1、細胞因子及其生物活性檢測,細胞因子的分類及生理功能 細胞因子在免疫功能檢測中的應(yīng)用 細胞因子的檢測方法,細胞因子簡介,細胞因子是聯(lián)系細胞間相互作用的一種化學物質(zhì)，他們是蛋白或糖蛋白質(zhì)，由一組細胞分泌，同類細胞或其他細胞通過特殊受體來識別之細胞因子最早是從淋巴細胞和單核細胞的產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的，故曾被稱為淋巴因子或單核因子。以后發(fā)現(xiàn)有一大群細胞，具有分泌這些蛋白，對本身或其他細胞有抑制或激活等特殊反應(yīng)。細菌、病毒等微生物與物理或化學因素對機體的損傷都可以激發(fā)細胞因子的產(chǎn)生，而細胞因子又能殺滅細菌和抑制病毒，達到保護機體的目的。一個細胞因子被激活通過連鎖反應(yīng)帶動很多其他細胞和細胞因子參與機體的防御反應(yīng)。

2、一種細胞因子可有多種不同功能，不同的細胞因子可以產(chǎn)生相同的作用。,細胞因子的分類,細胞因子包括白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子和轉(zhuǎn)化生長因子。 它們能通過受體介導(dǎo)，以旁分泌和(或)自分泌的方式參與體內(nèi)復(fù)雜的細胞-細胞調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。 在免疫調(diào)節(jié)、免疫效應(yīng)、細胞生長、增殖和分化等方面具有重要的生物學功能。,幾類細胞因子的功能白細胞介素,白細胞介素(Interleukine，IL) 由淋巴細胞、單核巨噬細胞和其它細胞分泌的細胞因子，在免疫調(diào)節(jié)、 造血及炎癥過程中起重要作用。目前報道的有IL-1IL-18。,干擾素,干擾素(Interferon，IFN) 因最初發(fā)現(xiàn)它是在病毒感染細胞后產(chǎn)生的

3、可干擾另一種病毒感染和復(fù)制的物質(zhì)而得名。 在免疫調(diào)節(jié)、抗病毒感染及抗腫瘤免疫中具有重要作用。,腫瘤壞死因子,腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF) 因它能使腫瘤細胞壞死而得名。具有免疫調(diào)節(jié)、腫瘤殺傷及參與炎癥和發(fā)熱反應(yīng)。,集落刺激因子,集落刺激因子(Colony Stimulating Factor，CSF) 根據(jù)不同細胞因子刺激造血干細胞或分化不同階段的造血細胞在半固體培養(yǎng)基上形成的不同細胞集落而分別命名為：G-CSF、M-CSF、GM-CSF、Multi-CSF、SCF和EPO等。,趨化因子,趨化因子的生物學作用也是由其相應(yīng)的受體介導(dǎo)的，趨化因子受體為跨膜的多肽

4、蛋白，其信號傳遞分子為G蛋白， 此類受體也可根據(jù)其配基的不同分為CXC受體(CXCR)和CC受體(CCR)。其中有的受體不但能與趨化因子結(jié)合， 而且還是某些病毒的受體或共受體。因此，趨化因子受體的表達與某些疾病的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系。 最近的研究發(fā)現(xiàn)，某些趨化因子的受體為人免疫缺陷病毒(HIV)的共受體。,防御素,防御素(defensins)當微生物入侵機體時，中性粒細胞在趨化因子的作用下迅速動員起來，聚集在感染部位，開始其吞噬與殺菌過程。目前已知中性粒細胞有兩種殺菌機制和一種顆粒組分的殺菌作用,生長因子,生長因子是調(diào)節(jié)細胞增值和分化的一類物質(zhì)，其分子量從幾百到幾萬不等，習慣上稱多肽生長因子。

5、與經(jīng)典的多肽和蛋白質(zhì)激素相比，多肽生長因子沒有特定的內(nèi)分泌腺和內(nèi)分泌細胞，而是通過一些細胞的膀分泌和自分泌釋放并擴散到靶細胞，從而協(xié)調(diào)機體自身的統(tǒng)一和對外界的反應(yīng)。 表皮生長因子能促進表皮細胞生長繁殖，加速受傷表皮細胞的修復(fù)，還有抑制胃酸分泌等特殊的效果，在醫(yī)藥上有很廣的用途。表皮生長因子也楞用于化妝品領(lǐng)域，它能起到延緩皮膚細胞衰老，使皮膚滋潤光滑的作用。,細胞因子與感染,細菌或其他微生物侵入體內(nèi)，首先被巨噬細胞吞噬，巨噬細胞就釋放IL-1、IL-6、TNF和成纖維細胞生長因子，臨床出現(xiàn)發(fā)熱，G-CSF，GM-CSF由IL-1激活巨噬細胞、淋巴細胞、內(nèi)皮細胞及成纖維細胞產(chǎn)生，促使中性粒細胞從骨

6、髓釋放，以致臨床上有細菌感染后白細胞升高，IL-1和IL-6共同激活CD4與CD8淋巴細胞，并使之增殖分化，CD4細胞受IL-1刺激產(chǎn)生IL-2和IFN；IFN反過來再刺激巨噬細胞造成循環(huán)，IL-2又再刺激CD4淋巴細胞亦形成循環(huán)；CD4細胞使B淋巴細胞增生轉(zhuǎn)化為漿細胞，分泌更多的抗體，抗體又可與中性粒細胞、NK細胞和巨噬細胞相結(jié)合加強殺傷細菌的作用。經(jīng)微生物致敏的巨噬細胞產(chǎn)生TNF，如系少量則有利于免疫功能和機體恢復(fù)，大量則免疫反應(yīng)加劇，組織損傷嚴重，臨床病情危重，常出現(xiàn)休克、DIC等，即使積極搶救，病死率也很高。一次感染后對抗原的特異性能通過CD4和CD8細胞將信息傳給記憶細胞永久存在，再

7、次感染時它會將信息傳給CD4和CD8細胞使抗體很快上升，免疫反應(yīng)亦能增強。,細胞因子水平的檢測,目前檢測細胞因子水平主要包括： 一、生物學活性的檢測，這類方法是利用細胞因子某一特定的生物學作用所設(shè)計的檢測方法，如IL-2維持活化T細胞的增殖，IFN能保護病毒對正常細胞的感染， TNF-選擇性殺某些腫瘤細胞等，因此敏感性也較高； 二、定量的檢測，常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)， 如多克隆抗體與單克隆抗體，識別不同表位兩種單克隆抗體的雙抗體夾心法，生物學和定量的檢測方法各有優(yōu)缺點， 在必要時可同時進行檢測。 三、最近又有人用RT-PCR定量的方法檢測細胞因子mRNA的表達水平 四、流式細胞儀免

8、疫熒光抗體檢測,細胞因子檢測的意義,當今大部分疾病都與免疫學相關(guān)，因此研究免疫系統(tǒng)細胞作用方式及其相互聯(lián)系是非常重要的，而細胞因子在免疫系統(tǒng)中的中心地位已得到公認，細胞因子水平成為衡量機體免疫功能狀態(tài)的重要標志,在AIDS病人中測量細胞因子進一步了解病人的免疫狀態(tài)對了解病情，掌握病程，確定治療的效果是極有用的，因此美國AIDS臨床試驗計劃(Aids Clinicatrial Group)要求所有實驗室在試用抗AIDC藥物時檢測TNF一1,類風濕關(guān)節(jié)炎研究已清楚地表明TNF一，ILl和IL-6水平在此類病人中有明顯的相關(guān)性，類風濕性關(guān)節(jié)炎SIL-2R水平明顯增加，這一結(jié)果有助于類風濕性關(guān)節(jié)炎的診

9、斷和療效的判定，因此許多國外有抗風濕類藥物因子試劑盒檢測其效果。,肝病病人血清中IL-2及淋巴細胞分泌IL-2的能力，提示肝硬化，慢活肝及急性肝炎患者的細胞免疫功能低下。 慢性肝炎(CH)患者IL-6，INF一水平最高，恢復(fù)期或穩(wěn)定期TNF一和IL-6水平低于急性期或活動期，提示IL-6和丁NF一是肝臟損害重要的炎癥介質(zhì)。,肝癌、肺癌、乳腺癌患者干擾素水平顯著。鼻咽癌患者急性期、口腔額面部惡性腫瘤患者血清SIL-2R水平顯著。膀胱癌患者血清SIL-2R顯著高于正常人，與腫瘤分期與預(yù)后有關(guān)。,總之，在當代醫(yī)學中，細胞因子在腫瘤，感染，自身免疫炎癥反應(yīng)，血液病，傷口愈合，胚胎發(fā)生等方面均起重要作用，目前的工作僅僅是開端，更多的機理，相互影響和毒創(chuàng)