1、第十二章高效毛細(xì)管電泳 High Performance Capillary Electrophoresis,12.3 基本概念 電泳：一個“自由”的帶電粒子在一定介質(zhì)中在電場作用下的遷移。 淌度， ep ：表述物質(zhì)電泳特性的參數(shù)，與粒子電荷、質(zhì)量、半徑、介質(zhì)等有關(guān)。,電滲，eo ： 由于粘滯阻力的存在，離子的電泳會帶動溶劑同向運(yùn)動。正負(fù)離子當(dāng)量數(shù)相同時，溶劑受到大小相等方向相反的作用力，因此通常觀測不到溶劑的運(yùn)動。若設(shè)法使某種離子不運(yùn)動，則作用于溶劑的力便失去了平衡，溶劑發(fā)生單向流動，這種流動稱電滲。,在不考慮相互作用的前提下，粒子在毛細(xì)管介質(zhì)中的運(yùn)動速度是泳流速度和滲流速度的矢量和。一般情

2、況下，電滲流速度是電泳流速度的5-7倍，混合物中所有的組份隨電滲流朝一個方向遷移。 式中E：場強(qiáng) eo電滲淌度 ep電泳淌度,12.2 原理 電滲流方向：高電位 低電位 正溶質(zhì)離子所受的力：電場力 + 電滲力 負(fù)溶質(zhì)離子所受的力：電場力 電滲力 中性分子所受的力：電滲力 溶質(zhì)遷移方向由電場力和電滲力的矢量和決定，一般來說，溶質(zhì)遷移方向與電滲流同。 流出順序：正離子中性粒子負(fù)離子,柱效：N5.54（tR /W1/2)2 tR、W1/2取同一單位 通常采用石英毛細(xì)管柱，一般情況下，表面帶負(fù)電荷。當(dāng)其與溶液接觸時，在溶液中產(chǎn)生了一種過剩的正電荷與上述的負(fù)電荷平衡。在電場作用下，這層正電荷向負(fù)極移動，

3、帶動溶劑裹著溶質(zhì)分子一起移動。, , ,12.3 高效毛細(xì)管電泳儀器 裝置圖,12.3.1高壓電源 0-30KV輸出，恒壓恒流，正負(fù)極性可調(diào)。Pt絲電極 12.3.2進(jìn)樣系統(tǒng) A、重力（高度差）進(jìn)樣 B、負(fù)壓進(jìn)樣 C、電滲法進(jìn)樣 12.3.3分離系統(tǒng) 毛細(xì)管：I.D. 50m-75m，長30-100cm,12.3.4檢測系統(tǒng) 商品儀器：UV-VIS，加石英聚焦鏡；激光熒光 實(shí)驗(yàn)室：質(zhì)譜，電分析 12.3.5清洗系統(tǒng) 一般用負(fù)壓法，NaOH洗液，減少吸附 清洗對重現(xiàn)性影響重大,12.4分類 常規(guī)區(qū)帶電泳（CZE） 膠束電動毛細(xì)管色譜（MECC） 毛細(xì)管離子分析,12.4.1常規(guī)區(qū)帶電泳（CZE）

4、 電解質(zhì)緩沖液，正高壓 分離陽離子和大分子陰離子 可控制變量： 操作電壓 電解液 柱長,12.4.2膠束電動毛細(xì)管色譜（MECC） 揉合了毛細(xì)管電泳和液相分配色譜的原理，將表面活性劑加到電解液中，溶質(zhì)分子進(jìn)入體系后在膠束相和水相之間進(jìn)行分配，不同的溶質(zhì)分子因電泳速度和分配系數(shù)的不同而分離。,MECC體系存在著類似于色譜的兩相，一是流動的水相，另一相是移動的“固定相”膠束相，溶質(zhì)在這兩相之間分配。 主要用于分離中性分子，正高壓 中性分子單靠電滲流，能移動，但不能分離。 沒有分配上的差異是不行的。,表面活性劑的濃度足夠大時，單體結(jié)合在一起，形成一個球體，稱為膠束，這個足夠大的濃度稱為臨界濃度。,1

5、2.4.3 毛細(xì)管離子分析 加電滲流改性劑使電滲流反向，用于淌度很大的離子的分離，主要是無機(jī)陰離子的分離。負(fù)高壓 。 加陽離子表面活性劑，e.g.十六烷基三甲基溴化銨,12.5應(yīng)用及前景 特點(diǎn)： A、分離效率高：104理論塔板數(shù)，接近GC B、 分離速度快：優(yōu)于LC，接近GC C、進(jìn)樣量少：nL D、可分離GC受限制的物質(zhì),應(yīng)用： A、藥物分析：旋光異構(gòu)體 B、 生化分析：氨基酸衍生物、蛋白、DNA C、環(huán)境分析：PAH、陰離子、酚 弱點(diǎn)： 檢測器的絕對靈敏度高，但濃度靈敏度僅為10-6,發(fā)展趨勢： A、檢測器的創(chuàng)新 B、預(yù)濃縮富集技術(shù) 利用電泳原理富集陰陽離子 C18 等吸附劑在線應(yīng)用 C、移植成熟的液相色譜技術(shù)于毛細(xì)管電泳中,發(fā)展趨勢： D、微流控分析，F(xiàn)IA 與CE 的結(jié)合