1、種子有果皮包被著，（胚珠有子房壁包被著）,被子植物 裸子植物,種子無果皮包被著，（胚珠無子房壁包被著）,種子,花的結(jié)構(gòu),被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分。,雌蕊,雄蕊,雌蕊的結(jié)構(gòu),花粉粒,花粉管,精子 (2個(gè)),卵細(xì)胞,極核,（一）、被子植物的花粉發(fā)育,雄蕊：,一、基礎(chǔ)知識,藥隔,藥隔,花粉囊,囊壁,花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞,花粉粒的形成,經(jīng)歷時(shí)期：,四分體時(shí)期、單核期、雙核期,四分體時(shí)期(小孢子),精子,精子,有絲 分裂,花粉管細(xì)胞核,生殖細(xì)胞核,生殖細(xì)胞,營養(yǎng)細(xì)胞,雙核期,兩個(gè)精子和一個(gè)營養(yǎng)細(xì)胞的基因型相同,1

2、個(gè)花粉母細(xì)胞,4個(gè)小孢子,減分,有分,4個(gè)花粉管細(xì)胞核,4個(gè)生殖細(xì)胞核,有分,8個(gè)精子,(二)、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑,（三）、影響花藥培養(yǎng)的因素,1、材料的選擇,時(shí)期初花期,選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期是 提高誘導(dǎo)成功率的重要因素,只有某一個(gè)時(shí)期對離體刺激敏感。,最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時(shí)期為單核靠邊期,措施？,2、培養(yǎng)基的組成,花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基因植物的不同而有所變化,3、其他因素 親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對誘導(dǎo)成功都有一定的影響,六、實(shí)驗(yàn)操作,（一）材料的選取,某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。,最常用的方法

3、有醋酸洋紅法,1、方法,醋酸洋紅法染色機(jī)理,醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色 。,醋酸洋紅的配置,2、醋酸洋紅法,將體積分?jǐn)?shù)45的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50，過濾即可。,將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。,染色操作,3、焙花青鉻釩法,將無水酒精與冰醋酸按體積比為3 ：1的比例混勻,卡諾氏固定液的配制方法,將5g鉻明礬K2SO4Cr2(SO4)24H2O加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻

4、至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml。,焙花青鉻釩溶液的配制方法,花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。,染色操作,（二）材料的消毒,1、酒精處理,花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 無菌水清洗 無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分,2、消毒液處理, 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液） 無菌水沖洗35次 用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。,（三）接種和培養(yǎng),在無菌條件

5、下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥,要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成,1、剝?nèi)』ㄋ?勿損傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織,注意：,立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。,2、接種,培養(yǎng)條件：溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,3、培養(yǎng),培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體 長出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株,注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。,在花藥培養(yǎng)中，特別