1、DNA的粗提取與鑒定【課前復習】在實驗前如果先來回顧細胞的結構、DNA存在的部位、染色質的主要成分、滲透作用的原理、生物組織中有機化合物鑒定的方法等知識，既有利于掌握新知識，又便于將新知識納入知識網絡中。溫故會做了，學習新課才能有保障1用蛋白酶對細胞核中能被堿性染料染色的物質進行處理，得到了一些細絲，這些絲狀物可能是A蛋白質BDNACRNAD脫氧核苷酸解析：細胞核中被堿性染料染色的物質應是染色質或染色體，染色質的化學成分為蛋白質和DNA，用蛋白酶處理，因為酶的專一性，只會分解蛋白質而不會對DNA有分解作用，所以保留下來的應該是DNA絲。答案：B2人的紅細胞的壽命較短，這一事實體現了A環(huán)境因素的

2、影響B(tài)功能對壽命的決定C核質相互依存的關系D遺傳因素的作用解析：因為人和哺乳動物成熟的紅細胞沒有核，所以壽命較短，反映了核質之間的相互依存的關系。答案：C3真核細胞是由_、_、_構成，細胞核又包括_、_、_、_（染色體），染色質主要由_組成。答案：細胞膜細胞質細胞核核膜核液核仁染色質DNA和蛋白質4做“生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質的鑒定實驗”時，要根據實驗需要選擇不同的實驗材料。請根據下表所列各種材料回答問題：各種可供實驗的材料梨黃桃胡蘿卜黃豆花生種子小麥種子其中適合于鑒定糖的是_，理由是_，鑒定試劑用_。小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是因為_，你怎樣進行鑒定？_。適合于鑒

3、定蛋白質的是_，理由是_，鑒定所用的試劑是_。解析：用特定的顏色反應來鑒定生物組織中的各成分首先要考慮到取材，選取的材料應是該成分含量相對較多，并且顏色盡量淺淡或無色，以減少對實驗效果的影響；其次要考慮提取的方法；第三要知道鑒定的方法。答案：梨梨的組織細胞顏色為白色，并且糖含量較高斐林試劑小麥種子的脂肪含量不如花生種子高，也不容易做切片用蘇丹或蘇丹試劑鑒定黃豆和花生蛋白質含量高雙縮脲試劑知新先看書，再來做一做填充題：1使溶解在NaCl溶液中的DNA析出的原理是_。2實驗中提取含雜質較少的DNA的原理是_。3實驗中用作鑒定DNA的試劑是_；原理是_。4實驗的方法步驟是：制備雞血細胞液提取_溶解_

4、析出_溶解_析出_用_鑒定DNA。5將實驗各步需加入的物質填入下表中，并回答加入這些物質的目的是什么？方法步驟加入物質目的1制備雞血細胞液2提取雞血細胞的細胞核物質3溶解細胞核中的DNA4析出含DNA的黏稠物5濾取含DNA的黏稠物6將DNA黏稠物再溶解7過濾含DNA的NaCl溶液8提取含有雜質較少的DNA9DNA的鑒定A：（1）（2）（3）B：（1）（2）目的是_。目的是_。目的是_。目的是_。目的是_。目的是_。目的是_。目的是_。目的是_?！緦W習目標】1能夠記住獲得雞血細胞的方法。2能夠解釋說明DNA粗提取與鑒定各階段的實驗原理。3能夠歸納闡述提取雞血細胞核物質的方法、提取含雜質較少的DN

5、A的方法、DNA鑒定的方法。4學會觀察提取出來的DNA物質?！净A知識精講】課文全解：1實驗原理(1)根據DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度變化而改變進行提取。鳥類血液中紅細胞有細胞核，細胞核內DNA與蛋白質結合成染色質。利用DNA在0.14 molL的NaCl溶液中溶解度最低，而蛋白質此時的溶解度高的特點，可以使DNA與蛋白質分離，形成沉淀析出，通過過濾，得到初提取的濾出物DNA。(2)利用DNA不溶于酒精而細胞中的某些物質能溶于酒精進行提純，獲取含雜質較少的DNA。(3)利用DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色進行鑒定。2實驗材料雞血細胞液：先配備10%的檸檬酸鈉溶液，按1

6、80 mL新鮮雞血混合100 mL10%檸檬酸鈉溶液的比例，立即將血液與檸檬酸鈉充分混合，同時用玻璃棒攪拌以免凝血。然后，用離心機以1000轉min的速度離心2 min后，用吸管除去離心管上清液，就可獲得所需的雞血細胞懸液。每組大約需要510 mL雞血細胞懸液。如果無離心機，可將與檸檬酸鈉充分混合的血液置于冰箱內，靜置一天，使血細胞自行沉淀后，也可獲得所需的雞血細胞懸液。但使用離心機效果更好。3試劑與儀器(1)2 mol/L的NaCl溶液：稱取117 g的NaCl，加蒸餾水至1000 mL，使之完全溶解，即可獲得2 mol/L的NaCl，須按此配方配備大量的2 mol/L的NaCl。(2)二苯

7、胺試劑：A液1.5 g二苯胺溶于100 mL冰醋酸中，再加1.5 mL濃硫酸，用棕色瓶保存。B液體積分數為0.2%的乙醛溶液。實驗前，將0.1 mL的B液加入到10 mL的A液中，現用現配。(3)0.015 mol/L的NaCl溶液：稱取0.88 g NaCl加蒸餾水至1000 mL，使之完全溶解。(4)塑料杯和試管：DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和試管可減少提取過程中DNA的損失。4實驗方法與步驟為方便理解和記憶，將方法步驟歸納如下表。實驗內容方法步驟原理一、提取DNA(1)提取細胞核物質：取510 mL雞血細胞懸液注入50 mL燒杯中，加蒸餾水20 mL，同時，用玻璃棒沿一個方向快速充

8、分攪拌，使血細胞過度吸水破裂，細胞核內物質釋放出來，然后用紗布過濾取其濾液于500 mL燒杯中見實驗原理（1）(2)溶解核內的DNA：在濾液中加入2 molL的NaCl40 mL，并用玻璃棒沿一個方向攪拌1 min，核中DNA游離并充分溶解，染色質中的DNA和蛋白質分離(3)析出含DNA黏稠物：沿燒杯內壁緩慢加入蒸餾水，同時用玻璃棒沿一個方向不停地輕輕攪拌。由于溶液濃度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白質溶解度上升，DNA析出成白色絲狀黏稠物，當黏稠物不再增加時，停止加入蒸餾水。（這時溶液中NaCl的物質的量濃度相當于0.14 molL）(4)濾取含DNA黏稠物：用多層紗布過濾，取紗布上DNA

9、的黏稠物二、提純DNA(5)DNA黏稠物再溶解：取含DNA黏稠物于50 mL燒杯內，加入2 mol/L的NaCl溶液20 mL，用玻璃棒沿一個方向不停攪拌3min，使黏稠物盡可能多地溶解(6)過濾含DNA的NaCl溶液：用兩層紗布過濾DNA的NaCl溶液，取其濾液(7)提取含雜質較少的DNA：在濾液中加入冷卻的無水乙醇，并用玻璃棒沿一個方向輕輕攪拌，由于DNA不溶于酒精，會出現乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸去表面的水分實驗原理（2）三、鑒定DNA(8)DNA的鑒定：兩支試管中各加入0.015 mol/L的NaCl溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，攪拌使其充分溶解后，向兩

10、支試管中分別加入4 mL二苯胺試劑，混勻后沸水浴中加熱5 min，待試管冷卻后，比較兩試管的顏色變化，將發(fā)現加入DNA的試管中溶液呈藍色，從而鑒定DNA的存在實驗原理(3)問題全解：9DNA粗提取與鑒定的實驗原理是什么？ 見“課文全解1”。10DNA粗提取與鑒定的實驗中為什么要用雞血而不用其他動物的血？雞紅血細胞有核，DNA含量豐富且易得；再者，雞血細胞很易吸水脹破。而哺乳動物如豬的紅血細胞也易獲得但無核即無DNA。11DNA粗提取與鑒定實驗的方法步驟以及各步驟的目的是什么？方法步驟見“課文全解4”，目的見每一步驟的標題。12DNA粗提取與鑒定的實驗成功的關鍵及注意事項是什么？見“方法點撥3”

11、。【學習方法指導】1做好實驗的前提條件是首先必須理解和掌握實驗原理，明確方法步驟。2要在充分預習的基礎上，運用比較的方法，與以前做過的類似實驗進行對比分析以找出異同點。如提取生物組織中的物質主要用研磨的方法，但本實驗中用的是吸水漲破法；鑒定物質用特定的顏色反應的方法。3實驗中應抓住關鍵并注意以下幾點：(1)制備雞血細胞液時，雞血要在180 mL左右，并且在取新鮮雞血的同時加入抗凝劑，使血液分層，取下層血細胞沉淀。(2)獲取較多DNA的關鍵之一是向雞血細胞液加入足量的蒸餾水，以便使細胞膜和核膜破裂，核內物質釋放出來。(3)實驗中共有3次過濾。過濾時使用的紗布層數與取其濾液或黏稠物有關。第1、3次

12、要收集其濾液，使用的紗布為12層，第2次是要收集其濾出的黏稠物，使用的紗布為多層。 (4)實驗中有6次攪拌，除最后一次攪拌外，前5次攪拌均要朝向一個方向，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，以防止DNA分子斷裂。(5)實驗中有兩次使用蒸餾水。一次在第1步，加水是為了使血細胞吸水膨脹破裂，加水后必須充分攪拌，不應少于5 min，使血細胞充分破裂；第二次加蒸餾水是在第3步，加水是為了稀釋NaCl溶液。(6)實驗中有三次加NaCl溶液。在步驟2中，當加入NaCl后，必須充分晃動燒杯，使二者混合均勻，加速染色質中DNA與蛋白質分離，使DNA充分游離并溶解在

13、NaCl溶液中。在步驟5中，加NaCl溶液也是為了DNA的再溶解，不過這時溶液中蛋白質含量已很少。在步驟8中，加的NaCl溶液的濃度比前兩次低得多，但還是為溶解DNA。(7)在步驟7中，沉淀DNA必須使用冷酒精(至少在5以下存放24 h)，并且將1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果懸浮在溶液中的DNA絲狀物較少，可將混合液放入冰箱中再冷卻幾分鐘。(8)盛放雞血細胞液的容器和實驗中的燒杯和試管最好是塑料制的，因為玻璃制品表面帶電荷，DNA中的磷酸基帶相反的電荷，會被吸附于玻璃表面，減少DNA含量?！局R拓展】實驗原理的補充介紹1DNA的釋放：DNA位于雞血細胞的細胞核中，正常情況

14、下不會釋放出來。為了使DNA從細胞核中釋放出來，實驗中采用了向雞血細胞液中加入蒸餾水并且攪拌的方法。蒸餾水對于雞血細胞來說，是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內，使血細胞破裂。同時，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂)，于是釋放出DNA，當然也有RNA。但是，釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質結合在一起。2將DNA與蛋白質分離：根據二者的特性，即在濃度較高的NaCl溶液(物質的量濃度為2 mol/L)中，核蛋白容易解聚，游離出DNA，而DNA在濃度較高的NaCl溶液中的溶解度很高，Na+與帶負電的DNA結合成DNA鈉鹽。這時DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。3D

15、NA的析出與獲?。豪肈NA在濃度較低的NaCl溶液中溶解度小的原理，向含有DNA的濃度較高的NaCl溶液中加入大量(300 mL)蒸餾水，稀釋NaCl溶液，使DNA的溶解度下降，而蛋白質的溶解度增高(這就是蛋白質的鹽溶現象)，從而使二者分離。這時，加上不停地攪拌，溶解度下降的DNA逐漸呈絲狀物。再通過過濾，濾去蛋白質，就可以獲取DNA的黏稠物了。如果采用離心法則更好。用4000轉/min的旋轉頻率，離心15 min，除去上清液(含有蛋白質)，留下的沉淀物中含DNA。4DNA的再溶解：再用較高濃度的NaCl溶液去溶解DNA黏稠物。5DNA的沉淀和濃縮除去了蛋白質的核酸溶液，必須再進一步沉淀和濃

16、縮。最常用的方法是酒精沉淀法。就是將含有Na+的DNA溶液，加入到相當于其兩倍體積的體積分數為95%冷酒精溶液中，混勻以后可以使DNA沉淀、濃縮，形成含雜質較少的DNA絲狀物，懸浮于溶液中。如果出現的絲狀物較少，可以將此混合液再放入冰箱中冷卻幾分鐘。濃縮后的DNA絲狀物，可以用緩緩旋轉玻璃棒的方法卷起(因為玻璃棒有吸附DNA的作用)?！就竭_綱訓練】1含有DNA的NaCl(0.015 mol/L)溶液中加入二苯胺試劑后，加熱煮沸 5 min，溶液呈A紫色B藍色C磚紅色D紅色2DNA不溶解于ANaCl溶液BKCl溶液CC2H5OH溶液DMgCl2溶液3細胞中提取DNA所用的提取液是ANaCl溶液

17、B酒精C二苯胺D檸檬酸鈉4在實驗中，有兩次DNA的沉淀析出，其依據的原理是DNA在NaCl的物質的量濃度為0.14 mol/L時溶解度最低DNA在冷卻的體積分數為95%的酒精中能沉淀析出A兩次都是B兩次都是C第一次是，第二次是D第一次是，第二次是5向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是A加快溶解DNA的速度B加快溶解雜質的速度C減少DNA的溶解度，加快DNA析出D減少雜質的溶解度，加快雜質的析出6對三次過濾的敘述中，不正確的是A第一次過濾后，核物質存在于濾出的固體物中B第二次過濾后，使用多層紗布，DNA存在于紗布上的黏稠物中C第三次過濾后，DNA存在于濾液中，可進一步除去非DNA

18、物質D上述B、C均正確7DNA在NaCl溶液中的溶解度有二重性，隨著NaCl溶液濃度的變化而變化。(1)請在下列濃度的NaCl溶液中，選出能使DNA析出最徹底的一種和溶解度最高的一種A0.14 mol/LB2 mol/LC0.15 mol/LD0.3 mol/L(2)欲使溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，需降低NaCl溶液的濃度，最有效的方法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水(3) DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以_，可以推測溶于酒精的物質中可能有_。(4) 利用DNA遇_呈藍色的特性，將該物質作為鑒定DNA的試劑。其實

19、驗過程要點是向放有_的試管中加入4 mL的_?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜赺5 min，待試管_，觀察試管中溶液顏色的變化。這個實驗也說明DNA耐_溫，前次溫度有利于_，后次溫度則有利于DNA_。8粗提取DNA的原理是_，純化粗提取DNA的原理是_。9在此實驗中，具有和蛋白水解酶相似作用的物質是A蒸餾水BNaCl溶液CNaOH溶液D鹽酸10關于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經過了多次實驗效果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因是什么?(1)雞血細胞中紅細胞_，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中_細胞數目較多，可以提供豐富的_。(2)實驗前由老師制備血細胞液供同學們做實驗材料，而不用雞全血，主要

20、原因是_。(3)生活在牧區(qū)的人們，采集牛、羊和馬血比較方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟后，結果是_，這是因為這些動物和人類一樣，_。11該實驗中有六次用玻璃棒攪拌。第一次攪拌加蒸餾水的雞血細胞懸液是為了_；第二次攪拌加2 mol/L的NaCl溶液的濾液是為了使其與DNA_；第三次攪拌加蒸餾水至0.14 mol/L NaCl溶液是為了_；第四次攪拌放入紗布上的黏稠物的2 mol/L的 NaCl溶液是為了_；第五次攪拌體積分數為95%的酒精為了_；第六次攪拌放入絲狀物的0.015 mol/L的NaCl溶液是為了使_。參考答案1B2C3A4解析：第一次是利用DNA、蛋白質在0.14 mol/L的Na