1、肌糖原的酵解 實驗研討,01 實驗內容,肌肉糜的糖酵解 乳酸的測定 02 結果和分析,03 課后研討題 04 心得與體會,PPT主要內容提要：,實驗內容肌肉糜的糖酵解,（1）取4支試管編號，加入新鮮肌肉糜0.5g。1、2管為樣品管，3、4管為對照管。向3、4對照管內加入15%的偏磷酸溶液3mL，用玻璃棒將肌肉碎塊打散攪勻，以沉淀蛋白質、終止酶的反應。 （2）4支試管中分別加入3mLpH 7.4的磷酸緩沖液和1mL0.5%淀粉，用玻璃棒充分攪勻。再加入1mL/ 管液體石蠟，以隔絕空氣。將4支試管同時放入37 恒溫水浴中保溫1小時。,（3）取出試管，立即向1、2號試管內加入15%偏磷酸液3mL并混

2、勻。將各試管內容物分別過濾，棄去沉淀。 （4）量取每個樣品的濾液4mL,分別加入已編號的試管中，然后每管內加入飽和的硫酸銅液1mL，混勻，再加入0.4g氫氧化鈣粉末，用玻璃棒充分攪勻，放置30min，并不時攪動內容物，使糖沉淀完全。將每個樣品分別過濾 ，棄去沉淀。,實驗內容乳酸的測定,（1）取4支潔凈、干燥的試管，編號。各加入濃硫酸1.5mL和3滴對羥基聯苯試劑（每滴大小要一致），混勻后放入冰浴中冷卻。 （2）將每個樣品的濾液0.25mL逐滴加入到已冷卻的上述混合液中，隨加隨搖動冰浴中的試管，注意冷卻（注意加對羥基聯苯和濾液時避免滴到試管壁上） （3）將各試管混合均勻，放入沸騰的水浴中待顯色后

3、即取出，比較和記錄各管溶液的顏色深淺，并加以解釋。,結果和分析,實驗結果： 左一（樣品1）：呈現紫羅蘭色，顏色較淺 左二（樣品2）： 呈現紫羅蘭色，顏色較深 左三（空白1）：呈現深黃色 左四（空白2）：呈現淺黃色,結果分析： 左一（樣品1）：乳酸可以與硫酸共熱便成乙醛，后者再與對羥基聯苯反應生成紫羅蘭色物質,可能因淀粉或蛋白質處理不徹底，影響了其顯色效果。 左二（樣品2）：乳酸可以與硫酸共熱便成乙醛，后者再與對羥基聯苯反應生成紫羅蘭色物質。 左三（空白1）：在加入三氯乙酸后，沒有完全震蕩，肌肉糜中的酶沒有與三氯乙酸完全反應，導致其后加入的淀粉發(fā)生酵解反應，最終生成少量乙醛與顯色液發(fā)生反應；另外

4、在肌肉糜中本身含有糖類，在未加入三氯乙酸之前反映了一部分，生成部分乳酸。 左四（空白2）：分析同上,課后研討題,1.本實驗在37 保溫前不加液體石蠟是否可以？為什么？ 不可以，肌糖原的酵解實驗最后是測量乳酸的含量，而乳酸的產生是在無氧條件下產生的。糖酵解是糖原在細胞溶膠中經過一系列酶反應生成丙酮酸，在無氧條件下轉換為乳酸；若有氧存在，丙酮酸會進入線粒體，在酶催化條件下最終生成水和CO2 2.本實驗如何檢驗糖酵解作用？ 糖酵解作用最后由乳酸的生成來觀察，在除去蛋白質和糖后，乳酸和濃硫酸共熱變成乙醛，后者再與對羥基聯苯反應生成紫紅色物質，根據顏色的顯色加以鑒定。,3.在乳酸測定過程中，為什么先要進

5、行冰浴并隨時冷卻？ 濃硫酸接觸有水的試劑后會放出大量熱，冰浴可以吸收濃硫酸放出的熱量。 4.在本實驗中，怎樣做才可以盡可能減小實驗誤差得出理想結果？ 實驗過程中蛋白質和糖對實驗的影響很大，在實驗前要把實驗所用的試管洗干凈，在實驗糖酵解過程中要在無氧條件下進行。,5.闡述分析糖酵解作用在糖代謝過程中的地位及生理意義 理情況下，大多數組織有足夠的氧以供有氧氧化之需，很少進行糖酵解，因此這一代謝途徑供能意義不大，但少數組織，如視網膜、睪丸、腎髓質和紅細胞等組織細胞，即使在有氧條件下，仍需從糖酵解獲得能量。在某些情況下，糖酵解有特殊的生理意義。例如劇烈運動時，能量需求增加，糖分解加速，此時即使呼吸和循

6、環(huán)加快以增加氧的供應量，仍不能滿足體內糖完全氧化所需要的能量，這時肌肉處于相對缺氧狀態(tài)，必須通過糖酵解過程，以補充所需的能量。在劇烈運動后，可見血中乳酸濃度成倍地升高，這是糖酵解加強的結果。又如人們從平原地區(qū)進入高原的初期，由于缺氧，組織細胞也往往通過增強糖酵解獲得能量。在某些病理情況下，如嚴重貧血、大量失血、呼吸障礙、腫瘤組織等，組織細胞也需通過糖酵解來獲取能量。倘若糖酵解過度，可因乳酸產生過多，而導致酸中毒。,5.總結本實驗操作的關鍵環(huán)節(jié)和注意事項。 實驗成功的兩個關鍵步驟： （1）向空白管加入30%三氯乙酸。30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活，這一步一定要保證肌肉糜完全失去活性，以增強最

7、終顯色的比色效果，判定肌肉糜失活的標識是肌肉糜呈慘白色，無血色。 （2）加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末。加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反應體系中的糖和蛋白質，對羥基聯苯反應非常敏感，若體系中含有糖和蛋白質，可能會對以后的顏色鑒別產生影響，因此這步非常關鍵。,注意事項： （1）30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活(即肌肉糜中的蛋白失活)，因此在用30%三氯乙酸處理空白管中的肌肉糜時，一定要充分，直至肌肉變?yōu)閼K白色為止，在處理過程中，可使用玻璃棒不斷攪捻肌肉糜，使其充分接觸三氯乙酸，以使肌肉糜完全失活。 （2）加液體石蠟目的是隔絕空氣，給反應體系創(chuàng)造無氧環(huán)境，加入的石蠟不

8、用太多，剛好把口封住最佳。 （3）37度保溫時間1-1.5h，可通過前期的預實驗確定最佳保溫時間。,（4）在加入飽和CuSO4之前需將肌肉糜挑出。 （5）加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反應體系中的糖和蛋白質，加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末如一定要充分震蕩10min，使CuSO4、 Ca(OH)2和反應體系充分接觸，完全去除多余的糖和蛋白質。 （6）乳糖的測定中，在加入樣品濾液和對羥基聯苯時，一定不要加到壁上，否則會對結果造成干擾。,心得與體會,1.在碾碎肌肉糜時，要注意玻璃棒不要硬捅試管底部，而是擠壓試管壁。 2.空白組加完三氯乙酸后，不要急著加磷酸緩沖液，而是不斷

9、用玻璃棒攪動肌肉糜，使肌肉糜完全失去血色，變?yōu)榘咨珵橹?，即熟肉的顏色一樣，此步驟是本實驗的關鍵所在，要是沒有使空白組中的酶沒有完全失活，則空白組中也會發(fā)生酵解作用，所以會使最后的空白組有顏色。 3.加入淀粉溶液的目的是增加第五濃度，使酵解左右明顯，從而使實驗結果明顯。 4.實驗中加入石蠟的目的是為了產生無氧環(huán)境，從而使酵解左右得以正常進行，否則在有氧條件下會進行有氧呼吸，不產生乳酸。,5.實驗中加入飽和硫酸銅溶液的目的是為了除去糖，加氫氧化鈣的目的是為了讓蛋白質變質，原因是糖類和蛋白質會影響最乳酸的顯色反應，此步驟也是實驗的關鍵，加入這兩樣東西后，一定要充分振蕩，除去糖類和蛋白質的影響。 6.用于檢驗乳酸產物的四只試管必須是干燥潔凈的，否