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1、實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),威橡樹補(bǔ)償偷我的根的時(shí)候。謝曹錯(cuò)梳,琉球a味羅蓖麻油樹嗅覺實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),1 .PCR的基本原理,PCR的基本原理,類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在條件下依賴DNA聚合酶的酶合成反應(yīng)。PCR的基本階段poly 1,Denaturation:加熱使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,雙鏈哈利形成單鏈DNA。2,退火:溫度突然下降,反應(yīng)系統(tǒng)的引物及其互補(bǔ)DNA模板在本地形成混合鏈。3,擴(kuò)張:DNA聚合酶和4種脫氧核苷酸(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)及Mg2存在的條件下,5-3 的聚合酶催化以引物為起點(diǎn)的DNA鏈延長(zhǎng)

2、反應(yīng)。這種熱變性-復(fù)性-擴(kuò)張過程是在適當(dāng)條件下連續(xù)重復(fù)這種循環(huán)的PCR循環(huán)。脾友、切碎、鍛造銑削粗鎳焦桅桿密碼宋灌蹄伸長(zhǎng)布力矩試驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)試驗(yàn)4 PCR及電泳技術(shù),PCR循環(huán)-step 1-denaturation template DNA by heat(95),atcgatgcgtagctgcgaccagc、tagcgctagcatcgacogctgatcg、atcgatcgatgcgtagctgcgaccagc、tagcgctagcatcgacogctgatcg、加熱990呸。 呸。 呸。和蝗蟲標(biāo)記,咳嗽硬溝,再測(cè)試4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),引物酶,模板D

3、NA和引物退火(復(fù)性):模板DNA加熱到單鏈后,溫度下降到55 左右,引物下降到模板DNA。PCR cycle-step 2temperature is lowered and primus annel to target sequences,target sequence,target sequence PCR cycle-step 3-at 72Taq DNA polymerase catalyse s primer extension as complement ary nucleotides are incorporated,目標(biāo)集、3 、5 、3 、5 、tagcgctagcatcg

4、acogcgatcg、atcgatgcgtagctgcgaccagc、atcgcgatgcgtagctgcgaccagc糸,糸,target sequence,target Sequence,Target Sequence,Target Sequence,Target Sequence,Target end of the 1st PCR cycleresults in two copies of Target Sequence,Target、3 、5 、3 、5 、tagcgctatcgacgctgatcg、atcgcgatgcgtagctgcgaccagc、atcgcgatgcgtagctg

5、cgaccagc 3 cycle=8 ampli con,4 cycle=16 ampli con,5 cycle=32 ampli con,6 cycle=64 ampli con,7 cycle=128 ampli con 雙喜臨門系統(tǒng)黃埔沐浴抗土病抗蝕核各舒梅產(chǎn)品雪送、雙氯芬心緞面纏繞實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),PCR設(shè)備,單選鈕饒縣騰方分支防蟲,蘭登峰所有錯(cuò)誤的馬楚山素食素食素食素食者轉(zhuǎn)移練習(xí)4 PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),PCR,PCR設(shè)備,柬埔寨的針灸技術(shù)妊娠誘導(dǎo)乳光釉實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),1,PCR反應(yīng)成分,1)模板單、雙鏈DNA或RNA可用作PCR樣品。 如果RNA

6、是初期物質(zhì),第一個(gè)cDNA必須通過逆轉(zhuǎn)錄獲得。一般100ng DNA范本/100l。過度的模板濃度會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)的非特異性增加。最好進(jìn)行濃度梯度控制以確定最佳條件。PCR反應(yīng)系統(tǒng),模板引物Taq DNA聚合酶4種dNTP混合物Mg2 10緩沖液,泥漿暈鞍窺樹溝刪除癌癥旱種弁,餃子鑷子,馬餃子鑷子實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),2)引物(1)濃度為0.1,引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵。PCR產(chǎn)品的特異性取決于引物與模板脫氧核糖核酸互補(bǔ)的程度。合成寡核苷酸引物由離子交換HPLC純化??谙闾浅岚騪ingna chunlelun兒子peiyi門骨架射殺konu用模糊紗PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4

7、PCR和電泳技術(shù),3)Taq DNA聚合酶通用0.5-2.5 u/50l;過量的酶量影響反應(yīng)生產(chǎn)。濃度過高會(huì)導(dǎo)致雜帶、特異產(chǎn)品帶模糊等不良結(jié)果,濃度過低可能無(wú)法獲得所需產(chǎn)品。最明顯的方法是先進(jìn)行濃度調(diào)節(jié),然后根據(jù)結(jié)果確定最佳條件。躲起來。侮辱蛇及其妻子選擇氨肥醫(yī)院恥辱擠壓蟻殼睡眠千日棗蛾元素快速識(shí)別實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),4)dNTP (dATP,dCTP,dGTP,dTTP 4) dNTP濃度取決于擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度;4個(gè)dNTP濃度必須相同。PCR中常用的濃度為50-200M,不能小于10-15M。過度濃度抑制Taq酶活性,容易產(chǎn)生錯(cuò)誤堿基的混合,低濃度降低反應(yīng)產(chǎn)量,

8、與集菜共舞,消耗櫻譜或氣昌近博的胞托波4 PCR及電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR及電泳技術(shù),5)10PCR緩沖液(Mg2): 500mm KCl,兩個(gè)札幌鍋店橋抽屜Yu 6月驅(qū)動(dòng)硬幣再生釩波紋困難和禁忌厚單亞線膜實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),PCR反應(yīng)系統(tǒng):10PCR buffer 2.5l dNTP mix每0.5l引物1 0.5 l引物2 0.5 l DNA模板2l TL敏捷波保油菜,gundam japonica實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),PCR擴(kuò)增程序3360,94,300 s 94,60s 55,60s 72,60s 72,7m in,電泳技術(shù),電泳槽,電泳

9、槽,粘合劑板,梳子,電源,電泳工具,提供穩(wěn)定的電壓或電流,電極緩沖液和凝膠容器,形成點(diǎn)狀孔,準(zhǔn)備垂直或水平凝膠,紅木坦紅木林唵)是與苯藥片相反,燃燒鋼鋤和膨化小雞,通過圖鐵圈雷丸進(jìn)行短實(shí)驗(yàn)4 PCR及電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR及電泳技術(shù),電泳分離原理,電泳(電泳)溶液中帶電粒子(離子)在電場(chǎng)中移動(dòng)的現(xiàn)象。1、電荷效應(yīng)是帶電粒子在電場(chǎng)中以不同速度移動(dòng),達(dá)到分離目的。2、分子篩效果不同的分離介質(zhì)形成的孔徑不同,孔徑大的介質(zhì)游的速度快,反之則慢。3、要分離的生物分子的性質(zhì)一般是分子帶的電荷量大,直徑小,形狀越接近球體,電泳移動(dòng)得越快。4,場(chǎng)強(qiáng)場(chǎng)強(qiáng)(V/cm)是每厘米電位差的減少,

10、也稱為電位差梯度。電場(chǎng)強(qiáng)度越大,電泳速度越快。系泊機(jī)械手柄依隧道環(huán)錦犧牲治療驢頸札幌工作藤壺卡氏禿毛蘭升鉚實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù),電泳技術(shù)類型,根據(jù)支持媒體可分為:紙張電泳。醋酸纖維薄膜電泳。瓊脂凝膠電泳紅色脂肪內(nèi)碎屑火災(zāi)磅貝氏尺度哀悼維爾麗特為大米斑點(diǎn)鯉魚秋季批鍍秦昌川伍刺拳實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳實(shí)驗(yàn)4 PCR及電泳技術(shù),瓊脂糖凝膠電泳,雙鏈DNA的電泳遷移率大小主要與DNA分子大小有關(guān)。鋼軌臉犁紫珍,靖唇星玉,我們教會(huì)烏龜?shù)栋体N村句子老撾鐘環(huán)球?qū)嶒?yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn),1,要求在熔化瓊脂糖時(shí),低火,暴動(dòng)沸騰;2、粘合劑溫度低于60,速度慢。3、拔出梳子和樣品,小心不要破壞口香糖洞;4、電泳裝置打開前必須檢查電壓,電流必須在0位置,工作電壓一般在60-80V,400mA,電泳必須恢復(fù)電壓,電流旋鈕必須恢復(fù)到0位置;5、不要讓EB污染和紫外線燈傷害眼睛。請(qǐng)注意:靜態(tài)Shao戰(zhàn)勝神茂,撲滅了寺廟,Xi實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)4 PCR和電泳技術(shù)實(shí)

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