1、免疫組化結(jié)果判斷及常見問題分析,武漢大學(xué)病理學(xué)教研室 楊飛,肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細(xì)胞強(qiáng)陽性， 肝細(xì)胞呈不同層次陽性。,pan CK（AE1/AE3） 在肝臟理想的染色，采用了熱修復(fù)。 肝細(xì)胞膜、膽管強(qiáng)而清晰的著色。背景干凈。,一、特異性染色的判斷,1.特定的定位 細(xì)胞陽性根據(jù)靶抗原不同而呈現(xiàn)胞膜型、胞漿型 或胞核型 間質(zhì)陽性表現(xiàn)為細(xì)胞外著色，局限性或彌散性 2.染色的不均一性 陽性細(xì)胞的染色分布不均，片狀或點(diǎn)狀散在分布 染色強(qiáng)弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少 3.排除人為造成的非特異性染色 切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細(xì)胞壞死。 4.顆粒性顯色 DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均

2、勻著色。,免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化照片,合格的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提不合格的免疫組化染色切片容易導(dǎo)致誤判,C-erbB-2,優(yōu),良,中,差,4,3,2,1,ER,子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)不足 子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)良好,PR,二、染色結(jié)果的判斷,PCNA,S-P400,S-P400,1-day CM,4-day CM,陽性強(qiáng)度 2010視野下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，測(cè)100個(gè)陽性細(xì)胞的平均光密度即為此片的陽性強(qiáng)度。,三、結(jié)果分析,P53,陽性細(xì)胞百分比 計(jì)數(shù)100個(gè)瘤細(xì)胞，其中陽性細(xì)胞的比例： 5% （） 5%30% （） 30%50% （ ） 50% （ ）,PCNA,Barnes法

3、 A：瘤細(xì)胞顯色有無及深淺 0（不著色） 1（淺黃色） 2（棕黃色） 3（棕褐色） B：顯色細(xì)胞的比例 1（1%10%） 2（11%50%） 3（51%80%） 4（80%） 評(píng)分=AB 0分：陰性 14分：弱陽性 4分：強(qiáng)陽性,膠原染色,陽性面積百分比 4010視野，選取5個(gè)視野，計(jì)算陽性區(qū)域面積占整個(gè)參考面積的百分率。,CD34,Weidner法（MVD計(jì)數(shù)） 孤立的棕黃色細(xì)胞族代表一條微血管。 低倍鏡下找到組織內(nèi)密度最高區(qū)域。 4010視野下計(jì)數(shù)微血管數(shù)目。,K-ras,VEGF,附：定量分析圖象處理系統(tǒng),1、圖象處理： 利用儀器按照不同的目的進(jìn)行圖象的修正、變換、特征提取和測(cè)量。 1）

4、“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。 2）“廣義”包括對(duì)圖象的結(jié)構(gòu)分析，提取特征進(jìn)行測(cè)量。,2、圖象處理系統(tǒng)組成 圖象輸入（顯微鏡、掃描儀） 圖象處理運(yùn)算（病理圖文分析軟件） 圖象、數(shù)據(jù)輸出,3、圖象處理系統(tǒng)功能 幾何形態(tài)學(xué)定量分析 細(xì)胞核、漿的大小、面積、核漿比； 細(xì)胞分布密度、個(gè)數(shù)； 血管、腺體的面積、密度；間質(zhì)的面積 免疫組織化學(xué)分析 按著色灰度分類，計(jì)算陽性、陰性細(xì)胞的面積含量 DNA倍體分析 計(jì)算正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞DNA 含量，給出倍體參數(shù)、DNA參數(shù)分布直方圖 AgNOR分析 顆粒分析：數(shù)目、大小、面積、比例,四、免疫組化異常著色及對(duì)策,1.非特異性著色及其對(duì)策,內(nèi)源性生物素腎小管,內(nèi)源性生物素淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺腺癌,蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內(nèi)紅細(xì)胞過氧化物酶顯色,嗜酸性粒細(xì)胞中細(xì)胞色素顯色,吞噬細(xì)胞內(nèi) 含鐵血黃素,壞死組織著色：AE1/AE3,壞死組織著色,交叉反應(yīng)：乳腺ki-67組織細(xì)胞胞漿著色,黑色素瘤，細(xì)胞內(nèi)含黑色素，呈紫黑色，HE染色,灶狀著色：機(jī)械原因著色,Cyclin D1 套細(xì)胞淋巴瘤,全片著色,全片著色,邊緣著色,“陰陽臉”著色,氣泡,非特異性著色及其對(duì)策,無信號(hào)片,CD30,2. 染色的假陰性及其對(duì)策,無色或淺色片,MCL理想的 CD5著色。所有