1、植物花粉母細胞減數(shù)分裂制片技術和染色體觀察,一、實驗目的 1、觀察染色體在減數(shù)分裂中的行為和變化，識別減數(shù)分裂各個時期特點，加深對減數(shù)分裂遺傳學意義的理解； 2、掌握動、植物減數(shù)分裂的制片技術。,二、實驗原理,減數(shù)分裂是性母細胞在配子形成過程中一種特殊的細胞分裂方式。在減數(shù)分裂過程中染色體只復制一次，而細胞卻連續(xù)分裂兩次，因此一個二倍體的性母細胞便形成為四個單倍體的性細胞。 高等植物花粉母細胞經(jīng)減數(shù)分裂產(chǎn)生四個小孢子，染色體數(shù)目已減半為n。小孢子進一步發(fā)育為花粉粒。,減數(shù)分裂過程,1、間期(前間期) 2、減數(shù)第一分裂 3、中間期 4、減數(shù)第二分裂,前期I 中期I 后期I 末期I,前期II 中期

2、II 后期II 末期II,在適宜的時期采集植物的花蕾，經(jīng)固定液殺死固定，使細胞保持活體時形態(tài)。然后進行壓片染色等處理，在顯微鏡下進行觀察，可以看到小孢子母細胞的減數(shù)分裂過程，研究染色體在形態(tài)和數(shù)量上的動態(tài)變化特點。,三、實驗用品,實驗材料：玉米（Zea mays 2n=20）雄花序或小麥、 蠶豆(Vicia faba 2n=12)花蕾、 蝗蟲(grasshopper 初級精母細胞2n=22+X) 精巢 儀器物品：顯微鏡、水浴鍋、鑷子、解剖針 實驗藥品：卡諾氏固定液、70%乙醇、改良品紅或醋酸洋紅。,四、實驗操作流程,取材 固定 剝離花藥 染色 壓片 鏡檢,1.取材： 選取適當大小的花蕾，是觀察

3、花粉母細胞減數(shù)分裂的關鍵性步驟。不同植物取材時期不同。 玉米：抽雄前兩周（大喇叭口期），雄穗尖端露出以前7-10d時，先以手指擠摸穗尖的外部，覺得松軟時在雄花序所在部位用刀片縱向劃一切口，用鑷子取出花序分枝。此時雄花序先端小穗穎長4mm左右，花藥長23mm。每小穗中有兩朵小花，各有花藥3個 。通常從一個分枝上從幼嫩的部位向較為成熟的區(qū)域混合制片。 小麥：孕穗期以后，旗葉抽出1 2cm，取出穗子。 時間一般在上午9時10時，不同材料間稍有差異。,玉米大喇叭口期,玉米小穗,玉米雄花序,小麥孕穗期,小麥的小花,實驗中注意觀察：每一分枝是中上部還是下部小穗發(fā)育最早？,2固定： 取下的材料應立即放入固定

4、液中殺死固定。 一般采用卡諾氏固定液，無水酒精：冰醋酸3:1，一般固定424h?？捎?5 乙醇代替無水乙醇。 如需長期保存，可先用70%酒精沖洗2次然后轉(zhuǎn)入70%酒精中保存。 注意：固定液時應現(xiàn)配現(xiàn)用，固定時不要在陽光下暴曬。,3、剝離花藥 取出保存的花序，吸去小穗過多保存液，置于載玻片中央，挑出花藥,4染色：,在剝離的材料上滴加1滴染液，在室溫下 染色1015min。,5.壓片 蓋上蓋玻片，在蓋玻片上墊12層吸水紙，用一只手穩(wěn)住載玻片和蓋片防止滑動，另一只手用解剖針的針柄敲擊蓋片,6.鏡檢觀察 先用低倍鏡觀察，找到一個好的分裂相，再轉(zhuǎn)用高倍鏡觀 察。要求能夠分辨減數(shù)分裂的各個時期，特別是能夠

5、獨立 辨認第一次減數(shù)分裂前期的各個時期 7.觀察永久制片 在顯微鏡下觀察，并與自己的制片比較，掌握各個時 期的特點。 注意： 怎樣區(qū)分各個時期？,五、實驗結(jié)果與分析,1繪出自己所制作片子的分裂相(3個以上時期）， 說明其時期和特點。 2. 分析自己制片操作過程中出現(xiàn)的問題及可能原因。,注意事項,愛護顯微鏡。 一次取材不要太多。 用過的載玻片必須刷洗干凈，用過的蓋玻片丟入垃圾桶，不得直接沖入水池。,減數(shù)分裂前期 I,細線期,偶線期,偶線期,粗線期,雙線期,終變期,中期,后期,后期,前期II,中期II,后期II,末期II,四分體,小孢子,玉米減數(shù)分裂中期I,玉米減數(shù)分裂中期 II,M1 中期與M2

6、中期的比較,前期 I,細線期,偶線期,粗線期,雙線期,終變期,中期 I,后期 I,末期 I,前期 II,中期 II,后期 II,末期 II,取材及固定 捕捉雄性蝗蟲，直接投入到卡諾固定液中固定24小時，然后轉(zhuǎn)到70的酒精中保存。,雌雄蟲辨別（外觀） 雄性蝗蟲蟲個體小，雌蟲較大； 雌性蝗蟲尾部有產(chǎn)卵瓣，雄蟲無。,解剖取出精巢：先將蝗蟲翅膀剪去，在翅基部的后方，相當于腹部背側(cè)的前端，用解剖剪將其體壁剪開，上方兩側(cè)的黃色團塊就是精巢。精巢由許多排列在一起的精小管組成。將精巢取出置于一潔凈的培養(yǎng)皿內(nèi)，用蒸餾水洗滌干凈。用解剖針將精巢輕輕分離開，即可看到大量的精細小管。,取12根精小管放在干凈的載玻片上，用吸水紙將上面的水吸凈，在精小管位置上滴加一滴改良苯酚品紅染液，在室溫下染色10-15min。,附：顯微鏡操作和使用,開關顯微鏡，移動顯微鏡。 調(diào)節(jié)目鏡間距和目鏡微調(diào)，使兩個眼睛視野相同和清晰，防止眼睛疲勞。 先低倍鏡，后高倍鏡觀察，高倍鏡下