在用分析流動相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。 3.6有一種情況是，當(dāng)使用氨基

8、柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí)，酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在，可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動相中略微添加少許氨如0.1。 4 色譜柱的沖洗：簡單說起來，正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法；反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。 5 色譜柱的保存5.1 正相使用時(shí)，將柱子沖洗干凈后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。 5.2 反相使用時(shí)，如

9、短期不用，可用甲醇或乙腈保存；長期不用時(shí)需將甲醇依次用異丙醇、氯仿置換，最后用正己烷保存。 6 色譜柱的再生 6.1方案1：依次用甲醇、異丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、異丙醇、甲醇沖柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱體積），再換流動相。這些清洗方法，主要是針對當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法，色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等。 6.2方案2：NH2柱用于反相條件時(shí)，NH2鍵會水解，尤其是在該柱子pH范圍以外，在極端酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快，如果在這個條件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱體積溶液沖洗，如下： 95水/5乙腈 THF四氫呋喃 95乙腈/5水 并保

10、持95乙腈/5水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。 6.3 方案3：柱子使用一定時(shí)間后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢復(fù)柱性能,清洗時(shí)依次用10倍柱體積的下列溶液沖洗： 95水/5乙腈 THF四氫呋喃 95乙腈/5水 再走流動相即可 色譜柱最基礎(chǔ)的一種分類是根據(jù)柱填料類型分為正相柱和反相柱 正相柱多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，另一類正相填料是硅膠表面鍵合CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠流動相為非極性溶劑。 反相柱主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。 常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，流動相為極性溶劑比較有意思的是鍵合CN，-NH2等官能團(tuán)的一類所謂正相柱, (甚至有些的特殊填充的硅膠極性柱) 在反相條件下的使用這對于不少難以在反相柱達(dá)到分離分析目的的情況下變得非常有用. 在反相條件下 這些色譜柱的色譜分離規(guī)律與常規(guī)反相柱有顯著差異 目前對改類色譜柱的分離規(guī)律研究極少 根據(jù)本人使用經(jīng)驗(yàn) 這兒以保留時(shí)間隨著有機(jī)相比例的變化為例說明改類色譜柱特殊分離性能 一般反相色譜柱與有機(jī)相比例呈簡單線形 即提高有機(jī)相比例保留時(shí)間變短 而在這些正相柱上的保留時(shí)間與有機(jī)相比例呈現(xiàn)拋物線