1、合格的微生物培養(yǎng)標本與抗生素的合理使用,主要內(nèi)容,一、開展微生物檢驗的必要性 二、臨床微生物室的任務(wù) 三、與臨床溝通中常見問題 四、臨床微生物標本的采集及運送原則,一、開展微生物檢驗的必要性,為進一步促進抗菌藥物合理使用，有效控制細菌耐藥，保證醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全，抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法（衛(wèi)生部令第84號）已于2012年2月13日經(jīng)衛(wèi)生部部務(wù)會審議通過，現(xiàn)予以發(fā)布，自2012年8月1日起施行。 范圍：全國各級各類醫(yī)療機構(gòu)，重點是二級以上公立醫(yī)院。 二級以上醫(yī)院應(yīng)當根據(jù)實際需要，建立符合實驗室生物安全要求的臨床微生物室。 辦法建立抗菌藥物臨床應(yīng)用分級管理制度。 根據(jù)安全性、療效、細菌耐藥性、價格

2、等因素，將抗菌藥物分為三級：非限制使用級、限制使用級與特殊使用級。具體劃分標準如下：,（一）非限制使用級抗菌藥物是指經(jīng)長期臨床應(yīng)用證明安全、有效，對細菌耐藥性影響較小，價格相對較低的抗菌藥物； 適用于輕度、局部感染（醫(yī)師） 如：青霉素、氨芐西林、阿莫西林、甲硝唑等,（二）限制使用級抗菌藥物是指經(jīng)長期臨床應(yīng)用證明安全、有效，對細菌耐藥性影響較大，或者價格相對較高的抗菌藥物； 適用于嚴重感染、合并感染（主治） 如：三代頭孢、頭孢哌酮/他唑巴坦、阿奇霉素、替硝唑,（三）特殊使用級抗菌藥物是指具有以下情形之一的抗菌藥物： 1.具有明顯或者嚴重不良反應(yīng)，不宜隨意使用的抗菌藥物； 2.需要嚴格控制使用，避

3、免細菌過快產(chǎn)生耐藥的抗菌藥物； 3.療效、安全性方面的臨床資料較少的抗菌藥物； 4.價格昂貴的抗菌藥物。 適用于病情危重會診確認（主任） 四代頭孢、甘酰胺類（替加環(huán)素）、碳青霉烯類、 糖肽類、惡唑酮類、卡泊分凈、莫西沙星等,二、臨床微生物室的任務(wù),1.開展微生物培養(yǎng)、分離、鑒定和藥物敏感試驗等工作，提供病原學(xué)診斷和細菌耐藥技術(shù)支持，參與抗菌藥物臨床應(yīng)用管理工作。 藥物敏感試驗定義：使用體外試驗的方法檢測細菌的耐藥性，預(yù)測抗菌藥物的臨床治療效果，并為臨床醫(yī)生針對某一特定的臨床感染問題選用藥物提供依據(jù)-實施個體化治療。,我院微生物室,VITEK2-Compact全自動細菌鑒定儀,BacT ALER

4、T 3D全自動血培養(yǎng)儀,CO2孵箱 普通孵箱 干燥箱,染色槽,標本傳遞倉、掃描條碼接收標本,2.醫(yī)療機構(gòu)要根據(jù)臨床微生物標本藥敏結(jié)果合理選用抗菌藥物: 接受限制使用級抗菌藥物治療的住院患者抗菌藥物使用前微生物檢驗樣本送檢率不低于50%； 接受特殊使用級抗菌藥物治療的住院患者抗菌藥物使用前微生物送檢率不低于80%。,3.開展細菌耐藥監(jiān)測工作，定期發(fā)布細菌耐藥信息，建立細菌耐藥預(yù)警機制，針對不同的細菌耐藥水平采取相應(yīng)應(yīng)對措施；醫(yī)療機構(gòu)按照要求向全國抗菌藥物臨床應(yīng)用監(jiān)測網(wǎng)報送抗菌藥物臨床應(yīng)用相關(guān)數(shù)據(jù)信息，向全國細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)報送耐藥菌分布和耐藥情況等相關(guān)信息。,（1）主要目標細菌耐藥率超過30%的抗

5、菌藥物，應(yīng)當及時將預(yù)警信息通報本機構(gòu)醫(yī)務(wù)人員； （2）主要目標細菌耐藥率超過40%的抗菌藥物，應(yīng)當慎重經(jīng)驗用藥； （3）主要目標細菌耐藥率超過50%的抗菌藥物，應(yīng)當參照藥敏試驗結(jié)果選用； （4）主要目標細菌耐藥率超過75%的抗菌藥物，應(yīng)當暫停針對此目標細菌的臨床應(yīng)用，根據(jù)追蹤細菌耐藥監(jiān)測結(jié)果，再決定是否恢復(fù)臨床應(yīng)用。,金黃色葡萄球菌（905株）對抗菌藥物的敏感性 (%),大腸埃希菌（2634株）對抗菌藥物的敏感性 (%),大腸埃希菌（2634株）對抗菌藥物的敏感性 (%),鮑曼不動桿菌（854株）對抗菌藥物的敏感性 (%),嗜麥芽窄食單胞菌（227株）對抗菌藥物的敏感性 (%),三、與臨床溝通

6、中常見問題,1.我們想用的藥物在藥敏試驗中沒有做？ 藥敏試驗是參照美國的CLSI推薦的標準制定的。 細菌全自動分析儀的藥敏組合是固定的。 某些細菌對某類抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏試驗。 試驗的藥物代表一類藥，而不是一種藥。藥物的敏感性可被其他藥物所預(yù)報。,2.為什么有的菌藥敏報告很多種藥物， 有的僅報告幾種藥物？ 藥敏試驗是參照美國的CLSI推薦的標準制定的,我國也按照此標準執(zhí)行。 報告的藥物種類根據(jù)細菌種類的不同而有所不同，如銅綠假單胞菌報告的藥物較多，而嗜麥芽窄食單胞菌報告的藥敏較少。,CLSI藥敏建議,3.是否能將所用的藥都做藥敏試驗? 沒有必要：通過耐藥機制和標志性藥物可以預(yù)測其他

7、抗菌藥物的敏感性 沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標準和解釋標準）,4.培養(yǎng)陽性的患者都需要用抗菌藥物治療嗎？ 不是的 培養(yǎng)陽性感染，可能為污染（血培養(yǎng)），也可能為定植（痰培養(yǎng)） 任何結(jié)果必須結(jié)合臨床情況進行評價（很重要） 感染部位的清創(chuàng)、引流、換藥比使用抗菌藥物更加重要 改善患者全身情況：器官功能支持，糾正酸堿平衡，電解質(zhì)紊亂，低蛋白血癥，高血糖等,5.取的明顯就是膿液標本，為何鑒定報告為無菌生長？ 因為可能膿汁中心的細菌被大量的中性粒細胞吞噬，已經(jīng)死亡。我們盡量取化膿組織與正常組織交界處膿汁，交界處活菌較多，可提高檢出率。 我們做的是有氧培養(yǎng)，膿液可能

8、為厭氧菌感染。,6.選擇藥敏報告敏感的藥物，為什么臨床治療無效？ 體外藥敏試驗只能預(yù)測體內(nèi)治療效果，并不等同； 一般來說，耐藥治療無效； 敏感治療有效。 可能不是真正的致病菌（污染或定植菌） 細菌本身因素（如誘導(dǎo)耐藥，生物被膜） 感染部位與藥代動力學(xué)因素 細菌的MIC，給藥劑量和用藥方式 藥敏試驗藥物中有些藥物單獨使用無效，但可以與其他藥物聯(lián)合用藥 藥物劑型及生物利用度（純品、商品）,7.涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？ 涂片鏡檢是報告所有檢見的細菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。 一些苛氧菌需在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長。,尿道分泌物細胞內(nèi)外吞噬,8.今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？ 取材是否

9、規(guī)范。 痰標本，有時選優(yōu)勢菌做，就可能導(dǎo)致兩次不一樣。,9.明顯稀便，培養(yǎng)結(jié)果為何正常？ 大便普通培養(yǎng)，通常只能鑒定志賀菌、沙門菌感染。 懷疑霍亂時，需開霍亂弧菌培養(yǎng)。 可能病毒感染(輪狀病毒、腸道病毒)。,四、臨床微生物標本的采集及運送,（一）規(guī)范采集及運送標本的重要性,我們應(yīng)該追求：“準確的病原學(xué)診斷”“針對性病原學(xué)治療” “有效預(yù)防醫(yī)院感染” 正確的微生物標本采集和運送，是準確的病原學(xué)診斷的前提！,微生物讓人類步步為營，,檢驗誤差發(fā)生率哪個階段最高,？,研究表明，60%以上實驗誤差發(fā)生在分析前，這也是檢驗質(zhì)量管理中最難控制的部分。 因此，獲得準確結(jié)果的重要環(huán)節(jié) 分析前質(zhì)量控制,不合格標本

10、帶來的后果,（二）微生物標本采集原則,及時采集微生物標本作病原學(xué)檢查 在抗菌藥物使用前采集標本 采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作 采樣后立即送檢甚至床旁接種尤其是厭氧培養(yǎng) 棉拭子標本要保持濕潤，宜用運送培養(yǎng)基 標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。 送檢標本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?最有價值的細菌學(xué)檢測項目,血液培養(yǎng) 腦脊液培養(yǎng) 膽汁培養(yǎng) 胸腹水培養(yǎng) 關(guān)節(jié)液 其他無菌體液或分泌液,標本的采集和選擇的基本要求 1.選擇準確的解剖部位、合適的時間、適當?shù)脑O(shè)備采集標本； 2.采集足夠量的標本，以保證檢測的陽性率； 標本運送的基本要求 1.所有常規(guī)性細菌學(xué)檢驗的標本需在采集后2h內(nèi)送至微生物室，若延遲送檢，應(yīng)放于安

11、全防護盒內(nèi)；腦脊液應(yīng)在15分鐘內(nèi)送到； 2.尿液標本置于2-4冰箱保存不能超過24h； 3.疑似苛養(yǎng)菌感染的標本立即保溫送檢。,（三）各類臨床微生物標本的采集,1.血培養(yǎng)標本的采集,血培養(yǎng)是進行血流感診斷的最佳手段,“只有在發(fā)熱時，才需要進行血培養(yǎng)?！?關(guān)于血培養(yǎng)指征,想采就采,？,血培養(yǎng)的指征,臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者有： 不明原因的發(fā)熱( 38)或體溫過低( 36) 白細胞增多（ 10109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細胞增多） 粒細胞減少（ 成熟的多核白細胞1109/L ） 休克，寒顫，多器官衰竭 嚴重的局部感染(腦膜炎，心內(nèi)膜炎，肺炎，腎盂腎炎，腹部術(shù)

12、后感染，) ， CRP升高,采集血培養(yǎng)樣本的最佳時間,盡可能在患者寒戰(zhàn)或開始發(fā)熱時采血 在患者接受抗生素治療前采血 如患者已經(jīng)應(yīng)用抗菌藥物進行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng),血培養(yǎng)檢測消毒程序 1.皮膚消毒程序：嚴格執(zhí)行三步法（防止皮膚寄生菌污染）（1）用75%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上；（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達3cm以上； （3）最后用75%酒精脫碘，待酒精揮發(fā)干燥后采血。 新生兒及對碘過敏的患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。 2.培養(yǎng)瓶消毒程序：（1）用75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶

13、橡皮塞，作用60秒。（2）用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。,關(guān)于采集血液量,采血量是影響檢出陽性率最關(guān)鍵因素 成人一份標本2個培養(yǎng)瓶（需氧厭氧），每瓶810ml，共20ml；要求至少采兩份標本，即40ml。 兒童一般只需采集需氧瓶，在保證采集血量1總血量下，一般為13ml。 采血量不足時應(yīng)優(yōu)先保證需氧瓶，因臨床90以上的感染為需氧菌或兼性需氧菌感染。,2. 下呼吸道（痰培養(yǎng)）標本采集,病原體種類繁多而復(fù)雜 使下呼吸道感染病原診斷成為難題,細菌（包括放線菌與奴卡菌，厭氧菌與分枝桿菌） 真菌（包括肺孢子菌） 病毒 支原體、衣原體與立克次體 原蟲 寄生蟲,咳痰途經(jīng)口咽部,

14、唾液中口咽部定植菌的濃度可達108-109/ml。 研究顯示，國內(nèi)常規(guī)痰標本中約半數(shù)存在唾液嚴重污染現(xiàn)象。,不可避免地受到污染,采集指征,凡是發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，并伴有胸痛、氣急，肺部聞及濕羅音，外周白細胞總數(shù)及中性粒細胞比例明顯增高，X線檢查提示肺部有炎性浸潤或胸腔積液，甚至出現(xiàn)感染性休克和呼吸衰竭等患者，應(yīng)采集痰液或下呼吸道標本。 對可疑烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗標本時必須注意生物安全防護。,我國痰培養(yǎng)現(xiàn)狀,標本送檢率低 苛養(yǎng)菌檢出率極低 結(jié)果重復(fù)性差 報告速度慢 感染菌與污染菌不易區(qū)分 藥敏結(jié)果與治療反應(yīng)存在差距,標本采集方法,（1）

15、自然咳痰法 以晨痰為佳。用清水反復(fù)漱口，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無菌容器中，盡快送檢。否則有的細菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。 （2）小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子深入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部和氣管分泌物，粘在棉拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。 （3）支氣管鏡采集法 -經(jīng)支氣管鏡直接吸引 -支氣管肺泡灌洗 -防污染樣本毛刷,醫(yī)師或護士直視下采集標本 病人先漱口，去除表面的菌群 教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液 臨床上約半數(shù)咳痰標本不合格！,合格標本的判斷標準 外觀：觀察顏色、粘度、有無血絲或膿。若標本為水狀且很明顯

16、是唾液，則應(yīng)拒收。 為了判定是否來自下呼吸道的痰，需檢查是否為合格的痰標本。一般認為來自下呼吸道的合格標本應(yīng)該是含膿細胞和支氣管柱狀上皮細胞較多，而受唾液污染的來自于頰黏膜的扁平上皮細胞較少，其判定標準如下表：,A、B級的痰標本適合進行培養(yǎng)； C、D級的標本須高倍鏡鏡下觀察區(qū)分，根據(jù)視野內(nèi)的白細胞或纖毛柱狀上皮細胞的數(shù)量，以及細菌的種類及分布等結(jié)果進行判定； E級為不合格標本。,合格痰液標本,不合格痰液標本,3.尿培養(yǎng)標本采集規(guī)范,正常人尿液是無菌的，而尿液細菌培養(yǎng)最大的問題是雜菌污染。正常人外尿道有大腸桿菌、葡萄球菌等存在。而這些細菌又是尿路感染中常見的病原菌。因此要作好尿液細菌學(xué)檢查，首先

17、應(yīng)注意標本收集問題。 尿液經(jīng)尿道排出時會受到尿道內(nèi)正常菌群的污染,但定量培養(yǎng)時計數(shù)不會超過103CFU /m l, 泌尿系感染時定量培養(yǎng)在104105CFU /m l 。 另外,由于絕大多數(shù)的泌尿系感染是由腸桿菌科細菌引起,而此類細菌的硝酸鹽還原實驗為陽性,故可參考尿檢查常規(guī)中的硝酸鹽還原實驗來推斷是否有細菌感染。,送檢指征 有典型的尿路感染癥狀； 有肉眼膿尿或血尿； 尿常規(guī)檢查白細胞或亞硝酸鹽陽性； 有不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀； 留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱； 膀胱排空功能受損； 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前； 有尿路感染癥狀者，前次培養(yǎng)結(jié)果陰性或抗菌治療48h后仍持續(xù)發(fā)熱。 抗生素停藥后，感染癥狀

18、再次出現(xiàn)。,尿培養(yǎng)標本采集方法 標本采集應(yīng)在使用抗生素之前，避免消毒劑污染標本。 清潔中段尿 留取清晨清潔中段尿標本，先用肥皂水仔細清洗會陰部，再用清水沖洗尿道口周圍；將前段尿排去，留取中段尿10ml左右于無菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡單、易行，是最常用的尿標本收集方法，但是容易受到會陰部細菌污染。 恥骨上膀胱穿刺 使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評估膀胱內(nèi)細菌感染的“金標準”方法，主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標本困難的嬰兒尿標本的采集。,直接導(dǎo)尿 按常規(guī)方法對會陰局部進行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標本污染，準確地反映膀胱感

19、染情況。但有可能下尿道細菌進入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。 小兒收集包 無自控能力的小兒可用收集包收集尿液，這種裝置由于很難避免會陰部菌群污染產(chǎn)生假陽性，所以只有在檢驗結(jié)果為陰性時才有意義。如果檢驗結(jié)果為陽性，應(yīng)結(jié)合臨床進行分析，必要時可使用膀胱上穿刺或?qū)蚍羧吮具M行復(fù)檢。 留置導(dǎo)尿管收集尿液 用導(dǎo)尿管導(dǎo)取10-15ml尿液置滅菌容器內(nèi)送檢。長期留置導(dǎo)尿管者，應(yīng)在更換新導(dǎo)尿管后留取尿標本。留置導(dǎo)尿患者應(yīng)消毒導(dǎo)尿管外部及尿管口，采取無菌操作方法，用注射器通過導(dǎo)尿管吸取尿液。注意防止混入消毒劑，不能從尿液收集袋中采集尿液。,注意事項 由于自然排尿收集的標本很難避免會陰部及下尿道細菌污染

20、，所以需要定量接種、合理評價才能判斷培養(yǎng)的細菌是否與尿路感染有關(guān)。尿標本菌落計數(shù)中革蘭陰性桿菌數(shù)105CFU/ml 或革蘭陽性球菌數(shù)104CFU/ml時有臨床診斷意義。 （不是絕對的，受多因素影響，綜合判斷） 尿液標本的采集和培養(yǎng)中的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴格進行無菌操作。 尿標本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑。,除非是流行病學(xué)調(diào)查，長期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒有臨床意義，大量病原菌?？稍谶@類患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時間延長易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長； 不可從集尿袋的下端管口留取標本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會引起污染； 臨床常讓患者留取清潔

21、中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的留取清潔中段尿； 由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段尿，實驗室只是針對尿液標本培養(yǎng)的結(jié)果進行評估，或常常由于分析前尿液標本污染了多種細菌無法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療。,4.大便培養(yǎng)標本采集規(guī)范,采集時間 腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。 采集方法 自然排便采集法 自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g ，液狀糞便取絮狀物盛于無菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。 直腸拭子采集法 對不易獲得糞便或排便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子法采集標本，其方法是將拭子前

22、端用甘油濕潤。然后插入肛門約45cm（幼兒約23cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出，盛入無菌試管或保存液中送檢。,實驗室檢查,腸道細菌大多為革蘭陰性桿菌，且因糞便標本中有各種正常菌群，形態(tài)上區(qū)分困難，因此一般不做直接涂片檢查。 只有當臨床懷疑腸道菌群失調(diào)或檢查霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、疑似葡萄球菌或難辯梭菌引起的偽膜性腸炎以及真菌性腹瀉時，才做直接涂片檢查。 疑似葡萄球菌引起的抗菌素相關(guān)性腸炎，可取水樣便或腸黏膜樣物涂片，革蘭染色后鏡檢，見革蘭陰性桿菌明顯減少，革蘭陽性球菌大量散在或成堆（葡萄狀）排列，可提示腸道菌群失調(diào)。,注意事項,在腹瀉發(fā)病的正確時間收集標本，病人應(yīng)盡量在急性

23、期（3d）內(nèi)和用藥前采集標本，以提高檢出率。 大便標本中含有很多雜菌，糞便標本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無菌容器。 為提高陽性檢出率，要采集新鮮標本，立即送檢。,5、 穿刺液標本采集規(guī)范,穿刺液主要包括:,腦脊液 膽汁 胸水 腹水 心包液 關(guān)節(jié)液 鞘膜液 在正常人體中，上述體液均是無菌的。有感染的情況下檢出的細菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時給予正確的治療，使病人早日恢復(fù)健康。,送檢指征,腦脊液： 癥狀指征：發(fā)熱等感染性全身癥狀、顱內(nèi)壓升高、腦膜刺激癥狀、神經(jīng)麻痹癥狀、腦脊液常規(guī)及生化變化；懷疑腦膜炎時。 胸水： 多伴有胸痛、發(fā)熱、胸腔積液；疑似胸膜炎、胸腔積水； 腹水： 有積液

24、伴腹痛、嘔吐、肌緊張、腸鳴音弱或消失等。疑似原發(fā)或繼發(fā)性腹膜炎； 膽汁： 腹痛、黃疸、右上腹壓痛、肌緊張、膽囊區(qū)深吸氣時有觸痛；疑似膽石癥、膽囊炎、肝膽系統(tǒng)感染等。 心包液： 發(fā)冷、發(fā)熱、心悸、出汗、乏力及精神癥狀；心前區(qū)疼痛、心包摩擦音、心音明顯減弱、心電圖改變等。疑似心包炎； 關(guān)節(jié)液： 關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)周圍肌肉發(fā)生保護性痙攣；疑似化膿性關(guān)節(jié)炎。,腦脊液,采集時間： 懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標本。 采集方法： 用腰穿方法采集腦脊液35ml，分裝到3個無菌試管中，每個試管12ml。第一管用于細菌培養(yǎng)! 也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。 標本運

25、送和保存： 腦膜炎奈瑟菌離體后會迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會影響檢出率。 腦脊液標本送檢的理想時間為15分鐘內(nèi)，半小時送檢是可接受的，如果送檢時間超過1小時，則會影響結(jié)果。 如不能及時送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時，請勿使用血培養(yǎng)瓶）。 由于培養(yǎng)瓶中含有的聚茴香胺硫酸鈉（SPS）對腦膜炎奈瑟菌有毒性。,新型隱球菌墨汁負染色 左圖：低倍鏡；右圖：高倍鏡,膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、 關(guān)節(jié)液及鞘膜液等） 采集時間 懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。 采集方法 無菌操作穿刺抽取標本或外科手術(shù)采集標本。 標本采集量應(yīng)1ml。 胸腔積液、腹水可抽取10ml, 心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取25ml 。 標本采集后注入無菌小瓶或無菌試管中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶，用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。 為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無菌試管中預(yù)先加入滅菌肝素，再注入穿刺液。,6、 化膿和創(chuàng)傷標本的采集,組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來源可分為兩類： 內(nèi)源性：感染源是炎癥