1、抗生素藥物稀釋法與管碟法的抗菌試驗(yàn),第二大組：唐鵬程 張君曼 許杰生 肖偉亨 謝秋惠 蔣銘強(qiáng) 李淑霞 鄭慧珠 陳芃仲 李文婷 張妮 何磊,抗生素藥物稀釋法與管碟法的抗菌試驗(yàn),選取藥物：氯霉素滴眼液 規(guī)格：8ml 20mg 國藥準(zhǔn)字H44020212 批號(hào) 130115 菌種：藤黃微球菌（Micrococcus luteus ）,研討會(huì),試驗(yàn)方法：,1.預(yù)試驗(yàn) 1.1復(fù)蘇：取藤黃微球菌（Micrococcus luteus ）凍干粉一支自然解凍，準(zhǔn)備一瓶滅菌好的營養(yǎng)肉湯100ml，無菌操作，（37,24h）搖床培養(yǎng)。 1.2瓊脂斜面：取復(fù)蘇好的藤黃微球菌（Micrococcus luteus ）

2、用接種環(huán)頂點(diǎn)沾一下在滅菌好的斜面劃線（37,24h）培養(yǎng)即可。,菌液制備：,從上面斜面的培養(yǎng)物中（用接種環(huán)頂點(diǎn)沾一下即可）接種于5ml肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)37培養(yǎng)18h，用直徑3mm的接種環(huán)取一環(huán)菌液接種于5ml肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)37培養(yǎng)6h即可，4保存。,確定梯度,從上面斜面的培養(yǎng)物中（用接種環(huán)頂點(diǎn)沾一下即可）接種于5ml肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)37培養(yǎng)18h，用直徑3mm的接種環(huán)取一環(huán)菌液接種于5ml肉 湯培養(yǎng)基中，經(jīng)37培養(yǎng)6h取出，在無菌操作下，用生理鹽水稀釋至，取，做細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)。,稀釋梯度至，細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)表,結(jié)論：由稀釋梯度至， 細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)表可知，為我們所需要的梯度。,一試管法（無菌操作,2.

3、1預(yù)實(shí)驗(yàn)（2批）：取營養(yǎng)肉湯100ml，試管10支，第一管加藥物1ml+9ml肉湯充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉湯混勻，第三管取第二管1ml+9ml肉湯混勻，以此類推至第九管，取出1ml棄去，第十管不加藥，只加了營養(yǎng)肉湯9ml。稀釋完畢后，十管的藥物稀釋度為，及陰性。,2.2菌液制備：,在上述的1.3中，菌液制備最后所得的菌液中取1ml用營養(yǎng)肉湯作為稀釋劑梯度稀釋至，用滅過菌的移液槍每管加0.05ml，第九管不加菌作為陰性對(duì)照，第十管不加藥物加菌為陽性對(duì)照。加完菌后充分混勻，經(jīng)37培養(yǎng)18h后判斷結(jié)果。,2.3確定（最大抗菌效價(jià)，6批）：每批取營養(yǎng)肉湯100ml，試管7支，第一管加

4、藥物1ml+9ml肉湯充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉湯混勻，第三管取第二管10ml+10ml肉湯混勻，第四管取第三管10ml+10ml肉湯混勻，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，第七管不加菌作為陰性對(duì)照，第八管不加藥物加菌為陽性對(duì)照。藥物稀釋度為1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000，加完菌后充分混勻，經(jīng)37培養(yǎng)18h后判斷結(jié)果。,藥物稀釋法找出最大抗菌效價(jià)表，加菌量0.05ml,二、管碟法（2批） 3.1菌液制備：每批取營養(yǎng)肉湯100ml，試管6支，第一管加藥物1ml+9ml肉湯充分混合，第二管取第一管中2ml+18

5、ml肉湯混勻，第三管取第二管10ml+10ml肉湯混勻，第四管取第三管10ml+10ml肉湯混勻，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，藥物稀釋度為1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000。,3.2培養(yǎng)基的制備： 1、先倒下層（抗生素效價(jià)2號(hào)培養(yǎng)基，倒入6個(gè)平皿凝固。） 2 菌液制備（營養(yǎng)瓊脂斜面加入2ml生理鹽水混勻洗脫，倒入40ml抗生 素效價(jià)2號(hào)培養(yǎng)基混勻，作為上層。） 3、從40ml中每皿分別取5ml迅速加入6個(gè)平皿中，混勻，凝固后作好標(biāo)記。（每皿做四個(gè) 標(biāo)記,1/10 兩個(gè)，1/100 兩個(gè)，1/200 兩個(gè)，1/400 兩個(gè)，1/800 兩個(gè)，1/1000兩個(gè).。） 4、每皿加入4個(gè)牛津杯，滴加藥液到小鋼管中，分別按濃度加入1/10兩個(gè)，1/100兩個(gè)， 1/200兩個(gè)，1/400兩個(gè)，1/800兩個(gè)，1/1000兩個(gè)。 5、將平皿蓋換成陶瓦蓋。 6、恒溫培養(yǎng)。（24h，37） 7、記錄結(jié)果,試驗(yàn)結(jié)果：本試驗(yàn)所采用的藤黃微球菌在抗生素效價(jià)2號(hào)培養(yǎng)基中，正常情況下均為混濁生長，培養(yǎng)基經(jīng)培養(yǎng)正常，保持原來一樣狀態(tài)，在長滿細(xì)菌的平皿中無出現(xiàn)抑菌圈 為抑菌（殺菌），以出現(xiàn)抑菌圈 的藥液，最高稀釋倍數(shù)為該藥的抑菌效價(jià)，由管碟法測(cè)定最大抗菌效價(jià)表，可知1:400為最大稀釋倍數(shù)，最大抗菌效價(jià)為2500/400=6.25