1、實驗四 微生物顯微鏡下 的直接計數(shù),一 血球計數(shù)板測定微生物細胞的數(shù)量,1 實驗?zāi)康?2 實驗原理 3 實驗材料 4 實驗方法步驟 5 實驗報告,1 實驗?zāi)康?掌握血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的原理。 學(xué)習(xí)用血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的方法。,2 實驗原理,利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)，是將菌懸液放入血球計數(shù)板與蓋玻片之間的計數(shù)室中，然后在顯微鏡下計數(shù)，因為計數(shù)室容積一定，所以可根據(jù)測定值推算出菌懸液單位體積所含微生物的總數(shù)量。,血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu),它是特制的厚載玻片，中央?yún)^(qū)域有四條凹槽而形成三個平臺，中間平臺較寬，它又被一短橫槽分隔為兩部分，每一部分均有一個方格網(wǎng)，每一方格網(wǎng)可分為九個大

2、方格，中央大方格就是計數(shù)室。大方格分為16個中方格，每個中方格又可分為25個小方格。每個大方格共含有400個小方格。計數(shù)室大方格邊長為1mm，底面積為1mm2，高0.1mm,所以每個計數(shù)室固定容積為0.1mm3。,計數(shù)方法,在計數(shù)時，用含16個中方格的計數(shù)板，要按對角線方位計數(shù)左上、左下、右上、右下等四個中方格（100個小方格）所含有的菌數(shù)；由此可計算得出每個小方格所含有的菌數(shù)的平均值， 計數(shù)室每個小方格容積為： 0.110-34001410-6 (ml) 每ml含的小方格數(shù)1/（ 1410-6）= 4106 = K 計算公式：每ml菌液含菌數(shù) = N K d (N：每個小方格含菌數(shù)平均值；

3、d：菌液稀釋倍數(shù)； K=4106),3 實驗材料,稀釋100倍的酵母菌菌懸液,即 d=100,實驗步驟,1 鏡檢計數(shù)室：對計數(shù)室進行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計數(shù)。 2 加樣液：先在血球計數(shù)板兩個計數(shù)室部位加蓋玻片，再用無菌玻棒或滴管沾取待測菌懸液稀釋液（已搖勻），從蓋玻片邊緣滴加，使菌液沿縫隙靠毛細作用自行進入計數(shù)室內(nèi)。靜置5min。 3 顯微鏡計數(shù)：將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡觀察，后換高倍鏡觀察計數(shù)。位于格線上菌體只計上邊線和左邊線上的，如果出芽酵母芽體大小達到母細胞一半時，可計作兩個菌體。選擇五個視野，在每個視野內(nèi)任意選擇五個小方格計數(shù)，求出每個小方格菌體數(shù)量平均值。 4 根據(jù)公式計算每ml菌液含菌數(shù)。 5 測量完畢后，取下蓋玻片用水沖