1、1、PPT制作：楊金收，胰腺癌細(xì)胞系的表型和基因型介紹，2、胰腺癌細(xì)胞系進(jìn)行胰腺癌相關(guān)實(shí)驗(yàn)的原因(1)胰腺癌常見的四種基因(K-ras，p16，p53，Smad4)的突然變異比例和胰腺癌細(xì)胞系的突然變異比例相近胰腺癌細(xì)胞系統(tǒng)不同的表型和基因型利用代表胰腺癌不同亞類的胰腺癌細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行反應(yīng)歷程推理和因果實(shí)驗(yàn)，如不同特定蛋白表達(dá)和腫瘤生長、浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系，化學(xué)療法耐受力實(shí)驗(yàn)。3、常見胰腺癌細(xì)胞來源的AsPC-1細(xì)胞球：胰頭癌原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移，腹部器官，腹水分泌細(xì)胞：粘蛋白，CEA BxPC-3細(xì)胞球：胰腺癌原發(fā)腫瘤不轉(zhuǎn)移的分泌細(xì)胞： CEA，CA199， 粘蛋白等裸鼠移植生長類似患者的原位腫瘤Cap

2、an-1細(xì)胞球：胰頭癌來源的肝臟轉(zhuǎn)移灶轉(zhuǎn)移至區(qū)域淋巴結(jié)、肝臟等的分泌細(xì)胞：黏液、Capan-2細(xì)胞球：胰頭癌來源的浸潤、十二指腸壁浸潤的遠(yuǎn)端CFPAC-1細(xì)胞球：胰頭癌來源的肝臟轉(zhuǎn)移灶(來源于轉(zhuǎn)移廣泛轉(zhuǎn)移到肝臟CFTR的突然變異：來自先天性胰腺炎引起新胰腺癌危險(xiǎn)因素(有爭議)的HPAC細(xì)胞球：胰頭癌分化穩(wěn)定、良好的HPAF-II細(xì)胞球：胰腺癌腹水癌細(xì)胞(轉(zhuǎn)移到肝、隔和淋巴結(jié))，4、 幾種常見胰腺癌細(xì)胞系統(tǒng)來源的Hs 766T細(xì)胞球：胰腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶來源的MIA Paca-2細(xì)胞球：浸潤胰體尾癌原位腫瘤，主動脈周圍不表達(dá)多種CEA，ALP陰性PANC-1細(xì)胞球：轉(zhuǎn)移胰頭癌原位腫瘤， 轉(zhuǎn)移到胰周

3、淋巴結(jié)的CEA SU.86.86細(xì)胞球：轉(zhuǎn)移到胰頭癌肝臟轉(zhuǎn)移灶的廣泛肝臟轉(zhuǎn)移、5、細(xì)胞球粘附、細(xì)胞球粘附均以細(xì)胞球外基質(zhì)和細(xì)胞表面分子的接觸為介導(dǎo)：血纖蛋白、基膜和結(jié)締組織發(fā)現(xiàn)的糖蛋白I型和IV型膠原， 關(guān)于組織間質(zhì)和基膜層粘連蛋白基膜中主要非膠原蛋白的研究： Capan-1比Mia-paca-2更容易連接在I型膠原Capan-1和Mia-paca-2之間， Capan-1對Bxpc-3、panc-1和I型膠原蛋白的黏附性與Bxpc-3和panc-1之間的黏附性相近的研究表明，Bxpc-3更強(qiáng)，6、影響細(xì)胞球黏附性、研究差異的變量：細(xì)胞球定量技術(shù)差異， 如分光光度法與光學(xué)顯微鏡不同處理細(xì)胞球培

4、養(yǎng)條件細(xì)胞球外基質(zhì)的方法，研究者建議：引用已有的研究，應(yīng)認(rèn)真闡明不同細(xì)胞系的黏附特性；7， 細(xì)胞球遷移和侵犯相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法：細(xì)胞球增殖實(shí)驗(yàn)MTT CCK8細(xì)胞球遷移實(shí)驗(yàn)transwellusingbodenchamberswond-healingcellmigationassay (細(xì)胞球齒輪離合器實(shí)驗(yàn))細(xì)胞球浸潤實(shí)驗(yàn)transwell (特定基質(zhì)) *特定基質(zhì)：人工基質(zhì)凝膠型膠原、巢蛋白、硫酸肝素等)、8、細(xì)胞球遷移和浸潤、細(xì)胞球遷移在癌細(xì)胞遷移中起重要作用。 關(guān)于細(xì)胞球轉(zhuǎn)移的研究： Panc-1 (多數(shù)是單細(xì)胞球轉(zhuǎn)移)是bxpc-3 (多數(shù)是整個(gè)細(xì)胞球團(tuán)的轉(zhuǎn)移)的5倍的能動性Panc-1細(xì)胞

5、球，在I型膠原transwell中發(fā)現(xiàn)了比bxpc-3更優(yōu)秀的HPAF-II以比bxpc-3更高的能動性侵害癌癥的患者關(guān)于細(xì)胞球浸潤的研究： Capan-1和mia-paca-2與人工基質(zhì)糊劑類似的浸潤特性Bxpc-3比mia-paca-2具有更強(qiáng)的浸潤能力， 研究表明，兩者的Panc-1比mia-paca-2具有更強(qiáng)的侵犯能力，影響研究差異的變量在檢測侵犯性能的試劑細(xì)胞球培養(yǎng)條件細(xì)胞球培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞球定量技術(shù)為研究者得出實(shí)驗(yàn)中的侵犯能力結(jié)論時(shí)，首先明確本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系的侵犯特征。、1.0、血管生成能力、腫瘤微血管密度(TMVD )是重要的腫瘤發(fā)展和患者生存的預(yù)測指標(biāo)，在大部分腫瘤(如乳腺癌、前列腺

6、癌)中介導(dǎo)心血管的生成。 腫瘤的增殖與心血管的生成密切相關(guān)，其血管生成促進(jìn)因子多于抗血管生成促進(jìn)因子，其中的促進(jìn)因子如血管內(nèi)皮生長因子與胰腺癌的TMAD密切相關(guān)。 血管生成促進(jìn)因子的高表達(dá)不僅促進(jìn)中腫瘤血管的生成，還促進(jìn)腫瘤細(xì)胞球有絲分裂的進(jìn)行。 血管生成促進(jìn)因子：細(xì)胞球因子，如IL-1、IL-8趨化因子、酶催化劑類其他腫瘤產(chǎn)物，COX-2的腫瘤血管生成促進(jìn)作用：促進(jìn)AA向PGE2的轉(zhuǎn)化，PGE2是血管生成促進(jìn)因子PGE激活NF-kB NF-kB促進(jìn)COX-2的轉(zhuǎn)錄和翻譯， IL-8能促進(jìn)細(xì)胞球增殖和血管內(nèi)皮細(xì)胞趨化因子運(yùn)動介導(dǎo)的腫瘤生長，1.1、血管生成能力、相關(guān)研究： BxPC-3、Cap

7、an-1、Capan-2和hpaf-ii能表達(dá)COX-2，而AsPC-1、MIA PaCa-2、PANC-1不表達(dá)， 其中，Capan-2表達(dá)大量的COX-2，BxPC-3表達(dá)高水平的IL-1和IL-8，而Capan-2和MIAPaCa-2表達(dá)低水平的IL-8和檢測不到的IL-1的總結(jié)： BxPC-3和capan-3 AsPC-1和MIA PaCa-2表達(dá)低水平血管生成促進(jìn)因子的建議：可檢測腫瘤細(xì)胞系中血管生成促進(jìn)因子的表達(dá)，作為反映腫瘤血管生成能力的指標(biāo)。1.2、腫瘤形成能力(體內(nèi))、腫瘤形成性做評估：腫瘤體積瘤質(zhì)量發(fā)生概率生長速度移植瘤方法：皮下注射胰腺癌細(xì)胞(免疫缺乏小鼠)腹膜內(nèi)注射/靜

8、脈注射腫瘤細(xì)胞球原位移植瘤組織供體皮下移植瘤小鼠移植瘤細(xì)胞球原位移植瘤細(xì)胞球insitu，1.3，腫瘤形成能力(體內(nèi))， 關(guān)于皮下注射的研究Bxpc-3腫瘤比PANC-1大，也有顯示PANC-1腫瘤大的研究Capan-1注射后在1.4周發(fā)展成腫瘤，bxpc-1和PANC-1在腫瘤4個(gè)月以上的Bxpc-3注射后的潛育期在4.0開始生長， capan-1在1.0潛育期開始生長的panc-1腫瘤潛育期為4周，mima-paca-2腫瘤潛育期需要對3周腹膜內(nèi)注射的研究：嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺乏小鼠注射癌細(xì)胞后形成腫瘤的概率為Capan-1-100%，panc-1-86%， mia-66%腫瘤體積研究綜述了mi

9、acapan-1 panc-1:bxpc-3和panc-1細(xì)胞球比腫瘤形成前潛育期capan-1細(xì)胞球在皮下和腹膜下易形成腫瘤、1.4、腫瘤的能力(體內(nèi)) 有關(guān)原位移植腫瘤組織的研究：不同細(xì)胞系腫瘤概率為100%的研究有移植腫瘤體積、mia-paca-2capan-2、其他研究， HPAF-IIMia-paca-2panc-1Aspc-1 Q :為了研究供體皮下血液循環(huán)和腫瘤微環(huán)境的確立和腫瘤早期的發(fā)生發(fā)展，沒有一盞茶說服力的原位移植腫瘤細(xì)胞球的研究： AsPC-1: 100% (10/10 )， CFPAC-1: 100% (10/10 )、HPAFII:100% (8/8)、capan-2

10、3360 9.0 % (9/1.0 ) hs 766 t 3360 9.0 % (9/1.0 )、HPAC: 88% (7/8)、PANC-1:80% (8/10 ) 總結(jié)andb xpc-:67 % (6/9) mia-paca-2腫瘤體積在HPAC細(xì)胞球mia-paca-2和Aspc-1注射后2、5周內(nèi)具有相似的生長特征：胰腺癌細(xì)胞、不同移植方法、腫瘤性不同、1.5、 基因型特征常見基因變異： kr ASM p53 CDK n2a (p16/p 1.6 ink 4a ) Smad4(DP C4 )顯示這4個(gè)基因的變異與胰腺癌細(xì)胞的分化程度及生物科學(xué)行為無關(guān)。 也有研究證實(shí)，腫瘤轉(zhuǎn)移性與P5

11、3基因的變化有關(guān)。 因此，基因型和表型之間可能有一定的聯(lián)系。 1.6、基因型特征KRAS基因、KRAS突然變異幾乎發(fā)生于所有胰腺癌原發(fā)腫瘤，與腫瘤的早期發(fā)展有關(guān)。致癌反應(yīng)歷程： 1.2、1.3或6.1密碼子突然變異抑制Ras蛋白質(zhì)內(nèi)的GTP酶催化劑，Ras蛋白質(zhì)與GTP酶催化劑相連接，處于持續(xù)激活狀態(tài)的Ras蛋白質(zhì)形成Raf-mitogen-activited蛋白酶體信號通路， 有關(guān)akt-蛋白酶b信號通路的研究除密碼子1.2突然變異發(fā)生于多種細(xì)胞系中的Hs766T和BXPC-3外，SW979中無RAS突然變異，但有研究表明Hs766T中有高水平的RAS基因突然變異： BXPC-3細(xì)胞系KRA

12、S基因是野生型的無ras激活* BxPC-3細(xì)胞球不能代表大部分胰腺癌，1.7、基因型特征CDKN2A/P16基因p16基因失活發(fā)生在98%以上的胰腺癌患者身上，發(fā)生在40%的胰臟上皮內(nèi)腫瘤變化，被認(rèn)為是胰腺癌早期發(fā)展的重要原因失活的反應(yīng)歷程：基因變異(16% )的純子缺失(12% )啟動子甲基化(52% )的研究： Capan-1和panc-1包括純子缺失，HPAF-II為框內(nèi)缺失，HPAC為外顯子2的突然變異Bxpc-3細(xì)胞球p16為野生型，但不能檢測p16蛋白AsPC-1、Capan-2和Hs766T細(xì)胞球p16也是野生型。 總結(jié)：基本上所有胰腺癌細(xì)胞系有各種原因p16基因失活。 1.8

13、、基因型特征TP53與Smad4基因、TP53基因(抑癌基因)的突然變異發(fā)生于50%前后的胰腺罹患癌癥，與腫瘤后期的進(jìn)展有關(guān)。 關(guān)于TP53的研究： P53和p16在細(xì)胞周期G1/S期發(fā)揮重要的檢測和修復(fù)作用的p16和P53的高突變頻率強(qiáng)調(diào)了在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中廢除G1/S期檢測部位的重要性。 Smad4基因(抑癌基因)是tgf家族的一員，約48-55%的胰腺癌可發(fā)生突然變異，與胰腺癌后期的發(fā)展有關(guān)。 關(guān)于Smad4的研究： BxPC-3、CFPAC-1和Hs766T的同質(zhì)結(jié)合子可靠，被SMAD4/DPC4蛋白質(zhì)Capan-1細(xì)胞球缺乏的的SMAD4/DPC4在點(diǎn)突變中失活，Capan-2、 MIA PaCa-2 PANC-1和SU. 86.86 88細(xì)胞球中Smad4