1、第七章 定量基礎(chǔ),各種積分事件,校正（定量） 校正即是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應(yīng)組分的濃度或含量 當(dāng)檢測器靈敏度針對不同的組分而變化；及檢測器對同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時須做校正 校正方法 *面積百分比法AREA% *峰高百分比法HEIGHT% 歸一化法NORM% 外標(biāo)法ESTD 內(nèi)標(biāo)法ISTD *不是校正方法,面積百分比法AREA% AREA(pk) AREA%=x100% AREA(pk) 假定 檢測器響應(yīng)都相同 所有組分都流出 所有組分都被檢測到 優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn) 無需做校正以上所有的假定 簡單、快速的定量過程需測量所有的組分 進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格所有的面積都必須準(zhǔn)確,校正因子,絕對

2、響應(yīng)時間 RF=含量/面積 校正檢測器響應(yīng) 與組分的含量及其它組分的存在無關(guān),含量 100100 200 面積30002500 4000,歸一化法(NORM) RF(pk) x AREA(pk) NORM%= x100% RF(pk) x AREA(pk) 假定 所有組分都流出 所有組分都被檢測到 優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn) 簡單、快速的定量過程所有組分峰都要流出 進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格需測量所有的組分 必須校正所有的峰,外標(biāo)法（ESTD） 含量面積(pk) x RF(pk) 優(yōu)點(diǎn) 校正檢測器的響應(yīng) 只對欲分析的組分峰做校正 無需所有峰都能被檢測到 缺點(diǎn) 進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確 儀器必須有良好的穩(wěn)定性 需定期做再校正,外標(biāo)法

3、校正過程 首先準(zhǔn)備一個混合標(biāo)樣，其中感興趣組分的濃度須準(zhǔn)確知道 運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品 建立校正表 運(yùn)行待測樣品并使用校正表分析它 需要時進(jìn)行再校正,單級校正 對每一峰只做一次校正 單級校正中做了如下假設(shè)： 響應(yīng)因子不會因?yàn)槟撤鍖?yīng)物質(zhì)的含量變化而發(fā)生變化 響應(yīng)曲線須通過原點(diǎn),多級校正 對每一峰需做至少兩次校正 可以補(bǔ)償檢測器對不同含量的樣品組分而給出非線性響應(yīng)。 響應(yīng)曲線可以不通過原點(diǎn),定量分析,多級校正過程 首先準(zhǔn)備一個混合標(biāo)樣，其濃度應(yīng)高于欲分析物的濃度 將濃標(biāo)樣等梯度稀釋，其中最低濃度低于待測物的濃度 運(yùn)行每一級稀釋好的標(biāo)樣 在每一級上進(jìn)行校正 運(yùn)行待測樣品并使用校正表分析它 需要時進(jìn)行再校正,

4、線性擬合（最小二乘法）,含量,響應(yīng)值 (A或H),點(diǎn)到點(diǎn)校正曲線,含量,響應(yīng)值 (A或H),非線性擬合,含量,響應(yīng)值 (A或H),含量,響應(yīng)值 (A或H),含量,響應(yīng)值 (A或H),含量,響應(yīng)值 (A或H),內(nèi)標(biāo)法（ISTD） RF(pk) 面積(pk) 含量 RF(ISTD) 面積(ISTD) 優(yōu)點(diǎn) 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求.內(nèi)標(biāo)的加入消除了由于進(jìn)樣量、儀器不穩(wěn)定等因素帶來的系統(tǒng)誤差。 只對欲分析的組分峰做校正 缺點(diǎn) 必須加一個組分進(jìn)到樣品，易增加面積測量誤差。,*內(nèi)標(biāo)含量 =,* 內(nèi)標(biāo)含量,面積(pk),面積(ISTD),RF,選擇內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn) 樣品中不存在 化學(xué)性質(zhì)與樣品相似 與樣品有相同的濃度

5、范圍 不會與樣品發(fā)生反應(yīng) 在感興趣組分附近流出 * 可得到分離良好的、干凈利落的峰 色譜性質(zhì)穩(wěn)定 可迅速容易得到,定量方法總結(jié),優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn) AREA%無需校正檢測器的響應(yīng)必須一致 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求所有組分峰都須流出 所有組分峰都須被檢測到 所有面積都須準(zhǔn)確 NORM%進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求所有組分峰都須流出 所有組分峰都須測定 必須校正所有的峰 ESTD校正檢測器的響應(yīng)進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確 只對感興趣峰做校正儀器需有很好穩(wěn)定性 無需所有峰都流出 無需所有峰都被檢測到 ISTD進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求必須在所有樣品中加入 只對感興趣峰做校正一個組分 校正檢測器的響應(yīng)樣品和標(biāo)樣的準(zhǔn)備工作 更加復(fù)雜,本章將學(xué)到: 如何設(shè)

6、置并調(diào)試定量數(shù)據(jù) 如何編輯定量結(jié)果 如何產(chǎn)生定量報告,定量數(shù)據(jù)分析,步驟 3: 查找限定離子,步驟 2: 保留時間窗口內(nèi)查找目標(biāo)離子,步驟 1: 在信號窗口內(nèi)查找峰積分,化學(xué)工作站定量概念,分析標(biāo)準(zhǔn)物,分析未知物,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,由曲線計(jì)算含量,定量過程,連同校正表下載方法文件. 下載第一個標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)文件 選擇 Calibrate / Set Up Quantitation.,設(shè)置定量數(shù)據(jù)資料,選擇Calibrate / Set Up Quantitation.,定量數(shù)據(jù)資料表,參考峰窗口：用于內(nèi)標(biāo) 非參考縫窗口：用于其它化合物 相關(guān)窗口：允許目標(biāo)離子與限定離子的保留時間之差 默認(rèn)值+/-：峰起點(diǎn)

7、與終點(diǎn)須在此范圍內(nèi) 濃度單位 內(nèi)標(biāo)濃度,是否用RTE積分,單擊 Insert Above,輸入化合物,輸入化合物 (續(xù)),內(nèi)標(biāo)指令,用于: 增加新級別 級別再校正 刪除級別,更新校正表,10。000,10。000,再校正,分別選擇對濃度和保留時間是否再校正 分別對濃度和保留時選擇再校正的方式（取代或平均）,選擇再校正的級別,選擇Recalibrate,化合物信息 - 第 1頁,化合物信息 - 第 2頁,化合物信息 - 第 3頁,校正曲線,校正曲線,自動定量數(shù)據(jù)庫,定量報告選項(xiàng),“MultiView” 窗口結(jié)果演示,交叉定量,1. 選擇 Method/Edit Method. 2. 選定Quan

8、t Report,3. 選定報告格式和目的地 4. 保存方法!,自動生成定量報告,使用 Qedit手動再積分,當(dāng)前數(shù)據(jù)聲明顯示在所有報告中!,修改數(shù)據(jù)狀態(tài),使用下列工具: Trace Mode Quant Locate a Peak/Locate all Compounds EasyID,如果 peaks/限定離子找不到, 檢查: 1. 積分 2. 數(shù)據(jù)文件中的質(zhì)量數(shù) 3. 時間范圍 4. 信號相關(guān)窗口 如果出現(xiàn)奇怪的校準(zhǔn)曲線, 檢查: 1. 數(shù)量 2. 積分事件 3. 響應(yīng),定量數(shù)據(jù)庫故障排除,查找峰/查找所有化合物,修正保留時間 校正離子比率 設(shè)置信號萃取窗口,EasyID,點(diǎn)擊Quantitate/Trace Mode Quant對痕量樣品進(jìn)行處理，列出所有相關(guān)化合物和內(nèi)標(biāo)的定