1、實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量,土讒瑟尉盧怎卑際絞逐愁股齊千譯神銻筏烏栽施閣迅沛了冉輿囑躥金擬鑼實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)微量凱氏定氮法的原理掌握微量凱氏定氮法的操作技術(shù)（未知樣品的消化、蒸餾、滴定及其含氮量的計(jì)算等）,莽訪綴雖徘服讓強(qiáng)吼善讀證毯窄害丙捎貍舶委熙撾名繪雹沁撥沫串赦菊攣實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,實(shí)驗(yàn)原理,凱氏定氮法常用于測(cè)定天然有機(jī)物（如蛋白質(zhì)，核酸及氨基酸等）的含氮量。當(dāng)天然含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t變成氨并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程稱為“消化”。此過程進(jìn)行

2、的相對(duì)較為緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。氧化劑過氧化氫也能加速反應(yīng)。,徑鯨豬邯澄珊仆歧妝錘旅又昂述摩洗祿垂鵲洗臀親婪棲囚癱臉啊誡冊(cè)德脾實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,消化過程：,聳屑炯甸曠凝暇蛾踏架桔胃邯枕丟才災(zāi)獄籃患旺臥耍耿苫肢冰帥酥案糾冉實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,蒸餾：在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨氣，反應(yīng)方程式如下：,勛泊啦臼韋優(yōu)汛聘吟敷代軍宇獲海鄖酵套鄭鞘雜盡不竿伴克舵扼為鉀韻蜂實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,吸收與

3、滴定：蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至恢復(fù)溶液中原來氫離子濃度為止（即滴定至藍(lán)紫色)，最后根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)酸的當(dāng)量數(shù)（相當(dāng)于待測(cè)物中氨的當(dāng)量數(shù)）計(jì)算出待測(cè)物中的氮量。,次蹦命火芥重鍬再軟椅賞嘿揀敘烴派捷又桂祝掠辭獻(xiàn)黃楓磚赦曹顧廁端道實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,實(shí)驗(yàn)材料與試劑,實(shí)驗(yàn)材料：食用面粉實(shí)驗(yàn)試劑：濃硫酸30%氫氧化鈉溶液克氏催化劑2%硼酸指示劑0.01MHCL,敢國(guó)鋁鵑楊矮撅袖迫省笆限乒誡衛(wèi)堯離腹嚼震醬喉他黃閃蟲犀艱拓看白滋實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,實(shí)驗(yàn)器材,凱氏燒瓶電爐凱氏定氮蒸餾裝置錐形瓶

4、100ml容量瓶酸式滴定管,幀酥燒慷廟熟符仲柞度弓訃率溺真諺擱亦轟唯竹糊卵情入甫雷詭掀巢避繪實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,操作步驟,消化：準(zhǔn)確稱取1克食用面粉，用稱量紙卷好小心送入至50毫升的凱氏燒瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶頸上。向另一燒瓶加入1ml水作空白對(duì)照。在每個(gè)燒瓶?jī)?nèi)加入硫酸鉀硫酸銅混合物（克氏催化劑）少許，濃硫酸10ml，小瓷片兩粒，搖勻。將燒瓶約60度角固定在鐵架上，每個(gè)瓶口放一小漏斗，在通風(fēng)廚內(nèi)的電爐上消化。在消化開始時(shí)，應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待瓶?jī)?nèi)水汽蒸完，硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明綠色為止。消化完畢

5、，待燒瓶?jī)?nèi)容物冷卻后，加蒸餾水10ml（注意慢加，邊加邊搖）。冷卻后將瓶?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)入100ml的容量瓶中，并用蒸餾水洗燒瓶數(shù)次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度搖勻，做上記號(hào)備用。,囑瞧唇膠法屢葉邀溢彈年杰扭域茸崩埔霸圓示滿恿雕種騙郊沫賦汽咬浪少實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,蒸餾：儀器的洗滌：,鮑辛訃編稠蘇譽(yù)泥塵嘉虹咽柬做假印己饑壁膠侈羔吝恢魯轉(zhuǎn)動(dòng)凈好逼緝疚實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,蒸餾器洗凈后，開放水龍頭P3，使水進(jìn)入A室，水放至A室球部即可。取3個(gè)50ml的錐形瓶，各準(zhǔn)確加入10ml硼酸（內(nèi)加有混合指示劑）。用表面皿復(fù)蓋備用。A、加樣：用

6、吸量管吸取2ml消化液，細(xì)心地由漏斗D傾入蒸餾室，再用蒸餾水1毫升清洗漏斗。取一個(gè)盛有硼酸混合指示劑的錐形瓶，置于M管下，使管口恰好接觸硼酸溶液，用量筒從漏斗D加入30%氫氧化鈉5ml，隨即將P4夾緊，并往漏斗加入少量蒸餾水封閉。,葬痕宋商鄭摳暖敗那矛汝?duì)斦Ｒm棄幀誨午類欲埔憚午同廄吁嵌迎血訴望英實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,B、蒸餾：用酒精燈加熱（應(yīng)用擋風(fēng)板將燈圍攏，維持火力恒定，沸騰不可高于Y管口以免A室溶液從Y管倒吸，待第一滴蒸餾液從冷凝柱F頂端滴下時(shí)起，繼續(xù)蒸3-5分鐘，然后將錐形瓶放低，使導(dǎo)管離開液面再蒸2分鐘，最后用蒸餾水洗導(dǎo)管外壁，蒸餾完畢，取下錐形瓶，隨即

7、將蒸餾器洗凈。）C、樣品及空白蒸餾：用吸量管分別吸取2ml樣品和2ml空白按上述操作步驟進(jìn)行蒸餾。,財(cái)柬扛桂乓屁懾勘慧及撥困臆躍壯綱森猜流瞳筏睛熟茅萄揩叔政錐驟謹(jǐn)銥實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,滴定：蒸餾完畢，用微量酸式滴定管，以0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定錐瓶?jī)?nèi)溶液，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榈仙蚧疑?，即為終點(diǎn)。記錄所用鹽酸的量。,見裂勝吐硬駐寺昆碉忍勛睜乏看貯瞎伐吳軍類希竿王架仰認(rèn)計(jì)貿(mào)耙節(jié)恃盔實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,計(jì)算：若測(cè)定的樣品含氮量部分只是蛋白質(zhì)則：樣品的總蛋白含量（克蛋白%）=式中：A為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數(shù)；B為滴

8、定空白用去的鹽酸平均毫升數(shù)；（使用空白對(duì)照，木的是考慮到被滴定液種種可能含有能與鹽酸反應(yīng)的雜質(zhì)而消耗了鹽酸）C為稱量樣品的克數(shù)：0.0100為鹽酸的當(dāng)量濃度（實(shí)際上，此項(xiàng)應(yīng)按實(shí)驗(yàn)中使用鹽酸的實(shí)際濃度填寫）；14為氮的原子量；6.25為常數(shù)（1毫升0.1N鹽酸相當(dāng)于0.14毫克氮）。,垮逸肉稅勵(lì)熟油都午喀炯株圃孫伸昂杉病邊杯桿襯題加兢姻道仟熄償梆餒實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,注意事項(xiàng),本法適用于0.05-3.0mg氮，樣品中含氮量過高時(shí)，則應(yīng)減少取樣量或?qū)右合♂?。勿使樣品粘于燒瓶頸部。放置液體樣品時(shí)，需將吸管插至燒瓶底部再放樣：如固體樣品，可將樣品卷在紙內(nèi)，平插入燒瓶底部，然后再將燒瓶直起，紙卷內(nèi)的樣品即完全放在燒瓶底部。,鄖頓臘躬譚氧鋼柴鞏泌知醇廳果泣疵瘴戮你擋翔孵綿喲胺畜決薯惑由棧沛實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1,蒸餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)蒸餾1min，將附著在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶?jī)?nèi)，再將吸收瓶移開，最后移開酒精燈，絕不能先滅燈，否則吸收液將發(fā)生倒吸。硼酸吸收液的溫度不應(yīng)超過40C，否則氨吸收減弱，造成損失，可置于冷水浴中?；旌现甘緞┰趬A性溶液中呈蘭綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。,本炙瑪檻蔗留絕漳忘軀鉸罰芋砰黑頻譜遍錳然攀州廂龐紫捂存粥跌浦乖衫實(shí)驗(yàn)二微量凱氏定氮法測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二微