1、實(shí) 驗(yàn) 八大分子物質(zhì)的水解實(shí)驗(yàn)及糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.證明不同微生物對(duì)各種有機(jī)大分子的水解能力的不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。 2.掌握進(jìn)行微生物大分子水解實(shí)驗(yàn)的原理和方法 3.了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的重要作用 4.掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法,二、實(shí)驗(yàn)原理,微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性，因此使得微生物在自然界的物質(zhì)循環(huán)中起著重要的作用，同時(shí)也為人類開發(fā)利用微生物資源提供更多的機(jī)會(huì)與途徑。人們?cè)谖⑸锏姆诸愯b定工作中，常利用其生理生化反應(yīng)作為重要依據(jù)。 微生物對(duì)大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被

2、微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物，使其能被運(yùn)輸至細(xì)胞內(nèi)。淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測(cè)定不再產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。明膠是由膠原蛋白經(jīng)水解產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在25以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形式存在，有些微生物可產(chǎn)生一種稱作明膠酶的胞外酶，水解這種蛋白質(zhì)，而使明膠液化。 糖發(fā)酵試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓穷愇镔|(zhì)的能力上有很大的差異。不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶，因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同，其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸

3、不產(chǎn)氣。,三、實(shí)驗(yàn)材料,1培養(yǎng)基（每組的量，由班長(zhǎng)分發(fā)） 滅菌培養(yǎng)皿（淀粉水解）：3皿 明膠液化培養(yǎng)基： 4支 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基： 3支 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基： 3支 淀粉培養(yǎng)基： 1瓶/2組 接種用具 接種環(huán)（針），酒精燈，標(biāo)簽紙，試管架 實(shí)驗(yàn)菌種 枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，普通變形桿菌， 金黃色葡萄球菌,四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,1. 淀粉水解試驗(yàn),（1）將固體淀粉培養(yǎng)基溶化后冷卻至50，無菌操作倒平板。 （2）將枯草/大腸分別在不同部分劃線接種（劃十字），并在平板的背面分別記下菌名。 （3）將接完種的平板倒置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。 2. 明膠液化試驗(yàn) （1）取4支明膠培養(yǎng)基試管，用接種針分別以穿刺接

4、種法接種枯草/大腸/金葡,第4支不接種，作為對(duì)照。 （2）接種后置于20恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)2-5d（或37培養(yǎng)，冰浴后觀察結(jié)果）。 3.糖類發(fā)酵試驗(yàn) （1）取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種大腸桿菌和變形桿菌，第3支不接種，作為對(duì)照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣分別接入大腸桿菌和變形桿菌，第3支不接種，作為對(duì)照。接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，防止倒置的小試管進(jìn)入氣泡。 （2）將接種過和作為對(duì)照的6支試管置于37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24h。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn),五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,（1）大分子物質(zhì)水解實(shí)驗(yàn)結(jié)果 將結(jié)果填入下表?！啊?表示陽性，“”表示陰性 注意：觀察結(jié)果時(shí)，可打開皿蓋，滴加碘液于平板上，輕輕旋轉(zhuǎn)，使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，則說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力的強(qiáng)弱，即產(chǎn)生胞外