1、1.噬菌體的基礎(chǔ)生物學(xué)，戴夫霍格蘇，噬菌體的本質(zhì)。噬菌體只感染細(xì)菌。病毒攜帶基因組從一個(gè)敏感的細(xì)菌細(xì)胞到另一個(gè)。核酸基因組編碼蛋白質(zhì)或脂蛋白涂層(或衣殼)。共同構(gòu)成核衣殼每個(gè)噬菌體的靶宿主都是一組特定的細(xì)菌，這些細(xì)菌嚴(yán)格來說是寄生的，攜帶著所有指導(dǎo)復(fù)制的信息，但缺乏能量產(chǎn)生的機(jī)制和地球上最豐富的生命體，90%以上的噬菌體屬于尾部噬菌體，近一半的病毒體是雙鏈DNA，另一半是由蛋白質(zhì)聚集形成的具有二十面體和交叉五聚體的頭部。面部六聚體尾的形態(tài)可分為三個(gè)科：60%屬于長尾噬菌體，25%屬于短尾噬菌體，15%屬于肌尾噬菌體，具有基本的噬菌體形態(tài)，“家庭照片”:噬菌體29和T2。德懷特安德森提供的電子顯

2、微照片。T4噬菌體的數(shù)量表明了基因編碼的每個(gè)結(jié)構(gòu)。生活方式如下：強(qiáng)毒或溫和的傳染性噬菌體可以選擇性地啟動一個(gè)溶源循環(huán)；它不是復(fù)制溶源狀態(tài)，而是高度進(jìn)化的結(jié)果，這需要病毒和宿主的共同進(jìn)化，也許反映了它們在許多方面的優(yōu)勢。溫和噬菌體可以幫助保護(hù)其宿主免受其他噬菌體的感染，并且可以引導(dǎo)具有顯著宿主特征變化的強(qiáng)毒噬菌體。通常，它編碼許多宿主致死蛋白、噬菌體感染過程、吸附：當(dāng)尾絲或尾釘結(jié)合到特定的表面分子或粘多糖殼時(shí)，尾噬菌體的感染開始，并且任何蛋白質(zhì)、寡糖和脂多糖開始。T4樣噬菌體必須將六條長尾絲中的至少三組與初級受體分子結(jié)合，以觸發(fā)尾板成分的重排，然后不可逆地與次級受體結(jié)合。這個(gè)家族的不同成員使用完

3、全不同的初級受體，但是他們似乎都使用庚基作為他們的次級受體。滲透：不可逆吸附后，基因組通過尾部進(jìn)入宿主細(xì)胞，但實(shí)際上不是“注射”。噬菌體尾部具有穿透肽聚糖層的酶機(jī)制，然后接觸或穿透內(nèi)膜，將DNA直接釋放到細(xì)胞中；尾部結(jié)合還會形成一種機(jī)制，阻止衣殼中的脫氧核糖核酸輸出，直到它完全位于潛在的宿主細(xì)胞中。從宿主到噬菌體的定向代謝轉(zhuǎn)化：最初的步驟通常包括噬菌體啟動子對宿主核糖核酸聚合酶的強(qiáng)識別，從而導(dǎo)致早期和早期基因的轉(zhuǎn)錄。這些基因的產(chǎn)物可以保護(hù)噬菌體基因組，重建宿主以滿足噬菌體的需要；它們可以滅活宿主蛋白酶并阻斷限制性內(nèi)切酶，直接終止各種宿主大分子的生物合成，或破壞一些宿主蛋白質(zhì)。一組中期基因通常隨

4、后被轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致新噬菌體DNA的合成，接著是一組編碼噬菌體顆粒組分的晚期基因。對于一些噬菌體，這些轉(zhuǎn)化包括合成新的()因子或DNA結(jié)合蛋白以適應(yīng)宿主的核糖核酸聚合酶；而其他人編碼他們自己的核糖核酸聚合酶。宿主基因的降解和抑制宿主基因的翻譯是其他機(jī)制，可以促進(jìn)細(xì)胞適應(yīng)合成新的噬菌體。形態(tài)發(fā)生：在大多數(shù)噬菌體中，它們的組裝涉及特定骨架蛋白和主要頭部結(jié)構(gòu)蛋白之間的復(fù)雜相互作用，接著是蛋白水解以分裂骨架蛋白和主要頭部結(jié)構(gòu)蛋白的氮末端。在包裝之前和包裝過程中，頭部會膨脹并變得更加穩(wěn)定，同時(shí)適合于脫氧核糖核酸的內(nèi)部體積也會增加。位于頭部的頂點(diǎn)是一個(gè)入口復(fù)合體，它成為頭部組裝的起點(diǎn)、脫氧核糖核酸包裝酶的對接位

5、點(diǎn)、穿過脫氧核糖核酸的管道以及肌尾噬菌體和長尾噬菌體的噬菌體尾(分別組裝)結(jié)合位點(diǎn)。細(xì)胞溶解：這是一種緊急事件，其時(shí)間受到嚴(yán)格控制。如果裂解發(fā)生得太早，很少有新的噬菌體能確保有效地繼續(xù)這一循環(huán)；如果裂解延遲太久，重復(fù)感染和新的爆發(fā)周期的機(jī)會將會喪失。尾部噬菌體使用兩種成分進(jìn)行裂解：賴氨酸，一種能分解肽聚糖基質(zhì)中重要鍵的酶，和holin，一種在膜內(nèi)聚集有孔的蛋白質(zhì)，它使賴氨酸作用于肽聚糖層并在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間促進(jìn)裂解。時(shí)機(jī)受生長條件和遺傳的影響。可以選擇改變裂解時(shí)間的突變。T4感染循環(huán)，二。噬菌體檢測技術(shù)，介紹，噬菌體和宿主細(xì)胞之間的特異性相互作用。一個(gè)自然進(jìn)化的系統(tǒng)具有不同裂解譜的噬菌體，形成噬斑，

6、并區(qū)分物種或?qū)僦g細(xì)菌分離物的感染性差異，如細(xì)胞表面受體、限制性修飾系統(tǒng)、前噬菌體或攜帶質(zhì)粒等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性高，成本低，是目前應(yīng)用最廣泛的菌株鑒定方法。將重組(信號)噬菌體、報(bào)告基因?qū)胧删w生物發(fā)光(lux)基因，用照度計(jì)檢測10個(gè)大腸桿菌/單位熒光素酶信號噬菌體(LRP)，檢測肉和蛋中導(dǎo)入噬菌體的沙門氏菌luxAB基因的結(jié)構(gòu)基因。利用轉(zhuǎn)基因生物檢測底物乙醛擴(kuò)散和單核細(xì)胞增生李斯特氏菌酶的反應(yīng)受到限制，信號基因(如lux、ina或gfp)被引入噬菌體基因組和包裝在噬菌體顆粒中的重組DNA。信號噬菌體與標(biāo)本混合，但只感染敏感的宿主，因此無需在測定前純化生物體。感染后，信號噬菌體的基因組被復(fù)制

7、，信號基因被表達(dá)。一旦積累了足夠的信號蛋白，就可以檢測到表達(dá)的信號基因。噬菌體展示，徹底改變了用親和技術(shù)結(jié)合特殊物質(zhì)分離多肽的歷史?？寺〉男蛄信c噬菌體外殼蛋白一起表達(dá)，嵌入成熟噬菌體顆粒中，并“展示”在成熟病毒顆粒的表面。它應(yīng)用于醫(yī)學(xué)或藥學(xué)，鑒定各種病毒，區(qū)分念珠菌屬物種，并檢測棒狀桿菌孢子。肽庫片段被克隆為與Fd噬菌體基因III(小殼蛋白)或VIII(大殼蛋白)融合的蛋白質(zhì)。如果肽與基因蛋白融合，只有幾個(gè)拷貝的肽會顯示在噬菌體上，但是可以形成沒有互補(bǔ)性的功能性噬菌體。如果肽與基因蛋白融合，必須在宿主細(xì)胞中以反式形式提供野生型GPVIi，以合成含有融合到肽序列中的天然GPVIi和GPVIi的混

8、合物的活性噬菌體顆粒。噬菌體文庫暴露于與支持物相連的靶向配體，未連接的噬菌體被洗掉。結(jié)合的噬菌體被提取并生長成具有所需鍵親和力的足夠數(shù)量的噬菌體。使用更嚴(yán)格的洗脫方法，重復(fù)生物淘析過程，最后分離具有最高結(jié)合親和力的噬菌體。這些是斑塊純化和克隆插入序列分析。雙噬菌體，不利用宿主噬菌體的特異性關(guān)系來完成檢測項(xiàng)目。對目標(biāo)分子特異的抗體共價(jià)連接到兩種不同的轉(zhuǎn)化噬菌體的表面。在這種檢測中，使用了兩種轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體，它們可以將兩種抗生素的耐藥基因轉(zhuǎn)導(dǎo)到一個(gè)宿主細(xì)胞中。針對目標(biāo)抗原的抗體與轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體化學(xué)結(jié)合；如果使用針對靶抗原不同決定簇的抗體，這種檢測方法的特異性可以提高。這種抗體標(biāo)記的噬菌體與靶抗原混合并允許

9、結(jié)合。樣本與宿主細(xì)胞以適當(dāng)?shù)南♂尡壤旌?，這確保了宿主細(xì)胞的隨機(jī)共感染是罕見的事件。將感染的宿主細(xì)胞在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上鋪展，從而選擇已經(jīng)被雙重轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞。只有當(dāng)噬菌體與相同的抗原顆粒結(jié)合并緊密聚集時(shí)才會出現(xiàn)這種情況(瓊脂平板上的菌落代表陽性結(jié)果)。噬菌體擴(kuò)增檢測不使用任何修飾的噬菌體，檢測終點(diǎn)是形成的噬斑。一個(gè)新的檢測測試可以很快建立。為了應(yīng)對新的困難細(xì)菌的出現(xiàn)，用目標(biāo)病原菌感染的噬菌體可以逐漸形成噬斑，從而提供擴(kuò)大信號的結(jié)果。這種檢測方法需要未修飾的噬菌體。目標(biāo)細(xì)菌的噬菌體與標(biāo)本混合，允許感染易感細(xì)胞。一旦噬菌體進(jìn)入隱藏階段，添加殺病毒劑，但目標(biāo)細(xì)菌不受影響。沒有感染細(xì)胞的外部噬菌體

10、被殺死，只有存活的活性噬菌體是那些成功感染宿主細(xì)胞的噬菌體。然后中和殺病毒劑，將含有感染細(xì)胞的標(biāo)本與支持噬菌體復(fù)制的輔助細(xì)胞混合(它們不一定與目標(biāo)細(xì)菌相同)。將該混合物接種在瓊脂平板上，并培養(yǎng)形成細(xì)菌苔蘚。感染細(xì)胞中的噬菌體完成其復(fù)制周期，裂解宿主細(xì)胞，其后代感染細(xì)菌苔蘚上的輔助細(xì)胞，導(dǎo)致斑塊的形成。3.食品安全和噬菌體技術(shù)、人類健康和公共健康正面臨挑戰(zhàn)。世衛(wèi)組織1996年的報(bào)告指出，我們正處于全球傳染病危機(jī)的邊緣，任何國家都不能幸免，任何國家都不能承擔(dān)忽視這一威脅的后果。世界衛(wèi)生組織2000年“世界衛(wèi)生組織全球沙門氏菌監(jiān)測”規(guī)劃世界衛(wèi)生組織2001年“世界衛(wèi)生組織全球食品安全戰(zhàn)略”，噬菌體技

11、術(shù)全面應(yīng)用于控制食源性細(xì)菌性疾病，從農(nóng)場到餐桌的食物鏈；監(jiān)測是控制的基礎(chǔ)，預(yù)防和消毒是手段。減少抗生素積累和耐藥性傳播的重要目標(biāo)；噬菌體在食物鏈中發(fā)揮作用。沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，裂解，擴(kuò)增，預(yù)防和治療，食品滅菌，國家標(biāo)準(zhǔn)，1CFU國家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用推廣，應(yīng)用研究，技術(shù)路線，表1。噬菌體診斷試劑國內(nèi)外同類技術(shù)參數(shù)/技術(shù)類型的比較。噬菌體裂解法、噬菌體擴(kuò)增法、生化法、血清學(xué)法、自動分析儀法等，采用沙門氏菌、沙門氏菌等47種物品，組血清和物品大多由志賀氏菌、志賀氏菌等復(fù)雜但準(zhǔn)確的亞組血清進(jìn)行分析，但一些大腸桿菌、大腸桿菌等經(jīng)典方法有重要的生化交叉項(xiàng)，屬外金黃色葡萄球菌和種，這些不

12、能放入機(jī)器中，如氰化鉀試驗(yàn)。純文化需要檢查。需要在純培養(yǎng)后6小時(shí)、6小時(shí)、3-4天、3-4天和24-48小時(shí)進(jìn)行檢查。誤診和誤判率極低，0.05%，0.05-0.5%，極低，高，高。你能認(rèn)出這個(gè)屬嗎？可測試條件一般條件一般條件復(fù)雜的一般條件設(shè)備試劑昂貴的例行程序可能或可能不能大量測試可能或可能不能省略補(bǔ)救五個(gè)生化五個(gè)或更多生化不需要使用噬菌體使用歷史超過20年國外3-4年長期近6-7年實(shí)用新技術(shù)。通用、有限、廉價(jià)、高1元/標(biāo)本高度(與以前相同)、高、低、本地化程度、高、高、高、不高。國家標(biāo)準(zhǔn)是一項(xiàng)新技術(shù)嗎？表2 .噬菌體殺菌技術(shù)參數(shù)/技術(shù)種噬菌體化學(xué)殺菌劑(或抗生素)動物沙門氏菌處理特異性鑒定

13、特異性鑒定無選擇性相對廣譜對微生態(tài)影響很小或無影響。耐藥性(耐受性)很小，但未發(fā)現(xiàn)大的化學(xué)毒性。大研發(fā)周期短、短、長。資本投資不多，不多，不多，不多。無論食物鏈的積累有無長的有效半衰期和短的藥物終止指數(shù)增長，使“藥物”在感染部位的自我增殖不能增加分子代謝破壞譜中“全部或無”殺菌濃度的效果。噬菌體足以殺死一種特定的細(xì)菌，而殺死一種特定的細(xì)菌需要許多抗生素分子。在治療的初始階段，有不同的給藥劑量和亞致死劑量。細(xì)菌有機(jī)會表達(dá)耐藥基因并克服耐藥性的能力。噬菌體是可以經(jīng)歷突變的“活”微生物，其中一些可以克服細(xì)菌抗生素的明確和不可改變的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且不能適應(yīng)突變。也就是說，突變噬菌體纖維可以用突變細(xì)菌受體進(jìn)行某種細(xì)菌突變，從而變得過時(shí)。耐藥性很好，或者突變的噬