1、藥品無(wú)菌檢查及相關(guān)知識(shí)，吉林省藥品檢驗(yàn)所微生物室，1，學(xué)習(xí)交流PPT，主要內(nèi)容，1，藥品無(wú)菌檢查法基礎(chǔ)2，2015年版藥典無(wú)菌檢查法變動(dòng)3，清潔實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制4，菌種管理5，2級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室，2，學(xué)習(xí)交流PPT定義及特性培養(yǎng)基如果試驗(yàn)品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，只是表明試驗(yàn)品在此檢查條件下沒(méi)有發(fā)現(xiàn)微生物污染。(莎士比亞、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物)但這并不意味著所有產(chǎn)品都是無(wú)菌的。相反，如果在供應(yīng)品中檢測(cè)到微生物污染，則可以認(rèn)為批產(chǎn)品中微生物污染的危險(xiǎn)相當(dāng)高。4，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，無(wú)菌制劑有比非無(wú)菌制劑更高的危險(xiǎn)。一系列藥品不良事

2、件2006年“欣弗事件”安徽花園生產(chǎn)的“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”導(dǎo)致11人死亡，93人感染，企業(yè)倒閉，老板自殺。根據(jù)批準(zhǔn)的工藝參數(shù)，未滅菌，降低滅菌溫度，縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜的裝載量，影響滅菌效果，經(jīng)重劍檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無(wú)菌不合格。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2012年10月，美國(guó)新英格蘭合成制藥中心生產(chǎn)的注射用類(lèi)固醇真菌污染導(dǎo)致數(shù)百人感染了真菌腦炎，截止年底，39人死亡。這些事故促進(jìn)了無(wú)菌制GMP監(jiān)督的進(jìn)步，同時(shí)對(duì)無(wú)菌檢查提出了更高、更嚴(yán)格的要求。5，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，特性無(wú)菌檢查結(jié)論一次性，藥典規(guī)定不能復(fù)試，為什么不能復(fù)試，菌落的分布不均勻，檢查過(guò)程具有破壞性，沒(méi)有重復(fù)性。-對(duì)生產(chǎn)流程的要求很

3、高。過(guò)程控制- 1，環(huán)境控制；2、運(yùn)營(yíng)影響、人力、物流引進(jìn)外源污染嗎？6，學(xué)習(xí)交流PPT，無(wú)菌檢查，靈敏度檢查，SOP操作，有效結(jié)果，有效方法，環(huán)境保證，培養(yǎng)基保證，方法驗(yàn)證，過(guò)程控制，結(jié)果判斷，可靠結(jié)論驗(yàn)證合格是什么？保存條件：2-25，避光，未密封容器在3周內(nèi)使用，密封容器一般在1年內(nèi)使用。柳乙醇酸鹽液體：在試驗(yàn)品接種前，培養(yǎng)基氧化層不超過(guò)深度的1/5，否則只能加熱一次(20分鐘以下)，直到100水浴消失粉色，培養(yǎng)結(jié)束后氧化層不超過(guò)1/2，8，AC PPT，無(wú)菌檢查法，9，9，9 如果黑曲-加菌的培養(yǎng)機(jī)構(gòu)都長(zhǎng)得很好，該培養(yǎng)基的靈敏度符合規(guī)定，10，學(xué)習(xí)交流PPT，藥物無(wú)菌檢查法，清洗液0.

4、1%蛋白質(zhì)水溶液pH7.0氯化鈉-蛋白質(zhì)緩沖液可以進(jìn)行其他經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滴定溶液，11，學(xué)習(xí)交流PPT，藥物無(wú)菌檢查法，方法適用性實(shí)驗(yàn)，檢查程序或產(chǎn)品變更菌株：金葡、大腸、枯草、生孢子、白念、黑曲法：1、薄膜過(guò)濾法：2、直接接種、12、交流PPT、藥品無(wú)菌檢查法、薄膜過(guò)濾實(shí)驗(yàn)組把培養(yǎng)基放在過(guò)濾器里。對(duì)照組：用另一個(gè)裝有相同體積培養(yǎng)基的容器添加等量的實(shí)驗(yàn)菌，不得超過(guò)5天。13，學(xué)習(xí)交流PPT，14，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，直接接種法，乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(15ml)6以下)6管，分別放金葡，大腸，生孢子角2管，結(jié)果判斷：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)菌效果良好在任何含有試驗(yàn)品的容器中，如果實(shí)驗(yàn)菌微

5、弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則供應(yīng)試驗(yàn)品的這種檢查量在此檢查條件下起到抑制作用，增加洗滌量、培養(yǎng)基使用量、中和劑或消化劑、更換膜品種，恢復(fù)方法的適用性實(shí)驗(yàn)。15，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，試驗(yàn)品無(wú)菌檢查數(shù)：一次試驗(yàn)用最小包裝容器數(shù)量工廠產(chǎn)品為表1，上市產(chǎn)品監(jiān)督檢查按表2最小檢查數(shù)不包括陽(yáng)性對(duì)照用。檢驗(yàn)量：根據(jù)表3采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，只要試樣特性允許，所有容器內(nèi)的所有內(nèi)容物都要過(guò)濾。16，學(xué)習(xí)交流PPT，17，學(xué)習(xí)交流PPT，18，學(xué)習(xí)交流PPT，19，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，1，總清洗量特別大時(shí)要盡量減少流速。20，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，水溶性液體-直接過(guò)濾或混合在含有100毫升以

6、上適當(dāng)稀釋液的無(wú)菌容器中。混合后立即過(guò)濾。例如，如果試用品有細(xì)菌作用，通常要洗三次以上。水溶性的固體-溶解規(guī)定量，適當(dāng)?shù)南♂屢喝芙饣蚋鶕?jù)標(biāo)簽融化。鄭智薰水溶性供應(yīng)品-直接過(guò)濾或乳化后(gatoon 80等)，立即過(guò)濾，用含有0.1-1% toon 80的洗滌劑沖洗，培養(yǎng)基中加入toon 80，可溶于14烷異丙基酯的軟膏和粘性供應(yīng)品。包含藥品的注射器供應(yīng)品注意包裝中的無(wú)菌針的無(wú)菌檢查導(dǎo)管的醫(yī)療機(jī)構(gòu)(輸血、輸液袋等)，每個(gè)最小包裝要用50-100毫升的清洗液沖洗內(nèi)壁，并過(guò)濾清洗液。同時(shí)，要使用直接接種法對(duì)配制的無(wú)菌針進(jìn)行無(wú)菌檢查。21、學(xué)習(xí)交流PPT、藥品無(wú)菌檢查法、2、直接接種法培養(yǎng)基使用情況應(yīng)

7、注意，接種的供應(yīng)品體積不能超過(guò)培養(yǎng)基體積的10%。同時(shí)，乙醇酸鹽每管不到15毫升，TSB不到10毫升，不能用薄膜過(guò)濾器進(jìn)行無(wú)菌檢查。22，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，顯液等非固化水溶液供應(yīng)品提供量，各管培養(yǎng)基中固體供應(yīng)品提供量，各管培養(yǎng)基中直接以相同量接種，或加入適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，或根?jù)標(biāo)簽服用，然后在各管培養(yǎng)基中以相同量接種。非水溶性供應(yīng)品，加入適量乳化劑和稀釋劑，再接種乳化劑，或直接接種于含有乳化劑的培養(yǎng)基，對(duì)試驗(yàn)品進(jìn)行無(wú)菌操作，拆開(kāi)各包裝，在不同部位切割約100mg或1cm*3cm的供應(yīng)品。各管同樣接種到足夠浸泡標(biāo)本的適量培養(yǎng)基上。張璇、縫線(xiàn)等試用品采取最低包裝，無(wú)菌分解包裝接種于各管

8、足夠浸泡試用品的適量培養(yǎng)基。滅菌醫(yī)學(xué)儀器在需要試用品的時(shí)候拆解或切成小塊，每根管子都同樣接種到足夠浸泡試用品的適當(dāng)量的培養(yǎng)基上。放射性藥物提取一個(gè)原型，用7.5毫升的油乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基和TSB同樣接種。每管接種量為0.2毫升。23，學(xué)習(xí)交流PPT，藥物無(wú)菌檢查法，陽(yáng)性控制無(wú)抑制作用和抗革蘭陽(yáng)性菌為主-金葡甘革蘭陰性桿菌為主-大腸桿菌-生孢子素抗真菌-化學(xué)變化？生物變化？培養(yǎng)14日，每天觀察并記錄，與陽(yáng)性，陰性相比較，培養(yǎng)14天后，外觀上仍無(wú)法判斷微生物是否生長(zhǎng)?？梢詫⑦@種培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到同一種新鮮培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3天，觀察是否再次出現(xiàn)混濁。25，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，明顯渾濁在眼睛里-怎

9、么辦？1)立即將2毫升培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到同一培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。2)取5個(gè)冷凍保管管，每管分1毫升混濁培養(yǎng)物，保存-80。3)取渾濁的培養(yǎng)物，在TSA板塊/血池上畫(huà)線(xiàn)，分離受污染的微生物。4)發(fā)現(xiàn)黃乙醇酸鹽液體培養(yǎng)管混濁，應(yīng)增加血小板線(xiàn)，在厭氧條件下分離厭氧菌。從平板電腦中分離出來(lái)的菌落需要進(jìn)一步的感情，并一一保存。26、學(xué)習(xí)交流PPT、藥品無(wú)菌檢查法，結(jié)果判定陽(yáng)性對(duì)照生長(zhǎng)良好，陰性不應(yīng)有細(xì)菌1、無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)中使用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求2、回顧實(shí)驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)可能引起微生物污染的因素3、在試驗(yàn)質(zhì)量管理中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后，確定是無(wú)菌實(shí)驗(yàn)中使用的物品及/或無(wú)菌操作技術(shù)不充分

10、引起的。如果確認(rèn)無(wú)效，則必須重試。27，學(xué)習(xí)交流PPT，藥品無(wú)菌檢查法，標(biāo)準(zhǔn)SOP，材料入場(chǎng)，周邊消毒劑消毒表面，清除包裝，清潔傳遞，風(fēng)浸，紫外線(xiàn)調(diào)查，過(guò)氧化氫滅菌等低水平進(jìn)行，最終到達(dá)A級(jí)核心地區(qū)人員，合理更換衣服。應(yīng)戴上無(wú)菌的、沒(méi)有微塵(如滑石粉)的橡膠或塑料手套，戴上經(jīng)過(guò)消毒或消毒的腳架，將褲腿放入腳踝，袖口放入手套內(nèi)。工作服應(yīng)該是滅菌的連體工作服，可以保留能從身體中散發(fā)的細(xì)微顆粒，而不會(huì)脫落纖維或顆粒。無(wú)菌操作技術(shù)，動(dòng)作熟練，關(guān)鍵控制實(shí)驗(yàn)過(guò)程的監(jiān)控：環(huán)境菌，表面微生物，手微生物，環(huán)境菌鑒定，OOS調(diào)查，跟蹤。28，學(xué)習(xí)交流PPT，2015年版藥典的變化，主要修改點(diǎn)改良馬丁培養(yǎng)基，胰豆肉

11、湯培養(yǎng)器(TSB)無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)條件為“萬(wàn)級(jí)地區(qū)100級(jí)”到“B A”3部藥典的統(tǒng)一，29，交流PPT，學(xué)習(xí)意義1，31，學(xué)習(xí)交流PPT，2015年版藥典的變化，培養(yǎng)條件變化培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)：32，學(xué)習(xí)交流PPT，2015年版藥典的變化，方法適用性實(shí)驗(yàn)：33，學(xué)習(xí)交流PPT，2015年版藥典環(huán)境應(yīng)如何控制，35、學(xué)習(xí)交流PPT、清潔實(shí)驗(yàn)室、清潔房間定義和等級(jí)2版藥典清潔房間要求比較清潔房間微生物監(jiān)測(cè)和控制微生物鑒定隔離器介紹消毒劑選擇和使用幾種空間滅菌方法，36、學(xué)習(xí)交流PPT、清潔實(shí)驗(yàn)室、清潔房間定義和等級(jí)藥品清潔實(shí)驗(yàn)室是指藥品無(wú)菌或微生物檢驗(yàn)用清潔實(shí)驗(yàn)室、隔離系統(tǒng)和其他管理環(huán)境概念是無(wú)菌室(

12、需要準(zhǔn)確命名)，37，學(xué)習(xí)交流PPT，清潔實(shí)驗(yàn)室，潔凈室等級(jí)ISO14644 -按懸浮粒子大小列出的潔凈室等級(jí)(等級(jí)1-9) ISO14698 -潔凈室及相關(guān)控制環(huán)境潔凈室污染控制的各國(guó)規(guī)定是美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FED-sted根據(jù)懸浮粒子含量，規(guī)定空中清潔度的空中清潔度分為每立方英尺空氣允許的最大粒子數(shù)1，10，100，1000，10000，10006個(gè)。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO14644-1:空氣清潔度為9級(jí)，比美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)多3個(gè)。美國(guó)FDA無(wú)菌工藝藥品GMP:A產(chǎn)業(yè)指南：在動(dòng)態(tài)期間，根據(jù)在材料泄漏附近測(cè)量的數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了動(dòng)態(tài)概念，并控制了微生物。100、1000、10000、10000、10000是ISO5、6、7、8美國(guó)藥典1116:根據(jù)美國(guó)聯(lián)邦，靜態(tài)、動(dòng)態(tài)監(jiān)視、粒子在線(xiàn)監(jiān)視姜潮2010年版GMP:是歐盟，39，40，學(xué)習(xí)交流PPT，清潔實(shí)驗(yàn)室，第一次使用的清潔實(shí)驗(yàn)室必須確認(rèn)參數(shù)，包括物理參數(shù)，空氣懸浮粒子，微生物。物理參數(shù)、空氣懸浮粒子、微生物、浮游生物、沉降菌、表面微生物、空氣過(guò)濾器完整性、氣流組織、氣流速度、通風(fēng)次數(shù)、壓差、溫度和相對(duì)濕度、參數(shù)確認(rèn)、標(biāo)準(zhǔn)潔凈室建設(shè)和驗(yàn)收規(guī)范附錄D3高效空氣過(guò)濾器現(xiàn)場(chǎng)掃描泄漏檢測(cè)方法粒子計(jì)數(shù)器100級(jí)清潔