1、HPV DNA分型與臨床,2,內(nèi)容一覽,HPV與宮頸癌,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,知識(shí)要點(diǎn),1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,3,1,2,3,4,知識(shí)要點(diǎn),HPV是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必要條件 HPV亞型眾多，不同亞型具有不同致病能力 HPV DNA分型檢測(cè)應(yīng)用于宮頸癌篩查，能夠?qū)m頸癌早期篩查的檢出率提升至98%100% 權(quán)威組織推薦：采用細(xì)胞學(xué)和HPV DNA分型聯(lián)合檢測(cè)篩查宮頸癌， HPV DNA分型液芯， 26種亞型1次呈現(xiàn)，分型明確，,4,內(nèi)容一覽,HPV與宮頸癌,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,知識(shí)要點(diǎn),1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,5,HPV與宮頸癌,無(wú)包膜微小

2、DNA病毒 二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu) 表面有72個(gè)殼體,HPV 的基本特性,6,1,2,3,4,HPV與宮頸癌,廣泛分布 種屬特異性 組織特異性 嗜上皮病毒 皮膚、粘膜、化生,HPV 的基本特性,7,1,2,3,4,HPV的基因組特征,HPV與宮頸癌,8,1,2,3,4,HPV的基因組特征,雙鏈共價(jià)閉合的DNA分子，7.9kb E早期轉(zhuǎn)錄功能區(qū)（或稱早期基因區(qū)） E1 (病毒DNA復(fù)制因子) E2 (DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄控制因子) E4（與病毒成熟胞質(zhì)蛋白有關(guān) ） E5 （調(diào)節(jié)生長(zhǎng)控制機(jī)制 ） E6 (分解p53) E7 (結(jié)合pRB) E3、E8并非所有亞型的基因組都有 L （晚期轉(zhuǎn)錄功能區(qū)（或稱

3、晚期基因區(qū)） ） L1 （主要衣殼蛋白） L2 （次要衣殼蛋白） URR上游調(diào)節(jié)區(qū)，或長(zhǎng)控制區(qū)（LCR）或非編碼區(qū)（NCR）,干擾細(xì)胞增殖周期,HPV與宮頸癌,9,1,2,3,4,HPV的分類(lèi)與分型,根據(jù)感染部位劃分 皮膚型 生殖道型 根據(jù)與宮頸癌相關(guān)性劃分 低危型：6、11、40、42等 高危型：16、18、31、33等 根據(jù)L1 、 E6、E7等多態(tài)性基因位點(diǎn)開(kāi)放 閱讀框（ORF）之間的同源性進(jìn)行分型 同源性90% 100 35 20,HPV與宮頸癌,10,1,2,3,4,HPV的感染途徑,直接性接觸傳染 母嬰傳染 間接物體傳染 自體接種,HPV與宮頸癌,11,1,2,3,4,HPV的繁殖

4、及其致病作用,促細(xì)胞增殖作用 病毒的大量快速增殖 良性：疣類(lèi)疾病 病毒DNA與宿主細(xì)胞DNA的親和力 惡性：多種癌癥,HPV與宮頸癌,12,1,2,3,4,高危型HPV的致癌過(guò)程,HPV與宮頸癌,13,1,2,3,4,HPV的亞型與所致疾病,HPV與宮頸癌,14,1,2,3,4,HPV感染的可能轉(zhuǎn)歸,HPV與宮頸癌,HPV感染,其它疣類(lèi)疾病,宮頸炎、宮頸糜爛、CIN I,宮頸癌、陰莖癌、外陰癌、肛門(mén)癌等,高、低危型HPV,高危型HPV,尖銳濕疣,15,1,2,3,4,HPV感染與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,出現(xiàn)HPV相關(guān)的細(xì)胞學(xué)改變,正常宮頸,高度鱗狀上皮內(nèi)病變 (HSIL,CIN II, III/CI

5、S),宮頸浸潤(rùn)癌,HPV 感染,高危HPV亞型 協(xié)同致癌因素,約60%在2到3年內(nèi)自然逆轉(zhuǎn),30%-70% 在10年內(nèi)演變?yōu)?低度鱗狀上皮內(nèi)病變 (LSIL, CIN I),約 15% 在3-4年內(nèi)演變?yōu)?HPV與宮頸癌,16,1,2,3,4,宮頸癌前病變各期及宮頸癌的病理模式圖,HPV與宮頸癌,正常宮頸 輕度不典型增生 中度不典型增生 重度不典型增生 浸潤(rùn)癌 CIN I CIN II CIN III/CIS Invasive CA,17,3,陰道鏡下宮頸癌前病變各期及宮頸癌的表現(xiàn),HPV與宮頸癌,1,2,4,18,內(nèi)容一覽,HPV與宮頸癌,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,知識(shí)要點(diǎn),1,2,3,4

6、,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,19,1,2,3,4,女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌 全世界每年近50萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，80%發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家 我國(guó)每年13萬(wàn)新發(fā)病例，近2萬(wàn)人死于宮頸癌 宮頸癌年輕化趨勢(shì),宮頸癌發(fā)病情況,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,20,1,2,3,4,病程長(zhǎng) 宮頸解剖位置特殊，便于治療 早診早治是關(guān)鍵： 癌前病變的治愈率可達(dá)100%，原位癌的5年生存率為100，早期癌為90-92，而浸潤(rùn)癌的5年生存率僅為67,宮頸癌可防可治,有效的篩查方法,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,21,細(xì)胞學(xué) 傳統(tǒng)巴氏細(xì)胞學(xué)涂片 液基細(xì)胞學(xué)（liquid-based cytology ） 細(xì)胞學(xué)自

7、動(dòng)閱片系統(tǒng)(PAPNET ，AutoPap) 肉眼法 (visual inspection) 醋酸白試驗(yàn)：用3%5%的冰醋酸染色，簡(jiǎn)稱VIA（visual inspection with acetic acid） 碘黃試驗(yàn)：用4% 5%的碘液染色，簡(jiǎn)稱VILI (visual inspection with Lugols iodine) 陰道鏡檢查 (Colposcopy) 病原學(xué)檢測(cè) 免疫學(xué) HPV DNA 檢測(cè),HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,宮頸癌篩查方法,1,2,3,4,22,1,2,3,4,HPV DNA檢測(cè)方法,直接核酸探針?lè)?原位雜交 Southern印跡雜交 雜交信號(hào)放大法 HPV

8、 DNA雜交捕獲 (HC II) 目的片段擴(kuò)增法（基于PCR的檢測(cè)方法） 低通量方法 PCR，熒光定量PCR 高通量方法 膜芯片、液態(tài)芯片,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,23,1,2,3,4,早期診斷 取材方便 結(jié)果客觀,HPV DNA檢測(cè)的優(yōu)勢(shì),HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,24,1,2,3,4,HPV DNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,Chavel C ,et al Br J Cancer,2001,84:1616-1623,25,1,2,3,4,權(quán)威組織一致推薦：采用細(xì)胞學(xué)檢查和HPV DNA聯(lián)檢進(jìn)行宮頸癌篩查。,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,26,1,2,3,4,我

9、國(guó)的宮頸癌篩查推薦方案,經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)： 醫(yī)生取材HPV DNA檢測(cè)液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT） 經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)： 醫(yī)生取材HPV DNA檢測(cè)傳統(tǒng)巴氏圖片 貧困地區(qū)： 肉眼觀察（VIA）,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,引自：宮頸癌篩查及早診早治方案/喬友林等. 2003.7,27,1,2,3,4,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,引自：宮頸癌篩查及早診早治方案/喬友林等. 2003.7,宮頸癌篩查處置流程,28,1,2,3,4,1977年，在宮頸癌活檢組織中發(fā)現(xiàn)HPV病毒顆粒，提出了HPV感染與宮頸癌關(guān)系的假設(shè) 100%的宮頸癌患者的HPV感染為陽(yáng)性 高度病變（CIN 2 和CIN 3）中約97%為陽(yáng)性 低

10、度病變（ CIN 1）中的陽(yáng)性率亦達(dá)61.4% HPV 感染的相對(duì)危險(xiǎn)度（比數(shù)比，OR） 在宮頸上皮內(nèi)高度病變/癌癥(CIN 2)： 254.2 低度病變(CIN 1)：26.4,宮頸癌病因?qū)W研究進(jìn)展,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,29,宮頸癌病因?qū)W研究進(jìn)展,1995年，IARC專題討論會(huì)確定了HPV是女性宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)高度瘤變（CIN /）發(fā)生的必要條件,HPV 檢測(cè) 用于宮頸癌篩查,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,1,2,3,4,30,1,2,3,4,不同HPV亞型與宮頸癌發(fā)病之間的關(guān)系,HPV總感染率與宮頸癌發(fā)病率之間的矛盾 高危HPV感染率 低危HPV亞型僅導(dǎo)致CIN I、尖銳濕疣等良性

11、病變 高危HPV亞型所致的CIN I、尖銳濕疣病變可能演變成CIN III、CIS、CC、陰莖癌、外陰癌、肛門(mén)癌、炎喉癌等多種惡性病變 不同的高危HPV亞型之間，其致惡性病變能力是不一樣的 HPV 的型別還與宮頸癌的病理類(lèi)型有關(guān)，在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中以HPV16 為主（占51%），而在宮頸腺癌和宮頸腺鱗細(xì)胞癌中HPV18分別占56%和39%,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,31,1,2,3,4,HPV感染及宮頸癌發(fā)病率與年齡的關(guān)系,引自：宮頸癌篩查及早診早治方案/喬友林等. 2003.7,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,32,1,2,3,4,高危HPV感染率（）,山西省陽(yáng)城和襄垣兩縣3250 年齡組

12、婦女高危HPV感染情況,引自：宮頸癌篩查及早診早治方案/喬友林等. 2003.7,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,33,1,2,3,4,不同HPV亞型在宮頸癌中的分布,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,34,1,2,3,4,HPV亞型的地域/族群分布特點(diǎn),HPV16、18 型感染很普遍 部分HPV亞型存在鮮明的地域分布特點(diǎn) HPV45 型在非洲西部很常見(jiàn) HPV39 和 59 型僅在美洲的中部和南部出現(xiàn)， HPV52，58 在中國(guó)婦女中檢出率較高,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,35,不同HPV亞型的地域分布,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,1,2,3,4,36,1,2,3,4,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,20

13、05年2月，IARC確定了13種導(dǎo)致宮頸癌的高危HPV亞型，并明確提出在將HPV檢測(cè)用于宮頸癌篩查時(shí)必須考慮不同高危亞型間的致癌能力差異,宮頸癌病因?qū)W研究進(jìn)展,HPV 分型檢測(cè),37,內(nèi)容一覽,HPV與宮頸癌,HPV分型檢測(cè)與宮頸癌篩查,知識(shí)要點(diǎn),1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,38,1,2,3,4,如此眾多的HPV亞型， 如何準(zhǔn)確檢測(cè)并分型 ？,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,39,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,液態(tài)芯片,40,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,液態(tài)芯片,Luminex 100TM多功能流式點(diǎn)陣儀,41,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液

14、芯,液態(tài)芯片,42,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,液態(tài)芯片,43,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,液態(tài)芯片,44,1,2,3,4,低危型: 7種 6、11 40、42、44、53、54,高危型: 19種 16、18 31、33、35、39、45、52、58、26、51、55、56、59、61、66、68、73、83,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,26種亞型，一次呈現(xiàn),45,HPV DNA分型檢測(cè)液芯的操作步驟,30-40min,2.5hr,15min,40sec/sample,收集檢測(cè)部位的脫落細(xì)胞或病變組織細(xì)胞. 女性宮頸口樣品 采樣時(shí)，用棉拭子將宮頸口或尿道口過(guò)多的

15、分泌物輕輕擦拭干凈，然后取出取樣器，插入宮頸,緊貼宮頸口，用力轉(zhuǎn)動(dòng)五周，以取得足夠的脫落細(xì)胞供檢測(cè), 將取樣器放入裝有標(biāo)本保存液的瓶?jī)?nèi)振蕩洗滌幾次,盡量將細(xì)胞洗脫下來(lái)。蓋緊瓶蓋,做好標(biāo)記。 尿道口或其它可疑感染部位的樣品 皮損或切除的病變組織,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,1,2,3,4,46,透景HPV分型液芯檢測(cè)原理,采用X-Map技術(shù)，液態(tài)芯片平臺(tái)，一次反應(yīng)同時(shí)檢測(cè)26種HPV亞型。 26種編碼微球分別交聯(lián)相應(yīng)探針 PCR擴(kuò)增待檢測(cè)樣品 PCR產(chǎn)物和微球上交聯(lián)的探針雜交 Luminex 100多功能流式點(diǎn)陣分析儀上檢測(cè)熒光信號(hào)。,47,1,2,3,4,HPV DNA分型檢測(cè)液芯的適用人群,

16、人群普查: 有三年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女 高危人群篩查: 宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)異?；蚩梢傻幕颊?宮頸炎、宮頸糜爛患者 尖銳濕疣患者 男性尖銳濕疣患者的配偶 有不潔性生活史的患者 “特殊職業(yè)”婦女人群 免疫功能低下者：如HIV 陽(yáng)性、器官移植、化療患者,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,48,HPV DNA分型檢測(cè)液芯的臨床意義,HPV感染早于細(xì)胞學(xué)異常，早發(fā)現(xiàn)可指導(dǎo)醫(yī)生更早地預(yù)警宮頸癌 不同型別的HPV致病能力可能不同 宮頸癌患者年輕化趨勢(shì)明顯，低齡患者宮頸癌的發(fā)生可能與多重感染有關(guān) 與疫苗的使用和開(kāi)發(fā)密切相關(guān) HPV16和18是感染比例最高的2種亞型，目前已有針對(duì)HPV16和18的疫苗，弄清是何種亞型感染對(duì)治療致關(guān)重要,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,1,2,3,4,49,HPV分型檢測(cè)液芯的優(yōu)點(diǎn),囊括經(jīng)WHO認(rèn)定導(dǎo)致宮頸癌的全部13種高危HPV亞型 收錄其它13種常見(jiàn)對(duì)生殖道致病的HPV亞型 病例覆蓋面達(dá)99%以上,HPV DNA分型檢測(cè)液芯,1,2,3,4,50,1,2,3,4,HPV分型檢測(cè)液芯的優(yōu)點(diǎn),專利技術(shù)（200510030338.2）， 26種H