1、湖州師院 楊建民,細胞的形態(tài)與記數(shù),目的與要求,1.初步掌握臨時制片技術和顯微繪圖的方法； 2.熟悉光鏡下動、植物細胞的基本形態(tài)、結構； 3. 掌握活細胞計數(shù)的使用方法。 4.掌握顯微測微尺的使用方法。,臨時制片方法及細胞形態(tài)的觀察,（一）人口腔黏膜上皮細胞制片與觀察,取一載玻片，夾持載玻片兩端，用清潔紗布擦凈； 在載玻片中央滴1滴0 .5%次甲基藍染液； 用消毒牙簽的鈍端輕輕刮取頰部內側的口腔黏膜上皮細胞； 將牙簽在載玻片的染液中來回滾動數(shù)次； 染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡產生； 觀察。先低倍，再高倍。細胞核被染成深藍色。,（二）洋蔥表皮細胞的制片與觀察,取一擦凈的載玻片，滴1

2、滴1%碘液； 將洋蔥嫩莖用小刀切成小塊，取1塊肉質鱗葉，用鑷子在其內表面輕輕撕下一小塊表皮，再用剪刀剪成小塊，置于載玻片的染液中鋪平； 染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片； 先低倍，再高倍。細胞核被染成深黃色。,細 胞 計 數(shù),細胞計數(shù)的原理,細胞計數(shù)時，先將培養(yǎng)細胞或血細胞稀釋成細胞懸液，然后將細胞懸液滴入細胞計數(shù)板內，計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格內的細胞數(shù)。根據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計算出細胞濃度。,1.制備血細胞懸液,取1只乙醚麻醉過的蟾蜍，心臟取血1ml，用Ringer液稀釋一定倍數(shù)制成細胞懸液；同時用蟾蜍血制備血涂片，室溫晾干備用；,2 . 熟悉血細胞計數(shù)板,血細胞計數(shù)板呈長方形，有2個計

3、數(shù)室。每個計數(shù)室分為9個大正方格，每個大格邊長1 mm,計數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm，即每大格的容積為1mm1mm 0.1mm =0.1mm3 四角的每個大格被分為16個中格；中央的大格被分為25個中格，每個中格被分為16個小格。,3. 滴片,將蓋玻片擦凈，蓋在血球計數(shù)板槽上，取制備好的蟾蜍血細胞懸液1滴滴于血球計數(shù)板的蓋玻片一側邊緣，讓細胞懸液自然流入計數(shù)室內。注血細胞懸液不可滴得過多，如溢出或蓋玻片內有氣泡必須重做，否則將影響計數(shù)結果。,4. 計 數(shù),在低倍鏡下數(shù)出計數(shù)板上計數(shù)室四角大格中的細胞數(shù)，如細胞壓在格線上時，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。,5. 細胞濃度計算,將四大格的細胞總

4、數(shù)除以4，得出平均每大格的細胞數(shù)，每大格的容積為0.1mm3 ，乘以10000即為1000mm3（1ml）。 不同稀釋倍數(shù)細胞懸液的細胞濃度可用下式計算： 細胞濃度（細胞數(shù)/ml)=( 四大格的細胞數(shù)/4）10000 稀釋倍數(shù),應用顯微鏡的成像原理，同時借助顯微鏡的鏡臺測微尺和目鏡測微尺，兩尺配合使用，進行測量和運算，得出細胞的大小,顯微測量的原理,物鏡測微尺,目鏡測微尺,測微尺的使用操作,1. 卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺有刻度一面向下裝在目鏡鏡面上，再旋上目鏡的上透鏡。2. 將鏡臺測微尺有刻度一面朝上放在載物臺上夾好，使測微尺刻度位于視野中央。調焦至看清鏡臺測微尺的刻度。3. 小心移動鏡

5、臺測微尺和目鏡測微尺(如目鏡測微尺刻度模糊，可轉動目鏡上透鏡進行調焦)，使兩尺左邊的“0”點一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重復的直線(圖)。4.記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。按下式計算目鏡測微尺每格的長度等于多少m目鏡測微尺每格的長度/ m=鏡臺測微尺的格數(shù)/目鏡測微尺的格數(shù),目鏡測微尺量測倍率比照表,細胞生物學實驗繪圖方法與要求,1在仔細觀察的基礎上，選擇典型結構進行描繪，要求真實、準確（注意各部結構的比例關系）。2用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點的疏密來表示，點要圓而一致，不得用涂暗影或進行其他美術加工。3各部結構名稱要在一側引直線注明。各引線要平行不得交叉。4每幅圖的大小、位置在紙面上必須安排得當并注意紙面的清潔。,實驗報告,在低倍鏡下數(shù)出計數(shù)板四角四大格中血細胞數(shù)，然后取下蓋玻片，將血細胞記數(shù)板沖洗干凈，重新滴片、記數(shù)，共三次。取3次記數(shù)的平均數(shù)代入公式計算出結果。 一、分別求出使用低倍鏡(10X)，高倍鏡(40X)時目鏡測微尺每格代表的長度： 低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= XlO(m)= m 高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= XlO(m)= m 二、分別繪制所觀察的高倍鏡下人口腔黏膜上皮細胞并注明基本結構。 三、用測微尺測量不同材料各種細胞的大小后，制表格表示測量結果 四、計算蟾蜍紅細胞的核質比例。