1、實驗室注意事項,安靜有序，不要大聲喧嘩 禁止在實驗室喝水吃東西 時刻警惕生物污染 生物污染垃圾放入黃色塑料袋 實驗完畢將器材放入指定收集位置 實驗結(jié)束將自己的實驗臺打掃干凈 每組組長安排2人值日 不得遲到早退，實習(xí)過程必須穿白大衣,血液一般檢查General Examination Of Blood,北醫(yī)三院檢驗科 Department of laboratory medicine , Peking University Third Hospital,Content,血液標(biāo)本采集、涂片、染色 全血細(xì)胞計數(shù)（CBC）、三分類 顯微鏡下白細(xì)胞分類,1.血液標(biāo)本采集Blood specimen co

2、llection,熟悉毛細(xì)血管與靜脈穿刺采血方法 掌握真空采血管的種類與正確使用 正確分析檢驗結(jié)果與血液標(biāo)本采集的關(guān)系,血標(biāo)本采集器材,毛細(xì)血管采血 一次性采血針 一次性微量吸管 消毒棉簽 安爾碘皮膚消毒劑,靜脈穿刺采血 一次性采血針 持針器 止血帶 枕墊 消毒棉簽 安爾碘皮膚消毒劑 真空采血管,真空采血管 Vacuum tube,毛細(xì)血管采血Specimen collection by capillary puncture,實質(zhì)是微動脈、微靜脈和毛細(xì)血管的混合血，含有細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。 用血量少，適用于嬰兒、大面積燒傷、需頻繁采血進(jìn)行檢查的病例。 多選擇手指或耳垂部位采血。 穿刺必須夠深，

3、使血液自行流出或僅輕施壓力即可流出。 微量吸管的容量必須準(zhǔn)確，內(nèi)腔一定要干燥，否則會影響吸血量和導(dǎo)致溶血。,靜脈穿刺采血Specimen collection by venipuncture,靜脈采血法適用于用血量較多的檢查項目。 靜脈血標(biāo)本代表性大，各項成分相對穩(wěn)定，可反映病人整體狀態(tài)，可廣泛用于各項檢查。 如果發(fā)生暈針，立即拔針，平臥休息。 體表淺靜脈幾乎都可以作為采血部位，通常采用肘部靜脈。 注意受檢者采血的體位、情緒、運動狀態(tài)、使用某些藥物等因素。 真空采血過程無血液外溢和污染，運送方便。封閉狀態(tài)，無需容器間轉(zhuǎn)移，減少溶血，避免環(huán)境暴露的影響。,2. 全血細(xì)胞計數(shù)（CBC）,了解血液分

4、析儀的各項參數(shù)、參考值、操作方法與結(jié)果分析 。 熟悉血細(xì)胞計數(shù)板的使用方法。 掌握血涂片的制備和瑞特-吉姆薩染色。 掌握顯微鏡法外周血分類計數(shù)的方法、各種WBC的正常形態(tài)。,血液分析儀Hematology Analyer,兩大功能 細(xì)胞計數(shù)功能 細(xì)胞分類功能 原理 電阻抗法 光散射法,Sysmex KX-21 ：三分群 Beckman Coulter STKS ：五分類,電阻抗原理Principle of electrical impedance,Coulter principle 根據(jù)血細(xì)胞相對非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒，在通過計數(shù)小孔時可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對血細(xì)胞進(jìn)行

5、計數(shù)和體積測定。,電阻抗原理計數(shù)Principle of electrical impedance,將等滲電解質(zhì)溶液稀釋的細(xì)胞懸液置入不導(dǎo)電的容器中，將小孔管（transducer）插進(jìn)細(xì)胞懸液中。 小孔管內(nèi)充滿電解質(zhì)溶液，并有一個內(nèi)電極，小孔管的外側(cè)細(xì)胞懸液中有一個外電極。 接通電源后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流。 當(dāng)細(xì)胞通過小孔時，瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個脈沖信號。 脈沖大小反映細(xì)胞體積大小，脈沖數(shù)量代表細(xì)胞數(shù)量。,Sysmex KX-21,電阻抗原理分類（三分群）,不同體積的白細(xì)胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖大小有明顯差異，根據(jù)這些脈沖大小，可對白細(xì)胞進(jìn)行分群。 小細(xì)胞區(qū)：主要是淋巴細(xì)

6、胞 單個核細(xì)胞區(qū)(也 稱作中間細(xì)胞) :主要包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞 大細(xì)胞區(qū)：主要是中性粒細(xì)胞,容量、電導(dǎo)、光散射檢測原理（VCS） Volume conductivity light scantter,Volume：應(yīng)用電阻抗原理測量細(xì)胞體積 Conductivity：根據(jù)細(xì)胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能，采用高頻電磁探針，測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的比例、細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和密度，來辨別體積相同，但性質(zhì)不同的兩個細(xì)胞群體。 Light scatter:來自激光的單色光直接掃描進(jìn)入計數(shù)敏感區(qū)的每一個細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生的不同角度的散射光(1070)，可提供細(xì)胞形態(tài)、核結(jié)構(gòu)等

7、光散射信息，并能鑒別細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和質(zhì)量（粗顆粒的光散射比細(xì)顆粒更強）；光散射可區(qū)別粒細(xì)胞的類型。,Beckman Coulter STKS,血涂片制備Preparing blood smear,Wright-Giemsa solution ingredients,酸性染料伊紅（鈉鹽）和堿性染料美藍(lán)（氯鹽） 伊紅鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。 氯化美藍(lán)有色部分為陽離子，可與帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。 二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊紅化美藍(lán)溶液，既可以固定細(xì)胞又利于細(xì)胞蛋白質(zhì)選擇性地吸附其中有色離子而著色。 氯化美藍(lán)放置久后可氧化為天青，對細(xì)胞核染色加強，添上更多色彩，染色效果更好。,

8、Wright-Giemsa staining principle,血紅蛋白、嗜酸性顆粒均為堿性物質(zhì)，故與酸性染料伊紅結(jié)合而染成紅色。 細(xì)胞核的核蛋白與原、幼細(xì)胞的胞質(zhì)為酸性物質(zhì)，故與堿性染料美藍(lán)和天青相結(jié)合，染成深藍(lán)色或深紫紅色。 中性顆粒與美藍(lán)和伊紅同時結(jié)合而染為淡紫紅色。 瑞氏染粉是由伊紅化美藍(lán)組成，對胞質(zhì)及中性顆粒的著色性極佳，面姬姆薩染粉由天青、伊紅組成，對細(xì)胞核著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰。 蛋白質(zhì)所帶電荷隨溶液的 pH而定。故為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制pH6.46.8的緩沖液。,Wright-Giemsa staining procedure,滴加瑞-姬復(fù)合染液數(shù)滴于血涂

9、片上（以蓋住血膜為度），靜置約半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血細(xì)胞。 加相當(dāng)于染液2倍量的緩沖液充分混勻。 染色約l0min，用水沖去染液，干燥后鏡檢。,白細(xì)胞分類計數(shù)White blood cell differential count,DC,先用低倍鏡選好薄厚適宜、染色良好、細(xì)胞分布均勻處，再用油浸鏡觀察。 通常計數(shù)100個白細(xì)胞。 按圖所示方向移動血涂片，將所遇到的各類白細(xì)胞分別記錄，直到計數(shù)100個白細(xì)胞為止。 計算每類白細(xì)胞的數(shù)目，即其百分?jǐn)?shù)值。,Neutrophils (band) 15% Neutrophils (segmented) 5070% Eosinophils

10、0.55% Basophils 0-1% Lymphocytes 20-40% Monocytes 38%,血細(xì)胞形態(tài)學(xué)識別規(guī)律,原則：核漿兼顧，以核為主 次序：胞體、胞漿、胞核、核仁,紅細(xì)胞形態(tài),紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis),紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常 Howell-Jolly body,Cabot ring,球形紅細(xì)胞 橢圓形紅細(xì)胞,口形紅細(xì)胞 棘形紅細(xì)胞,靶形紅細(xì)胞,淚滴形紅細(xì)胞,鐮形紅細(xì)胞,鋸齒形紅細(xì)胞 棘形紅細(xì)胞,紅細(xì)胞緡錢狀形成,Neutrophils,胞體1015m 胞漿量多，淡紅色，含許多淡紫紅色小顆粒 胞核 band 凹陷的程度超過核直徑的一半，核最窄徑大于最寬徑的1/3，

11、核彎曲成帶形、S形、U形、W形等。核染色質(zhì)粗糙，濃集成小塊狀，染色不均勻。 Segmented 通常分25葉，彼此間有較細(xì)的核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3 。核染色質(zhì) 粗糙。,Lymphocyte,Large lymphocyte 胞體1218m，圓形。胞漿天藍(lán)色，透明，可有少數(shù)較大的嗜苯胺藍(lán)顆粒。胞核類圓形，核染色質(zhì)固縮成一團(tuán)，染成紫紅色，著色比小淋巴細(xì)胞為淡。有時刻隱約可見核仁痕跡。 Small lymphocyte 胞體510m，圓形或橢圓形。胞漿甚少，幾近無漿，或在核凹陷側(cè)可見少量藍(lán)色胞漿，顆?？捎锌蔁o，常因胞漿過少而看不到顆粒。胞核占細(xì)胞的極大部分，圓形或豆形，核染色質(zhì)

12、凝縮，染成紫紅色，無核仁。,Monocytes,胞體圓形或不規(guī)則形，1220m 胞漿較多，淡灰藍(lán)色，可見灰塵洋細(xì)微紅色或紅紫色顆粒（嗜苯胺藍(lán)顆粒） 胞核呈腎形、馬蹄形或分葉狀等，有的扭曲折疊，偶見圓形核的。染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，染紫紅色。 無核仁，偶見核仁遺跡。,Eosinophils,胞體1018m 充滿等大圓形桔紅色顆粒 胞核 band 呈彎曲桿狀、馬蹄形，核最窄徑大于最寬徑的1/3，核染色質(zhì)粗糙。 Segmented 多為2葉，呈雙逗點狀，也有35葉。葉間有核絲或較粗的核橋，核最窄徑小于最寬徑的1/3 。核染色質(zhì) 粗糙。,Basophils,胞體1014m ，類圓形 胞漿淡藍(lán)色，常被顆粒所掩蓋，顆粒大小不等，形態(tài)不規(guī)則，染成紫褐色、藍(lán)很色或暗紅色，