1、大學2003級碩士研究生,開題報告,研究生 導 師,Therapeutic Effects of Capsule TONGBI on Human Knee Osteoarthritis and Its Influence on the mRNA Expression Of Chondrocytes Type II Collagen in A Rat Model,痛痹膠囊對大鼠膝軟骨細胞型膠原基因轉錄的影響及治療膝骨關節(jié)炎臨床療效觀察,課題名稱,研究目的與意義,文獻綜述,選題依據(jù),科研假說與技術構思,研究方法和技術路線,指導人員,計劃進度,研究基礎,預期成果,目 錄,文獻資料,2020/9/13

2、,4,研究目的,證明痛痹膠囊通過整體調節(jié)作用能夠上調軟骨細胞型膠原mRNA的表達、調節(jié)關節(jié)軟骨基質膠原的生成與降解的平衡、促進軟骨細胞增殖 證明痛痹膠囊的軟骨保護劑樣作用 通過隨機、平行、對照臨床觀察進一步證明其臨床療效,2020/9/13,5,骨關節(jié)炎定義,骨關節(jié)炎是以進行性關節(jié)透明軟骨變性、破壞及喪失，關節(jié)軟骨及軟骨下骨邊緣骨贅形成為特征的骨關節(jié)病變。 骨關節(jié)炎的最新定義：在力學和生物學因素共同作用下導致軟骨細胞、細胞外基質以及軟骨下骨三者降解和合成正常耦聯(lián)失衡的結果，并伴有不同程度的滑膜炎癥。,Kelley WN，Ruddy S，Harris ED，et al.Textbook of R

3、heumatology.15th ed. Philadelphia：Saunders，1997，1 3691 382,2020/9/13,6,國內外研究現(xiàn)狀、水平和發(fā)展趨勢,最新流行病學統(tǒng)計,發(fā)病機制研究進展,治療進展,中醫(yī)藥研究進展,討論,2020/9/13,7,最新流行病學統(tǒng)計,全世界大約有1.9億骨性關節(jié)炎患者 據(jù)世界衛(wèi)生組織一份調查表明，50歲以上的人群中，各種骨關節(jié)炎發(fā)病率占6070 我國患有OA的人數(shù)占總人口的3% 美國，總人口中的15%患關節(jié)炎，其中43%為，達1600萬,高發(fā)病率,骨關節(jié)炎發(fā)病機制研究進展,透明軟骨,軟骨細胞,軟骨基質,膠原,蛋白聚糖,金屬蛋白酶（MMP）,IL

4、-1 TNF-a NO .,破壞,軟骨細胞,基質,膠原,蛋白聚糖,增齡 磨損 創(chuàng)傷 生化代謝異常 免疫紊亂 遺傳變異 等,軟骨降解酶（MMPs） 細胞因子 (IL-1,TNF-,)等,分解,合成,2020/9/13,11,膠原蛋白,目前能從正常成年關節(jié)軟骨和軟骨細胞培養(yǎng)基中提取的膠原有5種：型膠原、膠原、型膠原、型膠原、型膠原,結構圖,2020/9/13,12,膠原生理,各型膠原在軟骨內的排列高度有序，表現(xiàn)在型膠原、型膠原、型膠原組成的軟骨內纖維網(wǎng)架結構 該網(wǎng)架結構構成軟骨的骨架，如遭到破壞，軟骨就不能維持正常的結構和功能 型膠原構成纖維網(wǎng)架結構中的主體 生理狀況下，軟骨基質膠原的合成和降解維

5、持動態(tài)平衡。 膠原的合成分細胞內和細胞外兩個階段，受軟骨細胞調控。,2020/9/13,13,OA關節(jié)軟骨膠原的變化,輕度損傷所致骨關節(jié)炎軟骨中，軟骨細胞代謝活躍，合成代謝增強，型膠原合成增加，同時伴有型膠原增加； 中度損傷所致骨關節(jié)炎軟骨中，型膠原在中間層、深層的合成和變性增強，以合成為主； 重度損傷所致骨關節(jié)炎軟骨中，型膠原變性、溶解的速度明顯大于合成，使得型膠原纖維的數(shù)量明顯減少，主要位于單個和簇聚軟骨細胞周圍,2020/9/13,14,OA關節(jié)軟骨膠原的變化,型膠原總量丟失 型膠原表達的改變,2020/9/13,15,參與OA發(fā)病的其他病理機制,軟骨降解酶 細胞因子 自由基 免疫紊亂

6、骨內高壓,2020/9/13,16,治療進展非藥物治療,(1) 病人教育；(2) 自我調理；(3) 通過電話聯(lián)系以得到社會支持；(4) 減輕體重(如果超重的話)；(5) 戶外鍛煉；(6) 物理治療；(7) 增加關節(jié)活動范圍的鍛煉；(8)增強肌力的鍛煉；,(9) 行走的輔助裝置；(10) 穿刺抽液；(11) 選擇合適的鞋襪；(12)鞋底外側加墊(對膝內翻者)；(13) 使用支架；(14) 職業(yè)療法；(15) 保護關節(jié)和保存能量；(16) 使用日常生活活動的輔助裝置。,American college of Rheumatology Subcommittee on Osteoarthritis.

7、Recommendations for the medicial management of osteoarthritis of the hehipand knee. Arthritis Rheum，2000，43(9)：19051915.,2020/9/13,17,治療進展藥物治療,控制癥狀的藥物 改善病情藥物及軟骨保護劑 晚近，治療骨關節(jié)炎的策略主要集中在：金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）、啟動軟骨細胞修復和軟骨生長的刺激劑、細胞因子抑制劑、NO合成酶抑制劑等。,2020/9/13,18,控制癥狀的藥物,對乙酰氨基酚 國外推薦首選 非甾體抗炎藥（NSAIDs） 值得關注的是，一些研究發(fā)現(xiàn)某

8、些NSAIDs藥如阿司匹林、水楊酸、保泰松、吲哚美辛和萘普生等對關節(jié)軟骨基質蛋白聚糖合成有抑制作用，加速軟骨退化，不利于OA，故不宜選用，至少不應長期使用,2020/9/13,19,改善病情藥物及軟骨保護劑,硫酸氨基葡萄糖 （維骨力）許多短程和長程隨機雙盲對照觀察GS治療膝OA的結果都提示，該產(chǎn)品既能抗炎止痛，又有延緩膝OA發(fā)展的作用。被認為是第一個改變OA病情的藥物。 其他SOD（自由基）、四環(huán)素族抗生素（軟骨基質金屬蛋白酶抑制物）、葡糖胺聚糖（外源性軟骨基質成分）、S腺苷基蛋氨酸（促進蛋白聚糖合成及軟骨細胞分化）、阿侖磷酸鹽（固邦，雙膦酸鹽類，抑制軟骨及骨質吸收）、合成基質金屬蛋白酶抑制物

9、(U24522)、轉化生長因子B、胰島素樣生長因子2（促進軟骨修復的細胞固子）、 VitC、 VitK（保護軟骨）,2020/9/13,20,選題依據(jù),中醫(yī)經(jīng)典醫(yī)著記載的治療骨痹的效方甚多，備急千金要方中的“獨活寄生湯”具有益肝腎、補氣血、祛風濕、止痹痛之功，頗切合骨關節(jié)炎的病機。 痛痹膠囊是對千古名方獨活寄生湯進行化裁，在補益肝腎的基礎上重用活血化瘀，兼以祛風除濕、加用化痰、滋陰之品。,2020/9/13,21,選題依據(jù),前期臨床研究表明:20例治療組與10例維骨力對照組進行比較，痛痹膠囊能明顯減少骨關節(jié)炎者疼痛、腫脹、壓痛程度，療效較好，治療組有效率達95%，且無其他不良反應。 動物實驗證

10、明:痛痹膠囊對致炎大鼠關節(jié)炎模型具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并可改善急性血瘀大鼠的血液流變學，具有一定的活血化瘀作用；對老年鼠血液SOD和MDA含量的影響實驗表明痛痹膠囊具有較好的抗氧化作用,2020/9/13,22,課題研究內容,實驗研究,臨床研究,理論研究,2020/9/13,23,痛痹膠囊血清對體外培養(yǎng)大鼠膝關節(jié)軟骨細胞型膠原基因轉錄的影響實驗研究,痛痹膠囊血清藥理學研究,軟骨細胞培養(yǎng),軟骨細胞損傷模型的制備,痛痹膠囊血清對軟骨細胞增殖的影響,痛痹膠囊血清對軟骨細胞型膠原mRNA表達的影響,2020/9/13,24,痛痹膠囊血清對軟骨細胞型膠原mRNA表達的影響,引物設計與合成 總RNA的

11、提取 RNA的濃度測定 總RNA逆轉錄成第一鏈cDNA PCR擴增 1瓊脂糖凝膠電泳,2020/9/13,25,臨床研究,診斷標準,中醫(yī)癥候標準,病情進展分期,病情輕重分級,納入標準,隨機分組,治療方法,觀察指標,療效判定標準,統(tǒng)計學處理,2020/9/13,26,病例數(shù)計算,采用樣本含量計算軟件NCSS2002進行 根據(jù)文獻的資料及前期的臨床工作，4周治療后WOMAC指數(shù)下降16，標準差在20.5為標準療效評估，每組30例患者的樣本，power為80%，為0.05是已足夠能比較出痛痹膠囊組和對照藥組間的統(tǒng)計學差異 理論上計算最少每組30例的樣本量已可以達到80%的統(tǒng)計權力,2020/9/13

12、,27,盲法設計,試驗設計為隨機、西藥軟骨保護劑（維骨力，意大利羅達藥廠）對照，因為西藥對照藥維骨力如做成與中藥對照同劑型及外觀、用量，則存在生物利用度差異，難以雙盲。 但在負責 WOMAC 評估的醫(yī)生中仍進行盲法設計。,2020/9/13,28,隨機化與隨機數(shù)字隱藏,將全部入選患者按就診順序編號 隨機數(shù)字來自NCSS2004專業(yè)軟件，采用區(qū)組隨機化分組方法 采用“信封法”將隨機化分配序列進行隱藏,2020/9/13,29,相關要點說明,根據(jù)OA治療周期和相關國際臨床試驗（CLASS和VIGOR試驗），擬定本次臨床研究療程為4周。Silverstein FE, Faich G, Goldste

13、in JL, et al. Gastrointestinal toxicity with celecoxib vs nonsteroidal anti-inflammatory drugs for osteoarthritis and rheumatoid arthritis: the CLASS study: a randomized controlled trial. JAMA. 2000;284:1247-1255. Bombardier C, Laine L, Reicin A, et al. Comparison of upper gastrointestinal toxicity

14、of rofecoxib and naproxen in patients with rheumatoid arthritis. VIGOR study group. N Engl J Med. 2000;343:1520-1528. 目前治療OA替代醫(yī)學類藥物停藥后追蹤的報道較少，且缺乏與西藥對比的數(shù)據(jù)，因此本研究有理由在停藥后設置2周的追蹤時間,2020/9/13,30,觀察指標和方法,安全性觀察 一般體檢項目 血、尿、便常規(guī)化驗，試驗前后各查一次。 肝、腎功能檢查，試驗前后各查一次。 不良反應。 療效性觀測相關癥狀、體征，VAS疼痛指數(shù)，WOMAT關節(jié)炎指數(shù)，起效時間。,2020/9/1

15、3,31,可行性分析,本課題是在大量查閱國際國內最新相關文獻資料，并結合相關的前期工作的基礎上，采用了多種學科、多種技術相結合的綜合性研究方法，從而保證了立題的新穎性、科學性和可靠性。 理論上依據(jù)充分 本課題實驗中所需應用的細胞培養(yǎng)、引物設計、RTPCR、血清藥理學等先進技術，通過前期實驗，均能熟練掌握。完全具備完成本研究的技術力量。,2020/9/13,32,計劃進度,第一階段：（2005.52005.6）準備階段，調研及資料檢索。按課題設計首先申購實驗用各種試劑（盒）。準備臨床病例觀察表。 第二階段：（2005.62006.3）按照課題設計，完成全部實驗及病例臨床觀察工作。 第三階段：（2006.3-2006.5）資料匯總、總結、處理數(shù)據(jù)、分析與研究成果撰寫論文。,2020/9/13,33,預期研究成果,理論上系統(tǒng)總結骨關節(jié)炎中醫(yī)文獻、病因病機、治法方藥，提出骨痹發(fā)病“腎虛血瘀”新見解，發(fā)展中醫(yī)理論，為痛痹膠囊防治骨關節(jié)炎提供理論依據(jù)。