1、實驗前準備工作,菌株的連續(xù)活化 染色液當天配制 無菌液（試管或三角瓶中）的準備,部分同學的實驗結(jié)果實例,鉀細菌的莢膜,水洗,不水洗,番紅染色,枯草桿菌的芽孢,孔雀綠+番紅染色,部分同學的實驗結(jié)果實例,問題與建議,按要求準確操作是實驗成功的關(guān)鍵,對實驗內(nèi)容不明確,多進行基本技能的訓練及實驗指導,啟發(fā)式教學（莢膜/芽孢染色為例）,鼓勵交流與分享（成功/失?。?實驗七、細菌鞭毛染色和運動性觀察（半固體穿刺法）,學習并掌握細菌的鞭毛染色法 觀察細菌鞭毛的形態(tài)特征和著生方式 觀察細菌是否運動來間接證明是否有鞭毛 了解細菌鞭毛染色的應用,一、實驗目的,二、實驗原理,細菌的鞭毛極細，直徑一般為1020nm；

2、長度為1520m。,光學顯微鏡下觀察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染劑處理，使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑 變粗，然后再進行染色。,觀察和判斷細菌鞭毛的方法,電子顯微鏡直接觀察,根據(jù)培養(yǎng)特征判斷：半固體穿刺、菌落（菌苔）形態(tài) （在半固體培養(yǎng)基中呈擴散性生長）,暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察,鞭毛的有無和著生方式具有十分重要的分類學意義,了解細菌鞭毛染色的應用,三、實驗材料,1、菌種：枯草桿菌（Bacillus subtilis）（連續(xù)活化3-4代，每10-12小時接種一次），金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus） 2、材料與試劑：載玻片（非常潔凈）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒

3、精泡 染液A（單寧酸，F(xiàn)eCl3，福爾馬林， NaOH） 染液B（AgNO3） 3、培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基（0.5%瓊脂）,四、實驗方法,（一）半固體穿刺法觀察運動性（無菌操作） 1、試管壁上標明BS及學號，用直的接種針火焰灼燒柄及針挑取一點枯草芽孢桿菌沿軸心穿刺接種于半固體培養(yǎng)基中，深34厘米37培養(yǎng)2448小時（1周）后觀察生長情況（下次課補記結(jié)果）。 2、每排找一個人按同樣的方式穿刺接種金黃色葡萄球菌，并標明SA。,（二）銀染法,1、菌懸液的制備。沿試管壁流入直至快接近培養(yǎng)基斜面的頂部，靜置10min，同時可雙手搓動試管。 2、制片：用移液槍取約100ul菌液于載玻片的一端，順著傾斜的玻片

4、流下，自然干燥。 3、染色：滴加過濾的染液覆蓋8分鐘，用液沖洗去液，再用液覆蓋染色，緩緩加熱至冒氣，維持約05秒(加熱時注意勿使出現(xiàn)干涸面) 在菌體多的部位可見深褐色至黑色(共約2分鐘) ，停止加熱，用水沖凈，干后鏡檢。 4、鏡檢，菌體及鞭毛為深褐色到黑色。,五、注意事項,1、穿刺接種時針及穿刺過程要直。 2、用于鞭毛染色的菌活力要強，操作時動作要柔和，因為鞭毛易脫落。,六、視頻,細菌鞭毛染色法,1、繪圖表示所觀察到的細菌菌體及鞭毛形態(tài)。 2、簡述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色應掌握哪些環(huán)節(jié)？注意些什么問題？ 3、記錄觀察到的細菌運動性結(jié)果（下次補記）。 4、討論實驗成敗的原因。,七、作業(yè)與討論,開放設(shè)計性實驗的準備,分組 （每一排為一組，5-6人，推選1人為組長，負責本組協(xié)調(diào)，每個人都要參與，在完成的實驗設(shè)計報告中列出所有組員的學號，姓名） 選題 （選感興趣的小實驗，查資料，討論可行性） 寫實驗設(shè)計（要求詳細具體） 實驗目的（可簡單） 實驗原理 實驗材料（包括菌種、試劑、儀器設(shè)備） 方法與步驟 可能的結(jié)果 可能存在的問題 4. 兩星期后交實驗設(shè)計報告，并討論實驗可能性。該實驗設(shè)計內(nèi)容將計算為一次平時成績。,設(shè)計性實驗的格式,實驗題目 成員的姓名，學號，組長及聯(lián)系方式 實驗目的 實