1、第三章 血細(xì)胞化學(xué)染色,一、概述 （一）研究對(duì)象 外周血和骨髓新鮮涂片單個(gè)細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì)： 酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等,（二）臨床應(yīng)用,1.鑒別各類血細(xì)胞 2.輔助血液系統(tǒng)等疾病診斷和鑒別診斷 3.觀察疾病療效和判斷預(yù)后,二、常用細(xì)胞化學(xué)染色方法,過氧化物酶染色 中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色 過碘酸-雪夫反應(yīng) -醋酸萘酚酯酶染色 鐵染色,過氧化物酶染色 （peroxidase,POX）,POX,新生態(tài)氧 O,過氧化氫 （基質(zhì)中）,四甲基聯(lián)苯胺 （無色）,聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）,亞硝基鐵氰化鈉,藍(lán)色顆粒 （漿內(nèi)酶部位）,粒、單核 細(xì)胞胞漿,【原理】,【結(jié)果判斷】 -、+、+、+、+ 弱陽性 顆

2、粒小，分布稀疏 陽性 顆粒稍粗，分布較密集 強(qiáng)陽性 顆粒粗大，密布于整個(gè)胞漿,【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】 1.粒細(xì)胞系統(tǒng) POX主要存在于粒系細(xì)胞中。 分化差的原粒細(xì)胞陰性; 分化好的原粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞各 階段均呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞的成 熟逐漸增強(qiáng)。,2.單核細(xì)胞系統(tǒng) 陰性或弱陽性 3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng) 紅細(xì)胞系統(tǒng) 巨核細(xì)胞系統(tǒng) 陰性 漿細(xì)胞 組織細(xì)胞,【臨床評(píng)價(jià)】,急性髓細(xì)胞白血病 急性淋巴細(xì)胞白血病,鑒別,1. 急性髓細(xì)胞白血病 （1）急性粒細(xì)胞白血病 陽性反應(yīng) （2）急性單核細(xì)胞白血病 弱陽性反應(yīng),2. 急性淋巴細(xì)胞白血病 陰性反應(yīng)或陽性率 3%(殘留原粒細(xì)胞),中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶

3、染色 （neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）,磷酸萘酚鈉 （基質(zhì)中）,中性粒細(xì)胞胞漿中NAP,磷酸鈉,-萘酚,重氮鹽 （堅(jiān)牢藍(lán)鹽RR）,紫黑色偶氮染料 （胞漿中）,水解,【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法,【結(jié)果判斷】 胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+）,【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】,1. 中性成熟粒細(xì)胞陽性反應(yīng) 其他細(xì)胞呈陰性反應(yīng),2.NAP積分值 計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞（桿狀和分葉）,分別記錄其分級(jí)情況：,(-) 0分 (+) 1分 (+) 2分 (+) 3分 (+) 4分 陽性率 全部陽性反應(yīng)細(xì)胞之和 積分值 各種陽性程度細(xì)胞的分值之和,3.參考值 積分值

4、35-70分 ( 各實(shí)驗(yàn)室參考值不同),【臨床評(píng)價(jià)】 （1）細(xì)菌性感染與病毒性感染 （尤其是化膿性感染） 明顯增加 無明顯變化,(2）類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病 明顯增加 明顯下降且常為零分， 緩解時(shí)又上升到正常,過碘酸-雪夫反應(yīng) ( 糖原染色 )（periodic acid-Schiff reaction，PAS）,雙醛基,過碘酸,雪夫試劑中 的無色品紅,紫紅色化合物 (附于含多糖類 的胞漿內(nèi)),乙二醇基 (多糖類物質(zhì)含有),氧化,【原理】,【結(jié)果判斷】,陽性 胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆 粒狀或塊狀。 陰性 胞漿內(nèi)無色或無顆粒,核淡綠。,【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】,1.粒細(xì)胞系統(tǒng) 分化差的

5、原粒細(xì)胞為陰性； 分化好的原粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞 各階段均呈陽性反 應(yīng)，陽性程度隨細(xì) 胞的成熟逐漸增強(qiáng)。 陽性物呈細(xì)顆粒、 均勻紅色。,2.紅細(xì)胞系統(tǒng) 陰性 3.單核細(xì)胞系統(tǒng) 絕大多數(shù)陽性呈細(xì)顆粒，有時(shí)分布于細(xì)胞邊緣的陽性顆粒較粗大。,4.淋巴細(xì)胞系統(tǒng) 大多數(shù)淋巴細(xì)胞呈陰性； 少于20%淋巴細(xì)胞呈粗顆粒狀或塊狀陽性。 5.巨核細(xì)胞系統(tǒng) 呈顆粒狀或塊狀陽性（含血小板）。,【臨床評(píng)價(jià)】,1.紅血病或紅白血病 幼紅細(xì)胞陽性 巨幼細(xì)胞性貧血 幼紅細(xì)胞陰性,3.鑒別急性白血病類型,（1）急性淋巴細(xì)胞白血病 陽性率20%-80%，呈紅色粗顆粒狀或塊狀。,（2）急性粒細(xì)胞白血病 少數(shù)陽性，呈細(xì)顆粒狀或均

6、勻紅色。 （3）急性單核細(xì)胞白血病 可陽性，呈細(xì)顆粒狀、彌散分布，有時(shí) 胞質(zhì)邊緣處顆粒較粗大。,-醋酸萘酚酯酶染色（-naphthol acetate esterase，-NAE）,-醋酸萘酚酯酶 （細(xì)胞內(nèi)）,-醋酸萘酚 （基質(zhì)液中）,-萘酚,重氮鹽 （堅(jiān)牢藍(lán)B）,胞漿不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀,水解,【原理】,【結(jié)果判斷】 胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。,氟化鈉抑制試驗(yàn) 在基質(zhì)液中加入適量NaF,其余染色方法同上。 兩種方法染色后用油鏡計(jì)數(shù)100或200個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。,氟化鈉抑制率=,抑制前陽性率或陽性積分 - 抑制后陽性率或陽性積分

7、,抑制前陽性率或陽性積分,100%,【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】,1.單核細(xì)胞系統(tǒng) 原始單核細(xì)胞 分化差 陰性 分化好 陽性 幼稚及成熟單核細(xì)胞 陽性,被氟化鈉抑制,2.粒細(xì)胞系統(tǒng) 原粒細(xì)胞陰性或弱陽性 以下階段為弱陽性 3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng) 多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性,不被氟化鈉抑制,【臨床評(píng)價(jià)】,急單 急粒 急性早幼粒 急粒單 急淋 -NAE +或 -或 + 陽性 - + 弱+ NaF 被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制 抑制 部分未被抑制,主要用于鑒別急性白血病類型,鐵 染 色 （ferric stain）,亞鐵氰化鉀,亞鐵氰化鐵 (藍(lán)色沉淀在含F(xiàn)e部位),鐵,酸性環(huán)境,普魯士藍(lán) 反應(yīng),骨髓小粒中的含F(xiàn)

8、e血黃素（細(xì)胞外鐵） 骨髓中貯存鐵 幼紅細(xì)胞內(nèi)的Fe（細(xì)胞內(nèi)鐵）,原理,【結(jié)果判斷】 幼紅細(xì)胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍(lán)綠色。,細(xì)胞外鐵 低倍鏡觀察涂片尾部和骨髓小粒,細(xì) 胞外鐵位于幼紅細(xì)胞外或骨髓小粒巨噬 細(xì)胞漿內(nèi)，呈藍(lán)色顆粒狀、小珠狀或團(tuán) 塊狀。,再用油鏡判斷陽性程度，根據(jù)鐵量 多少分五級(jí): （-） （+） （+） （+） （+）,細(xì)胞內(nèi)鐵 存在于中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞及成熟紅細(xì)胞中的鐵。 油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞，記錄胞漿中含有藍(lán)色顆粒細(xì)胞的百分率。,根據(jù)細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和顆粒分布情況,將鐵粒幼紅細(xì)胞分為四型: 型 型 型 型,細(xì)胞內(nèi)鐵,1.細(xì)胞外鐵 +，約2/3人為+，約1/3人為+。 2.細(xì)胞內(nèi)鐵 陽性率19%44% 型為主，少數(shù)為型（無環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞和鐵粒紅細(xì)胞）,【參考值】,【臨床評(píng)價(jià)】 1.診斷缺鐵性貧血、指導(dǎo)鐵劑治療 細(xì)胞內(nèi)、