1、課題3簡(jiǎn)述了分解纖維素的微生物的分離，第一，課題目標(biāo)，纖維素的種類和作用，并對(duì)在土壤中分解纖維素的微生物進(jìn)行了分離，討論了這種微生物的應(yīng)用價(jià)值。第二，從課題的重點(diǎn)和難點(diǎn)、土壤中分離分解纖維素的微生物。(1)纖維素分解纖維素生化原理(2)分化選擇培養(yǎng)和鑒別培養(yǎng)概念(3)纖維素粉末培養(yǎng)法和剛果紅染色法原理，3，基礎(chǔ)知識(shí)，(1)纖維素和纖維素酶，1。纖維素的生物圈分布人類使用淀粉作為主要能源，但完全不能消化纖維素，而反芻動(dòng)物和大量微生物主要以纖維素為能源。因?yàn)榉雌c動(dòng)物的瘤胃里生活著很多可以分解纖維素的微生物。纖維素是地球上最豐富的多糖物質(zhì)。植物的根莖葉等器官含有大量纖維素。地球上的植物每年生產(chǎn)的纖維

2、素超過(guò)70億噸。2 .纖維素酶的結(jié)構(gòu)和作用原理，纖維素和淀粉都由葡萄糖構(gòu)成，但構(gòu)成兩者的葡萄糖的連接方式不同，兩種茄子形態(tài)完全不同。纖維素由葡萄糖分子與-1，4糖分結(jié)合而成，淀粉由葡萄糖分子與-1，4糖分結(jié)合而成。(b)纖維素細(xì)菌的篩選，剛果紅染色法；4、實(shí)驗(yàn)案例，土壤中纖維素分解菌的分離，實(shí)驗(yàn)的具體操作程序如下。1土壤樣品采集應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境。因?yàn)樵诶w維素含量豐富的環(huán)境中，會(huì)聚集很多分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環(huán)境，濾紙可以埋在土壤里，大約一個(gè)月后，能分解纖維素的微生物就會(huì)生長(zhǎng)。2.有250毫升錐蟲病、無(wú)菌清瓶、藥水器、1毫升、10毫升的移液管、天平、搖床、溫度計(jì)等?；照碌臏?zhǔn)備

3、參照教科書旁邊列中的比例的搭配。在250毫升錐形瓶里放入30毫升培養(yǎng)基，用8層紗布做成瓶塞，緊緊堵住瓶口，在瓶塞外面包兩層包裝紙(或報(bào)紙)，用繩子捆起來(lái)，在121里放入高壓蒸汽滅菌20毫升。選擇培養(yǎng)的工作：被稱為土壤樣本20 g，在無(wú)菌狀態(tài)下放入裝有30毫升培養(yǎng)基的搖瓶。把搖瓶放在搖床上，從30振動(dòng)培養(yǎng)12 d，直到培養(yǎng)基混濁。此時(shí)可以吸收0.1毫升培養(yǎng)液，進(jìn)行漸變稀釋和涂布?；蛘?，可以按照教科書中的說(shuō)明重復(fù)一次選擇培養(yǎng)步驟，然后進(jìn)行漸變稀釋和涂布。3 .用剛果紅染色法分離纖維素分解菌所需的儀器包括無(wú)菌Petri盤子、涂布機(jī)、1 mL流動(dòng)管、包含9mL無(wú)菌水的20 mL試管、溫箱等。培養(yǎng)基的制

4、備，見教材旁邊欄中的比例搭配。在500毫升三角瓶中放入200毫升培養(yǎng)基，在121下放入高壓蒸汽滅菌20毫升。逆板操作：滅菌后融化固體培養(yǎng)基，按照無(wú)菌操作的要求，將1520毫升培養(yǎng)基倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿，凝固后使用。準(zhǔn)備菌顯液：根據(jù)本專題課題1的稀釋操作方法，選擇培養(yǎng)的培養(yǎng)基作為等比稀釋，將最大倍數(shù)稀釋到106。涂層板：稀釋度為104106的菌顯液各為0.1毫升，在板培養(yǎng)基中加入鈴鐺，用涂布機(jī)均勻涂上菌液，30倒置培養(yǎng)，使菌落生長(zhǎng)。每個(gè)稀釋度應(yīng)注意涂層3個(gè)板并設(shè)置對(duì)比。有關(guān)剛果紅染色的具體操作程序，請(qǐng)參閱教科書資料3。5，課題成果評(píng)價(jià)，(1)培養(yǎng)基制作是否合格，培養(yǎng)基是否篩選菌落：對(duì)照培養(yǎng)基說(shuō)明培養(yǎng)過(guò)

5、程中菌落不生長(zhǎng)，培養(yǎng)基制作合格。如果觀察產(chǎn)生透明圈的菌落，就能得到分解纖維素的微生物。(b)分離結(jié)果是否一致：土壤中細(xì)菌的數(shù)量比真菌和放線菌的數(shù)量多得多，所以最容易分離的是細(xì)菌。但是，由于采集的土樣的環(huán)境不同，學(xué)生們也可以得到真菌和放線菌等其他分離結(jié)果。，事故考試問(wèn)題，1 .本實(shí)驗(yàn)的過(guò)程和課題2的實(shí)驗(yàn)過(guò)程有什么區(qū)別？答：牙齒實(shí)驗(yàn)課程與作業(yè)2課程的差異如下。課題2是將土制的菌顯液直接涂在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離菌落。本課題通過(guò)選擇培養(yǎng)，增殖纖維素分解菌，然后將菌液涂在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本相同。2 .為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？答：在生物和環(huán)境的相互依賴下

6、，纖維素豐富的環(huán)境中，纖維素降解菌的含量相對(duì)較高，因此在這種土壤樣品中獲得目的微生物的概率比一般環(huán)境高。3 .把濾紙埋在土壤里有什么效果？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋在土壤里多深？答：將濾紙埋在土壤里可以使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工安裝纖維素分解菌的合適環(huán)境。一般來(lái)說(shuō)，紙要埋在約10厘米的腐殖土里。常用的剛果紅染色法有兩種。一是先培養(yǎng)微生物，然后放入剛果紅做顏色反應(yīng)。另一種是在擊倒平板電腦的時(shí)候放入剛果紅。4.牙齒兩種茄子方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么？你打算采取什么方法？方法1是傳統(tǒng)方法，缺點(diǎn)是操作麻煩。加入剛果紅溶液，可以在菌落之間攪拌。優(yōu)點(diǎn)是這樣看起來(lái)的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法2的優(yōu)

7、點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，沒有菌雜的問(wèn)題。纖維素、瓊脂、土豆汁中含有淀粉類物質(zhì)，對(duì)能產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)，這是其缺點(diǎn)。但是只生產(chǎn)淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈比較模糊。因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中纖維素占據(jù)了主要位置，可以區(qū)別纖維素酶產(chǎn)生的透明圈。方法2的另一個(gè)缺點(diǎn)是，部分微生物具有分解色素的能力，在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中，分解剛果紅，形成明顯的透明源，不易與纖維素分解菌區(qū)別。5 .為什么選擇培養(yǎng)“富集”所需的微生物？答：在選擇性培養(yǎng)條件下，能適應(yīng)牙齒營(yíng)養(yǎng)條件的微生物可以快速繁殖，不能適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，起到“富集”的作用。6 .學(xué)完牙齒主題后，能總結(jié)出分離培養(yǎng)微生物的一般方法嗎？請(qǐng)用流程圖表示。將土

8、壤取樣、選擇性培養(yǎng)、梯度稀釋、菌顯液涂在具有特定選擇作用的培養(yǎng)基上，單體章魚選擇、發(fā)酵培養(yǎng)研究人員成功地使用用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽及微量元素配制的培養(yǎng)基，篩選出能有效分解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要階段如圖所示。請(qǐng)分析問(wèn)題的答案： (北京圈)，(1)在培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是為了篩選。牙齒培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。目的菌，選擇，實(shí)例分析，實(shí)例1，(20分鐘)某化工廠的污水池中含有有害且難以分解的有機(jī)化合物A。研究人員成功地使用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽和微量元素配方的培養(yǎng)基，篩選出能有效分解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要階段如圖所示。請(qǐng)分析問(wèn)題的答案： (北京圈)，(2)“目的菌”生長(zhǎng)

9、所需的氮源和碳源來(lái)自培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)估計(jì)需要振動(dòng)培養(yǎng)，“目的菌”的代斯類型如下?；衔顰，異養(yǎng)氧，例1，(20分鐘)某化工廠的污水池中含有有害且難以分解的有機(jī)化合物A。研究人員成功地使用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽和微量元素配方的培養(yǎng)基，篩選出能有效分解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要階段如圖所示。請(qǐng)分析問(wèn)題的答案： (北京圈)，(3)幾天后，要選擇培養(yǎng)瓶化合物A含量的培養(yǎng)液，連接到新的培養(yǎng)液，不斷培養(yǎng)“目的菌”數(shù)。，減少，增加，例1，(20分)某化工廠的下水道中含有有害且難以分解的有機(jī)化合物A。研究人員成功地使用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽和微量元素配方的培養(yǎng)基，篩選出能有效分解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要階段如圖所示。請(qǐng)分析問(wèn)題的答案： (北京圈)，(4)轉(zhuǎn)換為固體培養(yǎng)時(shí)，總是使用方法接種，獲得單株后繼續(xù)篩選。