ICS

G

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB29695—2013

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定

高效液相色譜法

DeterminationofAvermectinandIvermectinresiduesinaquaticproductsby

HighPerformanceLiquidChromatographicmethod

（電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)）

2013-09-16發(fā)布2014-01-01實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部

中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會

發(fā)布

I

目目次次

目次.........................................................................I

前言........................................................................II

水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定高效液相色譜法.........................１

1范圍.......................................................................１

2規(guī)范性引用文件.............................................................１

3原理.......................................................................１

4試劑與材料.................................................................１

5儀器.......................................................................２

6試料的制備與保存...........................................................２

6.1試料的制備.................................................................２

6.2試料的保存.................................................................３

7測定步驟...................................................................３

7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備.............................................................３

7.2提取.......................................................................３

7.2凈化.......................................................................３

7.3衍生化...................................................................３

7.4測定.....................................................................３

7.5空白實驗.................................................................４

8結(jié)果計算...................................................................４

9方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度...............................................５

9.1靈敏度.....................................................................５

9.2準(zhǔn)確度.....................................................................５

9.3精密度...................................................................５

附錄A........................................................................６

II

前前言言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。

１

水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測定

高效液相色譜法

1范圍范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素殘留量的制樣和高效液相色譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚的可食性組織中阿維菌素和伊維菌素殘留量的檢測。

2規(guī)范性引用文件規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方

研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T1.1-2000標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3原理原理

試料中殘留的阿維菌素和伊維菌素，用乙腈提取，正己烷除脂，堿性氧化鋁柱凈化，N-甲基咪唑

和三氟乙酸酐衍生化，高效液相色譜-熒光法測定，外標(biāo)法定量。

4試劑試劑與材料與材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：B1a含量≥94％。伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：B1a含量≥92％。

4.2乙腈：色譜純。

4.3甲醇：色譜純。

4.4正己烷

4.5三氟乙酸酐

4.6N-甲基咪唑

4.7冰乙酸：優(yōu)級純。

4.8無水硫酸鈉：650℃烘4h，干燥器中冷卻備用。

4.9堿性氧化鋁固相萃取柱：1g/3mL，或相當(dāng)者。

4.10衍生化試劑A：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.11衍生化試劑B：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。

２

4.120.4%乙酸溶液：取冰乙酸0.4mL，用水溶解并稀釋至100mL。

4.13100μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取阿維菌素和伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，

于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為100μg/mL的阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)

準(zhǔn)貯備液。-18℃以下保存，有效期6個月。

4.1410μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取100μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)

貯備液10mL，于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10μg/mL阿維菌素和伊維菌素

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。2～8℃保存，有效期3個月。

5儀器儀器

5.1高效液相色譜儀：配熒光檢測器。

5.2分析天平：感量0.00001g。

5.3天平：感量0.01g。

5.4旋渦混合器

5.5超聲波清洗器

5.6離心機

5.7氮吹儀

5.8旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

5.9固相萃取裝置

5.10具塞玻璃離心管：5mL。

5.11無水硫酸鈉柱：玻璃層析柱（φ10mm×150mm，2號砂芯）中裝填5g無水硫酸鈉。

5.12茄形瓶：50mL。

5.13具塞聚丙烯離心管：50mL。

5.14濾膜：0.45μm。

6試料的制備與保存試料的制備與保存

6.1試料的制備

取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。

——取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。

——取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。

——取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。

３

6.2試料的保存

-18℃以下保存。

7測定步驟測定步驟

7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取1μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，用甲醇稀釋，配制成濃度為0.1、0.2、

0.5、1和2μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取0.1mL于5mL離心管中，于45～55℃水浴氮氣吹干，按

衍生化步驟處理。供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪

制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

7.2提取

稱取試料（5±0.05）g，于50mL聚丙烯離心管中，加乙腈15mL，旋渦混合1min，超聲30min，

4000r/min離心5min，取上清液于另一50mL聚丙烯離心管中。殘渣中加入乙腈10mL，重復(fù)提取一

次，合并兩次提取液。在提取液中加正己烷10mL，充分渦旋混合1min，4000r/min離心5min，棄

上層正己烷層。提取液中再加正己烷10mL，重復(fù)提取一次，棄正己烷層，備用。

7.2凈化

取備用液，依次過用乙腈10mL活化的無水硫酸鈉柱和堿性氧化鋁固相萃取柱，收集濾液。待濾

液流至將盡，用乙腈10mL沖洗離心管，轉(zhuǎn)至無水硫酸鈉柱和堿性氧化鋁固相萃取柱，吹干，合并濾

液于茄形瓶中，于40～50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。用乙腈3mL分2次溶解殘余物，并轉(zhuǎn)至5mL具塞玻璃

離心管中，45～55℃水浴氮氣吹干。

7.3衍生化

于上述5mL離心管中加衍生化試劑A100μL，蓋緊塞子，旋渦混合30s，再加衍生化試劑B150

μL，蓋緊塞子，旋渦混合30s，密封避光，室溫下衍生15min，加甲醇750μL，旋渦混合30s，過濾，

供高效液相色譜測定。

7.4測定

7.4.1色譜條件

色譜柱：C18（250mm×4.6mm，粒徑5μm），或相當(dāng)者；

４

流速：1.5mL/min；

進樣量：20μL；

柱溫：35℃；

檢測器：激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長475nm。

洗脫梯度見表1：

表1洗脫梯度表

時間

min

甲醇

%

乙腈

%

0.4%乙酸

%

039556

1339556

1545550

2539556

7.4.2測定法

取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點或多點校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣

溶液中阿維菌素和伊維菌素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液和空

白添加試樣溶液的高效液相色譜圖見附錄A。

7.5空白實驗

除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。

8結(jié)果計算結(jié)果計算

試料中阿維菌素或伊維菌素的殘留量（μg/kg）：按下式計算

m

VC

X

式中：

X――供試試料中相應(yīng)的阿維菌素或伊維菌素殘留量，μg/kg；

C――試樣溶液中相應(yīng)的阿維菌素或伊維菌素的濃度，ng/mL；

V——試樣溶液總體積，mL；

m——供試試料質(zhì)量，g。

注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定后的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

５

9方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

9.1靈敏度

本方法檢測限為2μg/kg，定量限為4μg/kg。

9.2準(zhǔn)確度

本