1、，微生物和無菌知識訓練六步清洗手法進入清潔車間的程序，飲用水需要100/ml細菌，3/ml大腸桿菌牙齒。通過水塔或水庫儲存后，短期內(nèi)可以繁殖到105106個/毫升。)人的頭皮上有140萬個/cm2，雙手約有440萬個，1g指甲臟有38億個，1g排泄物有101000億個?？梢哉f微生物無處不在，無處不在。以前被視為極端(高溫、高壓、江珊、江珊、強堿、低溫等)的環(huán)境，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)生活著多種微生物(稱為極端微生物、生物)。事實證明，微生物為了適應環(huán)境，具有特別頑強的生存、繁殖和突變能力。微生物的種類多種多樣，有的對人有益，有的有害，有的無益，有的無害。但是在藥品生產(chǎn)過程中，歧視環(huán)境中的各種微生物是不可能的

2、。為了確保藥品的安全和效果，必須控制它?？諝庵械奈⑸锎蟛糠指街诨覊m上，或以孢子的形式在空氣中懸浮，1米以下處于懸浮狀態(tài)，10米以上逐漸下沉，形成菌陣。所以還要控制灰塵粒子。大量林爽資料顯示，注射劑(尤其是靜脈注射劑)污染712米的灰塵，會導致熱源反應、肺動脈鹽、微血栓、異物肉芽腫等，并可能導致嚴重死亡。污染細菌，輕則局部腫脹，化膿，重則引起全身細菌性感，染色。因此，更嚴格地控制微生物和灰塵粒子對注射劑生產(chǎn)潔凈室至關重要。人類是潔凈室最大的污染源，約占90%。一般男性每分鐘排出1000多個含有細菌的粒子，女性向周圍排出750多個。穿無菌服時，靜止時的抗菌量為10300/分鐘，一般活動時的抗菌

3、量為1501000/分鐘，步行時的抗菌量為9002500/分鐘。咳嗽一次的發(fā)菌量為70700個/分鐘，打噴嚏一次40060000個/分鐘。因此，在潔凈室對人數(shù)和活動要有特別嚴格的限制。微生物是自然界中廣泛存在的小體型(直徑小于1毫米)，結構簡單，肉眼看不見的生物，是通過光學或電子顯微鏡放大才能觀察到的生物。微生物是比較普遍的概念，必須說明界限有時很模糊。單細胞藻類或一些原生動物也應該被視為微生物，但一般不會放入微生物中進行研究。微生物具有以下特征：小大小，大面積；吸收多，轉(zhuǎn)換快(2000倍體重/h)；長得好，繁殖快(20min分裂一次)；容易變異，適應力強。分布廣，種類多(10萬種以上)。微生

4、物根據(jù)結構、化學組成、生活習慣等，可以大致分為三類茄子。1真核細胞型核分化程度高，有核膜、細胞核、染色體。細胞質(zhì)內(nèi)有完整的細胞、氣(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、線粒體等)。真菌屬于牙齒類型的微生物。2原核細胞型核分化度低，只有遠視核質(zhì)，沒有核膜和核。細胞器不是很完美。這種微生物的種類有很多：細菌、支原體、衣原體、里克次體、螺旋、放線菌。3非細胞型沒有典型的細胞結構，產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細胞內(nèi)生長和繁殖。體積小，可以通過除菌過濾器。病毒屬于這種微生物。微生物在自然界分布很廣，存在著空氣、土壤、河流、湖泊、海洋等多種微生物。人類、動物、植物的體表以及與外界相通的渠道中也存在著多種微生物。大部分微生物對

5、人類和運動、植物的生存都有好處，是必需的。在自然界中，氮、碳、硫等各種元素循環(huán)是由微生物的代謝活動進行的。例如，空氣中的大量氮只有依靠微生物的作用才能被植物吸收，土壤中的微生物將動植物蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為含有武器的氮化合物，使植物生長，植物被人類和動物利用。因此，沒有微生物，植物就不能代謝，人類和動物生活。另一方面，極少數(shù)微生物引起的傳染病發(fā)病快，死亡率水平高，傳播快，傳播范圍廣，嚴重危害國民健康。3微生物的形態(tài)結構，1細菌(原核單細胞生物)細菌根據(jù)形狀分為球菌(0.52米)、細菌(長15米，寬0.31米)、螺型細菌(與大小、菌類似)。根據(jù)革蘭氏染色染色，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。革蘭氏陽性菌的細胞

6、壁表面含有大量的磷壁酸，產(chǎn)生金黃色葡萄球菌等外毒素。革蘭氏陰性菌細胞壁表面含有大量脂蛋白及脂肪多糖，產(chǎn)生大腸桿菌等內(nèi)毒素(即熱源)。細菌一般具有細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、莢、鞭毛、菌母、孢子等特殊結構。細菌一般通過無性繁殖以二分法繁殖，數(shù)十分鐘或12小時分裂一次。資料：孢子在溫度逐漸降低或營養(yǎng)缺乏的時候，炭疽桿菌(如炭疽桿菌)和放線菌(如破傷風菌)可以在細菌體內(nèi)形成折射性強的著色性強的抗體。這叫芽。孢子是處于休眠狀態(tài)的細菌，不是細菌的繁殖體。環(huán)境適當?shù)臅r候，可以恢復生長和繁殖。幼苗在自然界中分布很廣，所以要注意防止污染。孢子抵抗力強，對熱、干、輻射、化學消毒劑等理化因素的抵抗力強，不易用

7、一般方法殺死。有些幼苗可以忍受100個開水煮幾個小時。殺死幼苗最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。消毒滅菌時，經(jīng)常將芽死亡與否作為判斷滅菌效果的指標。2真菌(絲綢真菌的統(tǒng)稱，真核多細胞生物)，真菌是真菌的一部分。培養(yǎng)基上用絨毛或絨毛生長的菌絲體的真菌統(tǒng)稱為真菌。真菌細胞是被稱為菌絲的狹長管狀。菌絲直徑大于細菌，放線菌，約210米。菌絲體分支徐璐交錯聚集，統(tǒng)稱為菌絲體。(威廉莎士比亞、菌絲、菌絲、菌絲、菌絲)真菌大部分是多細胞微生物，菌絲細胞由細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核和各種細胞器組成。細胞壁很薄，往往在表面制造色素，使菌落產(chǎn)生各種顏色。真菌依靠孢子繁殖，有無性繁殖和流星繁殖兩種茄子方式，以無性繁殖

8、為主。有些霉菌可以用來制造啤酒廠，也可以用來使檸檬酸、葡萄糖、酶和抗生素(例如青霉素、頭孢菌素)發(fā)酵。少數(shù)真菌會引起各種真菌病。真菌產(chǎn)生的真菌毒素(如黃曲霉毒素)有毒。3酵母(真核單細胞生物，真菌)酵母菌以單細胞的形式存在，以原、卵原、香腸的形式大于細菌，細胞為530米，寬度為15米。細胞結構細胞壁，細胞膜，細胞質(zhì)，細胞核，各種細胞器等。酵母菌的增殖分為無性繁殖和流星繁殖兩個階段，有三種茄子方法：芽、分裂和孢子生殖。酵母菌是浸泡酒生產(chǎn)單細胞蛋白、B族維生素、核酸、輔酶A、細胞色素C等的重要產(chǎn)業(yè)微生物。一般對人體無害。4放線菌(原核單細胞生物)放線菌具有生長良好的菌絲體，分枝，菌絲寬度為0.21

9、.2m，革蘭陽性。其內(nèi)部結構與細菌相似，沒有完整的細胞核。菌落總是呈放射狀，被稱為放線菌。無性孢子繁殖的繁殖方法。最佳pH6.77.5，溫度2530。放線菌可用于生產(chǎn)抗生素、維生素、酶類，少數(shù)人會引起家畜放線菌癥。5病毒病毒(5)是一種非常小、結構簡單、只含有一個核酸(DNA或RNA)、不產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，是一種非細胞型微生物，只能在活細胞內(nèi)通過克隆方式增殖。病毒在自然界中分布很廣，在所有其他生物中都有病毒優(yōu)格。病毒是最常見的發(fā)病微生物，人類傳染病中約75%是由病毒引起的。病毒身體主要由核酸和蛋白質(zhì)組成。病毒體積小，最大直徑300nm(如牛頭病毒)，最小直徑20nm(如口蹄疫病毒)，絕對多數(shù)，

10、低于150nm，通過細菌過濾器看不到普通光學顯微鏡，隨著電子顯微鏡的放大，需要放大數(shù)千至數(shù)萬倍。形態(tài)大部分是球形，少數(shù)是棒狀或磚狀。噬菌體(細菌病毒)是蝌蚪形的。朊病毒發(fā)現(xiàn)1982年，它是非常特別的，不包含普通病毒，異常蛋白質(zhì)，核酸。與瘋牛病(牛海綿狀腦病)及人類克羅伊茨病有密切關系。復制方法未知。4微生物的營養(yǎng)1水分：水占細胞漿的70%，是細胞的重要組成成分。比較普遍的看法是，只有在含有水的環(huán)境中，微生物才能生存。但是有人發(fā)現(xiàn)，在無水碳氫化合物中，微生物可以長期生存。2碳源：碳源是構成細胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機酸等有機碳化合物(同時利用化學能源)，是異養(yǎng)型

11、的。有些微生物不需要有機碳化合物、二氧化碳、滋養(yǎng)型(光能滋養(yǎng)型和化學滋養(yǎng)型)。三氮源：氮是構成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。4無機鹽類：細菌所需的無機鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中需要很多磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵，剩下的只需要微量。5生長因子：生長因子是某種微生物的生長發(fā)，是肉需要的，但本身不能合成的營養(yǎng)素的一種。包括維生素、嘌呤、嘧啶等。5微生物生長的影響因素1營養(yǎng)素2pH值：各種微生物具有最合適的pH值，大多數(shù)細菌的pH值最適合6.87.4，但一般來說，容忍度高，在49度下也能存活和生長，少數(shù)細菌能在極端pH值范圍內(nèi)生長。真菌適用于pH值為36的微酸性環(huán)境，但也可以在

12、210生長。3溫度：微生物必須有適宜生長繁殖的溫度，超過最低或最能忍受的溫度，就會停止生長或死亡。一般細菌最佳溫度為3040，霉菌為2030。4氧：大多數(shù)細菌和所有真菌都可以在氧菌(只能在有氧環(huán)境下生長)、少數(shù)細菌可以在厭氧菌(只能在無氧環(huán)境下生長)、某些細菌和酵母菌可以在兼性氧厭氧、有氧或無氧環(huán)境下繁殖。5滲透壓：微生物細胞膜和所有生物膜一樣，對允許水自由通過的半透膜、溶質(zhì)而言是可選的。由于細胞壁的保護，微生物可以在低滲透壓力下生存。在高滲溶液(如高濃度的鹽溶液或糖溶液，40%的甘油)中，細胞脫水，停止繁殖。但是耐高鹽細菌也只在高鹽(1015%)條件下生長。6表面張力：表面活性劑減少表面張力

13、，是影響細菌生長的因素之一。很多革蘭氏陰性菌，尤其是大腸桿菌群，在表面活性劑包圍的介質(zhì)中生長得很好。大部分革蘭氏陽性菌在表面張力低時(0.05N/m)生長不好。陽離子表面活性劑對許多有機體有毒性。負離子表面活性劑毒性很小，非離子表面活性劑幾乎沒有毒性牙齒，可以成為部分微生物的營養(yǎng)物牙齒。6消毒滅菌消毒和滅菌是微生物實驗室技術中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢查的人都要理解消毒滅菌的方法及其意義，嚴格遵守操作程序。否則會影響產(chǎn)品質(zhì)量，危及患者的安全。1概念，1概念無菌沒有活的生物(GMP指南)?！盁o菌”在定義上是絕對的概念，但遺憾的是，在科學和技術高度發(fā)達的今天，藥品的絕對無菌是不能和不能證明的。

14、但是，無菌制劑的安全要求人們設定無菌的相對標準。FDA，歐洲制藥行業(yè)將滅菌產(chǎn)品“無菌”的相對標準百萬分之一作為滅菌產(chǎn)品“無菌”的相對使用，蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物生存概率為10-6(即產(chǎn)品的無菌保證值6)，是同一標準的不同表達。牙齒標準從1980年開始被收錄在USP XX中，目前被世界各國普遍接受和采用。滅菌如何達到無菌狀態(tài)(GMP指南，南)。用物理或化學方法消滅傳播介質(zhì)中的所有微生物，達到無菌(GB)。通常是指殺死或清除所有活微生物(包括繁殖體和孢子)。消毒用物理或化學方法殺死或去除傳播介質(zhì)中的病原微生物，達到無害化(GB)。通常指殺死醫(yī)院微生物的繁殖體，但不能破壞其孢子。所以消毒不徹底，不能

15、代替滅菌。無菌制劑沒有活的微生物制劑(GMP指南)。無菌制劑中含有的活微生物量符合衛(wèi)生學標準制劑(GMP指南)。2使用常用消毒劑消毒劑，70u%乙醇水溶液0.5%頭孢噻肟溶于70%乙醇，2%甘油用于皮膚、器械等消毒消毒劑消毒用異丙醇75%水溶液在皮膚、器械等消毒甲醛37%甲醛89毫升中加入45g高錳酸鉀m3糖熏蒸，具有刺激性廣泛的頻譜，高效，低毒，孢子和病毒。刺激性比較輕。新潔滅(苯扎溴胺)水溶液的0.1%用于皮膚粘膜器具等的消毒，具有清潔和消毒的雙重功效?？咕V比較窄。dufenfen(消毒寧)0.05%0.1%水溶液皮膚、器械等消毒過氧化物乙酸0.2%0.5%水溶液新0.5%水溶液1g/m

16、3器械等消毒抗菌譜寬，可用于皮膚消毒殺死部分病毒熏蒸，但性質(zhì)不穩(wěn)定的乳酸0.331毫升/火焰，燙傷：通常用于實驗室無菌工作中用金屬或其他耐火材料制成的器具的滅菌。烘干和紅外線：用干燥、熱的空氣或熱輻射滅菌。通常，135145需要35h，160170需要2h或更高，170180需要1h或更高，180200需要0.51h。除熱原則需要25030min或20045min，1802h?？諝鈧鳠崧?，穿透力不強，干熱滅菌時間長。干熱滅菌時烤箱里的內(nèi)容物要留出空隙讓空氣流動。否則，箱子里的溫度會不均勻，有些物品不會滅菌。2)濕熱殺菌法是通過熱蒸汽或沸水變性蛋白質(zhì)，殺死微生物的方法。濕熱穿透力強，滅菌效果比較

17、干燥。沸騰或流通蒸汽滅菌：經(jīng)常壓開水和蒸汽的溫度為100，通常處理3060min會殺死細菌繁殖體，但不能完全殺死孢子。牙齒方法適用于高壓蒸汽滅菌不可能的物品。低溫生態(tài)位滅菌(巴斯德滅菌法):將東西先加熱或煮沸到6080，然后設置2025，保存24h(或在常溫下過夜)，其中剩下的芽作為繁殖體發(fā)芽，然后以上述條件滅菌，重復3次。牙齒法適用于高溫或高溫下容易變質(zhì)的物品，但需要很長時間。蒸壓(熱壓滅菌法):如果氣壓超過一個，水的沸點就高于100，反之亦然。蒸壓通過施加壓力提高蒸汽溫度，滅菌效果最好。簡單、經(jīng)濟、可靠、無毒、最可靠、使用最廣泛的滅菌法。牙齒方法適用于高溫潮濕的物品。一般條件如下：115.5 30min121.5 20min126.5 15min注意事項：a .必須完全排出滅菌機內(nèi)部的空氣。否則，滅菌器內(nèi)的溫度可能會影響滿足規(guī)定的要求。b .注意滅菌物品的溫度。滅菌機內(nèi)的溫度通常與滅菌物品的溫度一致，但如果蒸汽輸入得太快，后者可能低于前者，因此加熱時必須有一定的預熱時間。此外，氣溫下降過快容易產(chǎn)生玻璃破裂。因此，對于滅菌產(chǎn)品，必須開發(fā)固定滅菌曲線(與董潔干燥曲線相同)。c .定期檢查