1、2020/7/17，ELISA基礎(chǔ)知識和注意事項，2020/7/17，類別，ELISA的基本原理和相關(guān)概念特別是捕獲法處理ELISA結(jié)果的影響因素ELISA結(jié)果，2020/7/17酶催化劑具有高催化效率，可放大抗原抗體反應(yīng)效應(yīng)，使測定方法易感性高、2020/7/17、ELISA的基本原理、抗原或抗體結(jié)合在體外的固相載體表面后，仍可維持免疫學(xué)活性，并相互特異性結(jié)合。2020/7/17，抗原抗體復(fù)合物與酶催化劑靶二抗結(jié)合，加入合適的基質(zhì)在酶催化劑作用下發(fā)色，顏色濃淡與專一性抗體水平成比例關(guān)系，可以定性和量化分析。2020/7/17、ELISA分類、抗原測定：競爭法(也可用于抗體測定)、雙抗體穿山鼠

2、開關(guān)法。 抗體測定：間接法、捕獲法、雙抗原穿山鼠開關(guān)法、2020/7/17、競爭法elisa、競爭法elisa原理樣品中抗原和一定量的酶催化劑標(biāo)識牌抗原網(wǎng)絡(luò)沖突與固相抗體結(jié)合，樣品中的抗原含量越多，與固相結(jié)合的酶催化劑標(biāo)識牌抗原越少，用于發(fā)色淺的小分子抗原和半抗原的定量時，測定抗體、2020/7/17、2020/7/17、二抗體穿山鼠開關(guān)法、二抗體穿山鼠開關(guān)法ELISA將特異的抗體包裹在固相載體表面，與標(biāo)本中對應(yīng)的抗原結(jié)合，洗滌后添加酶催化劑標(biāo)的第二特異的抗體與抗原結(jié)合，添加基質(zhì)而發(fā)色。 抗原檢測需要至少2個抗原決定分類星空衛(wèi)視、2020/7/17、包裹特異性抗體、2020/7/17、雙抗原穿

3、山鼠開關(guān)法、雙抗原穿山鼠開關(guān)法ELISA檢測標(biāo)本中的總抗體(包括IgM和IgG型抗體)。 將特異性抗原包復(fù)于固相載體表面，與標(biāo)本中的特異性IgM和IgG型抗體結(jié)合，洗滌后加入酶催化劑標(biāo)的特異性抗原與對應(yīng)的抗體結(jié)合，洗滌后基質(zhì)發(fā)色、2020/7/17、2020/7/17、間接法、間接法elisa(innisa ) 加酶催化劑標(biāo)識牌二抗只需對一種免疫球蛋白分子轉(zhuǎn)化包裹抗原，就可通過一種酶催化劑標(biāo)識牌二抗檢測出與各種抗原結(jié)合的抗體，分別為2020/7/17、2020/7/17、捕獲法、ELISA(Capture ELISA ) 將專門用于檢測IgM的抗人IgM抗體包復(fù)在固相載體表面，與標(biāo)本中所有人I

4、gM抗體結(jié)合，洗凈后加入專一性抗原與對應(yīng)的專一性IgM抗體結(jié)合，洗凈后加入酶催化劑靶抗原專一性抗體，洗凈后加入基質(zhì)發(fā)色。 2020/7/17、2020/7/17、區(qū)別理解、抗原檢測？ 是抗體嗎？ 包是什么？ 做什么標(biāo)記？2020/7/17、間接法與捕獲法比較，間接法：假陰性、假陽性捕獲法：酶催化劑標(biāo)識牌抗體要求高，2020/7/17、間接法的假陽性，2020/7/17質(zhì)量控制血清可以是一定值也可以是不定值，可以購買也可以自己配合。 用自各兒配制時要注意選擇無脂肪血的血清和血漿，不能做試劑盒內(nèi)的陽性對照。 以稀釋的血清為質(zhì)量控制血清時，應(yīng)考慮稀釋基質(zhì)成分對結(jié)果的影響。 質(zhì)量控制血清與臨床標(biāo)本不符

5、，應(yīng)注意結(jié)果分析，質(zhì)量控制血清只能用于質(zhì)量控制活動，不能用于標(biāo)定器和評價方法。 用于室內(nèi)質(zhì)量控制的質(zhì)量控制血清一般選擇CUTOFF值的2-3倍的質(zhì)量控制品。 2020/7/17，室內(nèi)質(zhì)量控制：使用質(zhì)量控制，控制實驗室內(nèi)部實驗結(jié)果的可靠性。 室間質(zhì)評價：為做評估各實驗室結(jié)果的可靠性的評價，可分為國家級和地方級的室間質(zhì)評價。 可以理解為“各個實驗室的素質(zhì)測評”。2020/7/17，閾值(CUTOFF值):閾值是判斷陰陽性或臨床意義水平的數(shù)值，閾值的確定是測量大量數(shù)據(jù)并用統(tǒng)計學(xué)方法確定的。 許多試劑提供閾值或閾值的修正方法。 本底：底色。 像ELISA HBsAg一樣，陽性發(fā)色，陰性不發(fā)色，背景是陰

6、性全體發(fā)色的情況。 ELISA抗HBcAb、陽性不顯色、陰性顯色、背景是整個陽性顯色的情況。 2020/7/17，靈敏度：可檢測的分析物的最小量表示檢測下限的能力。 相對靈敏度=真陽性/(真陽性假陰性) 100%測定方法及顯示方法：靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)量控制血清、陽性標(biāo)本稀釋終點、血清搖鏡頭屏及臨床標(biāo)本陽性率。 2020/7/17，專一性：真陰性標(biāo)本檢測能力。 相對專一性=真陰性/(真陰性假陽性) 100%測定及顯示方法：質(zhì)量控制血清、血清盤、臨床標(biāo)本陰性率。2020/7/17、Elisa結(jié)果的影響因素、試劑盒的選擇標(biāo)本樣品和稀釋溫育洗版顯色質(zhì)量控制、2020/7/17、試劑盒的選擇、同行試劑使用情況高級部門對試劑實際使用的綜合評價使用閾值質(zhì)量控制血清進(jìn)行了實際檢驗比較，林敏度和精度高， 為避免選擇溶血，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本需要4，超過1周測定的20個保存盡量不要重復(fù)凍融(少量分注)、2020/7/17、樣品和稀釋，樣品的精準(zhǔn)性(個人因素和實驗條件)盡量排除主要相關(guān)因素的溫育， 溫度水浴箱的硬板應(yīng)浮在水面或水面高于反應(yīng)板，2020/7/17，洗滌版，洗手機(細(xì)孔液體殘留45s )，2020/7/17，顯色，通常為a、b兩種液體的室內(nèi)質(zhì)量控制血清即時法，2