1、微生物學(xué)實驗,微生物學(xué)教研室 楊繼紅,微生物學(xué)實驗的的任務(wù),學(xué)習(xí)研究與應(yīng)用微生物的主要方法與技術(shù)，掌握適應(yīng)于從事相關(guān)學(xué)科的基礎(chǔ)理論研究與實際生產(chǎn)應(yīng)用的微生物學(xué)實驗技能。 與微生物學(xué)基礎(chǔ)理論課緊密結(jié)合，在實驗中更深地理解基礎(chǔ)理論，提高學(xué)生的綜合能力與創(chuàng)新意識。 提高學(xué)生分析問題和解決問題的能力。,教學(xué)要求,注重微生物學(xué)基礎(chǔ)實驗技能的掌握與提高，克服盲目追求新穎而忽視基礎(chǔ)的傾向； 實驗課前要預(yù)習(xí)，明確每次實驗的目的與基本步驟； 在實驗中要有嚴緊的科學(xué)態(tài)度，尊重事實與實驗結(jié)果，要善于發(fā)現(xiàn)新現(xiàn)象； 樹立密切合作的風(fēng)氣，包括學(xué)生與老師、班與班、組與組、組長與組員之間的密配合。,教學(xué)方法,以學(xué)生自己動手為

2、主，老師在適當(dāng)時間予以提示； 對實驗中所出現(xiàn)的一些現(xiàn)象多向?qū)W生提出問題，使它們學(xué)會分析結(jié)果，并與理論知識有機結(jié)合； 根據(jù)實驗的進行程度，引導(dǎo)學(xué)生更深入思考，逐步樹立他們的創(chuàng)新意思； 嚴格要求使操作技能規(guī)范化，老師作示范，強調(diào)其要點學(xué)生自己練。,實驗室制度,1、每次實驗前必須對實驗內(nèi)容進行充分預(yù)習(xí)，以了解實驗的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，思路清楚。 2、認真及時做好實驗記錄，對于當(dāng)時不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀察的實驗，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。 3、實驗室內(nèi)應(yīng)保持整潔、勿高聲談話和隨便走動，保持室內(nèi)安靜。 4、實驗時小心仔細，全部操作應(yīng)嚴格按操作規(guī)程進行，萬一遇有盛菌試管或瓶不慎

3、打破、皮膚破傷或菌液吸入口中等意外情況發(fā)生時，應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師，及時處理，切勿隱瞞。 5、實驗過程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃藥品接近火焰。如遇火險，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時用滅火機。 6、使用顯微鏡或其他貴重儀器時，要求細心操作，特別愛護。對消耗材料和藥品等要力求節(jié)約，用畢后仍放回原處。 7、每次實驗完畢后，必須把所用儀器抹凈放妥，將實驗室收拾整齊。擦凈桌面，如有菌液污染桌面或其他地方時，可用3%來蘇爾液或5%石炭酸液覆蓋其上半小時后擦去。如系芽孢桿菌，應(yīng)適當(dāng)延長消毒時間：凡帶菌之工具(如吸管、玻璃刮捧等)在洗滌前須浸泡在3%來蘇爾液中進行消毒： 8、每次實驗需進行

4、培養(yǎng)的材科，應(yīng)標明自己的組別及處理方法，放于教師指定的地點進行培養(yǎng)：實驗室中的菌種和物品等，未經(jīng)教師許可，不得攜出室外： 9、每次實驗的結(jié)果,應(yīng)以實事求是的科學(xué)態(tài)度填入報告表格中，力求簡明準確，并連同思考題及時匯交教師批閱： 10、離實驗室前應(yīng)將手洗凈，注意關(guān)閉門窗、燈、火、煤氣等。,教學(xué)內(nèi)容、課時和教學(xué)安排,實驗一、微生物學(xué)實驗基本操作技術(shù) 實驗二、培養(yǎng)基的制備、消毒與滅菌 實驗三、細菌簡單染色法 實驗四、細菌革蘭氏染色法 實驗五、細菌芽孢染色法 實驗六：細菌莢膜染色法 實驗七、放線菌形態(tài)觀察 實驗八、酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞的鑒別 實驗九、酵母菌子囊孢子的觀察 實驗十、霉菌形態(tài)觀察 實驗十

5、一、微生物大小的測定 實驗十二、顯微鏡直接計數(shù) 實驗十三、微生物的分離、純化與接種培養(yǎng) 實驗十四、糖發(fā)酵試驗 實驗十五、光電比濁計數(shù)法 實驗十六、水中細菌總數(shù)的測定 實驗十七、化學(xué)因素對微生物的影響,成績考核方面的說明及要求,平時成績40%；包括： 考勤及課堂紀律 實驗預(yù)習(xí) 實驗操作 實驗報告及思考題 實驗操作考試30%；包括： 實驗操作規(guī)范程度 實驗操作熟練程度 實驗結(jié)果及實驗報告 抽簽答題30% 。,實驗預(yù)習(xí),實驗課教材內(nèi)容： 原理 操作步驟 注意事項 可能出現(xiàn)的問題及解決方法 理論課教材相關(guān)內(nèi)容 參考書相關(guān)內(nèi)容,實驗報告,采用科研論文格式，分成以下幾個部分： 原理、目的意義 材料與方法

6、結(jié)果 討論,實驗一、微生物學(xué)實驗基本操作技術(shù),微生物學(xué)實驗常用儀器、器皿及準備 普通光學(xué)顯微鏡及其使用 基本無菌操作技術(shù),微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用

7、儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用儀器,微生物學(xué)實驗常用的器皿,器皿的種類、要求與應(yīng)用 玻璃器皿的清洗方法 空玻璃器皿的包裝,一、 器皿的種類、要求與應(yīng)用,試管（test tube) 德漢氏小管（Durhan tube） 小塑料離心管（Eppendorf tube) 吸管或叫移液管（pipette) 吸氣器（aspirator or pipette aid ） 微量移液器或叫加樣槍（micropipette） 培養(yǎng)皿(dish) 三角形燒瓶（flask）與燒杯（beaker） 注射器（syringe）和針頭（needle） 載玻片（slide）與蓋玻片（coverslip） 滴瓶（d

8、ropper bottle） 接種工具(inoculating tool),玻璃器皿的清洗方法,新玻璃器皿的洗滌方法 在酸溶液內(nèi)浸泡后洗滌 2. 使用過的玻璃器皿的洗滌方法 試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、燒杯 玻璃吸管 載玻片與蓋玻片,空玻璃器皿的包裝（演示）,棉塞的做法 包吸管 包試管：試管口、試管束 包平皿 包三角錐瓶口,顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用,了解普通顯微鏡的結(jié)構(gòu)、部件功能和使用方法。 學(xué)習(xí)油鏡的原理并掌握使用方法。 顯微鏡使用。,顯微鏡的基本結(jié)構(gòu),1. 物鏡轉(zhuǎn)換器 2. 接物鏡 3.游標卡尺 4.載物臺 5.聚光器 6. 彩虹光闌 7.光源 8. 鏡座 9. 電源開關(guān) 10. 光源滑動變阻

9、器 11. 粗調(diào)螺旋 12. 微調(diào)螺旋 13. 鏡臂 14.鏡筒 15.目鏡 16.標本移動螺旋,油鏡的工作原理,1、 增加照明亮度： 使用油鏡時，油鏡與其他物鏡的不同是載玻片與接物鏡之間，不是隔一層空氣，而是隔一層油質(zhì)，稱為油浸系。 如果玻片與物鏡之間的介質(zhì)為空氣，則稱為干燥系。,2、 增加顯微鏡的分辨率： 數(shù)值孔徑，即光線投射到物鏡上的最大角度(稱鏡口角)的一半正弦，乘上玻片與物鏡間介質(zhì)折射率所得的乘積，可用下列公式表示： 其中,分辨力是指顯微鏡能辨別物體兩點間最小距離的能力。 式中 =光波波長 一些物質(zhì)的折射率： 水 1.33 玻璃 1.52 空氣 1.0 香柏油 1.515,顯微鏡使用

10、操作步驟,1、觀察前的準備 仔細閱讀顯微鏡使用說明書 取鏡 顯微鏡的放置 熟悉顯微鏡，檢查顯微鏡 調(diào)節(jié)光源 調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的物鏡 調(diào)節(jié)聚光器數(shù)值孔徑,2、顯微鏡觀察：觀察程序如下： 放置觀察標本 低倍鏡觀察 高倍鏡觀察 油鏡觀察 3、顯微鏡使用完畢后的處理,低倍鏡觀察 先將標本玻片置于載物臺上(注意標本朝上)，并將標本部位處于物鏡的正下方、轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，上升載物臺使物鏡至距標本約0.5厘米處。 雙眼看目鏡，慢慢旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)螺旋使載物臺緩慢下降，至視野內(nèi)出現(xiàn)物象后，改用細調(diào)節(jié)螺旋，上下微微轉(zhuǎn)動，仔細調(diào)節(jié)焦距和照明，直至視野內(nèi)獲得清晰的物象，及時確定需進一步觀察的部位。 慢慢移動推動器，尋找要觀察的

11、部位置于視野中心，準備換高倍鏡觀察。,高倍鏡觀察 將高倍物鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方(在轉(zhuǎn)換物鏡時，要從側(cè)面注視。以防低倍鏡未對好焦距而造成鏡頭與玻片相撞)，調(diào)節(jié)光圈和聚光鏡，使光線亮度適中，再仔細反復(fù)轉(zhuǎn)動微調(diào)螺旋，調(diào)節(jié)焦距，獲得清晰物象，移動推動器選擇最滿意的鏡檢部位，待油鏡觀察。,油鏡觀察 用粗調(diào)螺旋下降載物臺，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。在標本鏡檢部位滴上一滴香柏油。慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，上升載物臺，并及時從側(cè)面注視使油浸物鏡浸入油中，直到幾乎與標本接觸時為止(注意切勿壓到標本，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡頭)。 左眼看目鏡，右手反時針方向微微轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，下降載物臺(注意：此時只準下降載物臺，不能向上調(diào)動)，當(dāng)視野中有模糊的標本物象時，改用細調(diào)螺旋，并移動標本直至標本物象清晰為止。,3、顯微鏡使用完畢后的處理 觀察完畢，下降載物臺，取下標本片。 先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油