1、,第六組 錢龍,項目二 丙種球蛋白的制備,概述,預防病毒性傳染病。丙球中含甲肝抗體可有效地預防甲型肝炎。但對己發(fā)病者無效。,治療免疫缺陷病如先天性丙球缺乏癥、易變型免疫缺陷癥、免疫球蛋白合成異常的細胞缺陷癥。,治療大面積燒傷、嚴重創(chuàng)傷感染以及敗血癥或內毒素血癥早期給予大劑量丙球可使死亡率顯著下降。,性質,人免疫球蛋白的生物半衰期為1624天。,凍干制劑應為白色或灰白色的疏松體，液體制劑和凍干制劑溶解后，溶液應為接近無色或淡黃色的澄明液體，微帶乳光。但不應含有異物或搖不散的沉淀。,注射丙種球蛋白是一種被動免疫療法。它是把免疫球蛋白內含有的大量抗體輸給受者，使之從低或無免疫狀態(tài)很快達到暫時免疫保護

2、狀態(tài)。,電泳的基本原理,電泳帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis)。 電泳技術指利用電泳現(xiàn)象對混合物進行分離分析的技術。 應用： 1、分離各種有機物：如蛋白質、酶、核酸等 2、分析某種物質的純度及分子量 3、電泳技術與層析法結合可用于物質的結構分析 4、免疫電泳可提高對蛋白質的鑒別能力,影響電泳速度的因素：,樣品本身：帶電量，分子大小，形狀 電場強度：電壓 電泳介質的pH和離子強度 電滲作用,實驗器材,試劑 牛血清樣品、分離膠緩沖液、凝膠溶液、四甲基乙二胺、10%過硫酸銨（AP）、電極緩沖液、固定液、染色液、脫色液,儀器 圓盤電泳槽、電泳

3、儀、電泳玻璃管、滴管、燒杯、刻度吸管、加樣槍、注射器等。,步驟：,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,1.裝管 取一根潔凈的電泳玻璃管 ，將一端垂直插入橡皮墊 2. 配膠 按右表配置膠液 并混勻。 備用。,操作步驟,3.灌膠及封膠 將混勻好的膠液，用滴管緩慢注入玻璃管，當加 到液面距離電泳玻璃管上口 1cm 時停止。注意 在加的過程中不要混進空氣， 隨即用注射器經針頭沿凝膠管壁緩慢加入蒸餾水 至管滿，防止氧化，室溫下聚合15-20min。,4.制樣 取血清30ul，

4、加0.025%溴酚藍5ul，20%蔗 糖65ul，混勻即可。 5.點樣 等膠完全凝結后，用濾紙小心吸去表面的水層（切勿 破壞膠面的完整性）。 將制好的膠管裝入電泳槽中調節(jié)高度并塞緊，然后分 別在電泳槽的上下槽體內注入電泳緩沖液，下槽的液面 應沒過玻璃管的下管口及電極絲，上槽的液面應沒過玻 璃管口0.5-1cm；排氣泡。 用微量注射器或加樣槍吸取 50l 樣品小心的加入 玻璃管內（注意不要讓樣品溢出管口）。,6電泳 （ 1 ）電流電壓條件 圓盤電泳：剛接通電源時，直流穩(wěn)流電流強度通常為1mA/ 管，10分鐘后直流穩(wěn)流電流強度通常為 4mA/ 管 。 （ 2 ）電泳時間 一般約需 2.5 小時。樣

5、品中溴酚藍電泳至距分離膠前緣約 1cm 處時即可停止電泳。 7.剝膠 電泳結束后，取下玻璃管，用帶長針頭的注射器（內盛蒸餾水）從濃縮膠一端緊貼玻璃管壁緩慢插入針頭，一面注入蒸餾水一面緩慢旋轉玻璃管?？克鞯膲毫蜐櫥饔檬鼓z和玻璃管的內壁分開，待水流從另一端流出時，再慢慢將針頭退出（注意操作中不要把膠條攪碎）。然后用洗耳球輕輕在膠管的一端加壓，將膠條從玻璃管中緩慢滑出（置培養(yǎng)皿中）。,8.固定 剝膠完畢后，將膠條置于固定液中固定20-30 分鐘。 9.染色 將膠條放入考馬斯亮藍染色液中，室溫染色 50-60分鐘。 10.脫色 將膠條以自來水沖洗兩次，然后在脫色液中脫 色約 10 分鐘，共3次

6、（脫色過程需振搖，如脫 色效果不好，則需過夜）。,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,（1）觀察結果 脫色完全后（背景清晰），觀察區(qū)帶的 數(shù)量、大小、顏色深淺等，記錄（畫圖） （2）分析,標準結果,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience, 2 1 清蛋白,注意事項,1丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經毒性試劑，對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。,2制膠時