1、第十章 生物檢測(cè)技術(shù),采用生物體對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)的特有反應(yīng)而鑒定被檢測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量和功效的方法。 生物體主要是各種微生物和某些動(dòng)物。 檢測(cè)范圍：生物效價(jià)和安全性實(shí)驗(yàn),一 、生物檢測(cè)的主要內(nèi)容,生物檢測(cè)常用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照法 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)樣品聯(lián)合國(guó)世界衛(wèi)生組織生物檢定委員會(huì)，丹麥哥本哈根血清所，倫敦國(guó)家醫(yī)研所 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（參考標(biāo)準(zhǔn)）本國(guó)制備，用國(guó)際標(biāo)樣校合，北京藥品與生物制品研究所 實(shí)驗(yàn)室對(duì)照樣品本室制備，要與國(guó)家標(biāo)樣、國(guó)際標(biāo)樣校合,（一）、生物效價(jià)測(cè)定,生物效價(jià)：指某一物質(zhì)引起生物反應(yīng)的功效單位，可用理化方法檢測(cè)，也可用生物檢測(cè)方法測(cè)定。利用生物檢測(cè)法檢測(cè)生物效價(jià)的物質(zhì)主要有：各類(lèi)抗生素，維生素及氨基酸等生物

2、生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)。 一個(gè)青霉素效價(jià)單位：能在50mL肉湯培養(yǎng)基中完全抑制金色葡萄球菌發(fā)育的最小青霉素劑量。 一個(gè)鏈霉素效價(jià)單位：能在1mL肉湯培養(yǎng)基中完全抑制大腸桿菌發(fā)育的最小鏈霉素劑量。 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)單位IU，對(duì)純的化學(xué)物質(zhì)，可用重量來(lái)表示，如1mg鏈霉素能抑制1000mL培養(yǎng)基中大腸桿菌的繁殖，則含有1000IU，1IU=1g,（二）、 安全性試驗(yàn),當(dāng)外源物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)時(shí)，可能會(huì)產(chǎn)生某些不良反應(yīng)，危害機(jī)體的健康和安全。因此需要進(jìn)行一系列安全性試驗(yàn)。主要內(nèi)容包括毒性實(shí)驗(yàn)、刺激性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、熱原性實(shí)驗(yàn)、過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)。 1、毒性試驗(yàn) 是檢測(cè)樣品毒性大小的一種生物檢測(cè)方法。常用動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn),毒性試驗(yàn)分類(lèi),

3、毒性試驗(yàn),一般毒性試驗(yàn),特殊毒性試驗(yàn),急性毒性試驗(yàn),長(zhǎng)期毒性試驗(yàn),致突變?cè)囼?yàn),致癌試驗(yàn),致畸試驗(yàn),（1）、急性毒性試驗(yàn),是指藥物一次劑量給藥，或一次劑量在24小時(shí)內(nèi)分兩次給藥，然后觀察受試動(dòng)物在210天內(nèi)產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。 半致死劑量（LD50）：是指被試驗(yàn)動(dòng)物中，死亡率為50%時(shí)的藥物劑量。LD50越大，表明藥物的毒性越小。反之，LD50越小，藥物毒性越大。,（2）、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn),是指采用不同劑量的藥物定時(shí)給藥，然后觀察受試動(dòng)物由于藥物的蓄積作用而產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，可能的受損害器官及其停藥后恢復(fù)的情況等。為臨床提供確切的無(wú)毒性反應(yīng)劑量，以確定安全用藥劑量。 （3）、特殊毒性

4、試驗(yàn) 是評(píng)價(jià)藥物是否有致突變性、生殖毒性和潛在致癌性等特殊毒性的試驗(yàn)。包括致突變?cè)囼?yàn)、致癌試驗(yàn)和致畸試驗(yàn)。,2、局部刺激性試驗(yàn) 將被檢藥物注射進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)，觀察在注射部位是否出現(xiàn)炎癥或產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)等局部刺激現(xiàn)象。 陽(yáng)性不能臨床使用 陰性可供臨床使用 3、溶血試驗(yàn) 檢測(cè)藥物是否引起紅血球膜破裂而釋放出血紅蛋白。 4、熱原試驗(yàn) 是檢測(cè)藥物中是否人有使動(dòng)物體溫升高的致熱性物質(zhì)存在的試驗(yàn)。這種致使動(dòng)物體溫升高的致熱性物質(zhì)稱(chēng)為熱原。一般用家兔試驗(yàn)。,5、過(guò)敏試驗(yàn) 檢測(cè)藥物中有無(wú)引起過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì)存在的一種方法。 過(guò)敏反應(yīng)： 致敏原：引起過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì) 一般豚鼠或雄性小白鼠試驗(yàn) 6、變異原試驗(yàn) 檢測(cè)藥物或食

5、物中有沒(méi)有引起生物產(chǎn)生變異的物質(zhì)（變異原）存在。可用動(dòng)物和微生物檢測(cè)。,二 抗生素的生物檢測(cè)（生長(zhǎng)抑制劑生物效價(jià)檢測(cè)）,有些可以用化學(xué)檢測(cè)或光學(xué)檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，廣泛采用生物檢測(cè)法。 利用抗生素對(duì)特定微生物的生長(zhǎng)起抑制作用而進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。 可用于已知抗生素的效價(jià)測(cè)定，也可用于檢出未知的抗生素。 方法：稀釋法，擴(kuò)散法,1 稀釋法,將樣品和標(biāo)準(zhǔn)抗生素分別進(jìn)行不同稀釋度的稀釋?zhuān)尤肱囵B(yǎng)基中，用指定的適當(dāng)?shù)木杲臃N，培養(yǎng)后比較微生物的生長(zhǎng)情況，從而測(cè)定樣品的效價(jià)。 固體平板，接入相同量指示菌，比較生長(zhǎng)菌落數(shù)； 液體培養(yǎng)基，接入相同量指示菌，比較OD值。 還可測(cè)抗生素的最低抑菌濃度和半致死劑量LD50,

6、2 擴(kuò)散法,利用擴(kuò)散作用形成連續(xù)的濃度梯度，試驗(yàn)菌在最低抑菌濃度范圍內(nèi)生長(zhǎng)受阻，形成抑菌圈，從抑菌圈直徑測(cè)定抗生素效價(jià)。 用標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，選擇在試驗(yàn)菌最適生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)。 （1）紙片平板法（紙碟法） （2）圓筒平板法（管碟法、杯碟法） 應(yīng)用最廣泛的生物檢測(cè)法 雙層平板 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或計(jì)算得到樣品效價(jià),（3）雙層試管法 試管含試驗(yàn)菌及指示劑美藍(lán)（最終濃度1ppm）瓊脂培養(yǎng)基，垂直放置，加入標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液，培養(yǎng)后測(cè)定藍(lán)色抑菌帶高度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可得樣品效價(jià)。 （4）生物生長(zhǎng)圖譜法 樣品液進(jìn)行紙層析，層析后風(fēng)干平鋪在含試驗(yàn)菌平板上，4 幾小時(shí)，取去濾紙，37 1618h，得到生長(zhǎng)圖譜，可檢測(cè)樣品中的抗生

7、素或抑菌物質(zhì)種類(lèi)，并可得Rf 也可用薄層層析分離后測(cè)定,三、生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的生物檢測(cè),生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)：對(duì)生物生長(zhǎng)繁殖有促進(jìn)作用或不可欠缺的物質(zhì)，如維生素、氨基酸、激素等。 一般以微生物為試驗(yàn)材料 方法： 1 生長(zhǎng)抑制物質(zhì)生物檢測(cè)方法均可用于生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的檢測(cè) 全合成培養(yǎng)基（不含待測(cè)物 ） 結(jié)果通過(guò)長(zhǎng)菌直徑或長(zhǎng)菌高度而測(cè)定,2 比濁法 采用適宜菌株和限量全合成液體培養(yǎng)基加不同濃度待測(cè)樣品，37 ，1824h，測(cè)定OD，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，查濃度 3 滴定法 在以乳酸菌為試驗(yàn)菌的場(chǎng)合，隨著菌生長(zhǎng)而生成乳酸，一定范圍內(nèi)生成乳酸的量與添加的生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的量成正比。 培養(yǎng)結(jié)束后，用0.05 mol/L或0.1 mol/L NaOH滴定，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照,思考題,1、生