1、注射劑滅菌工藝驗(yàn)證漫談,主講人：李新成 杭州天杭空氣質(zhì)量檢測(cè)有限公司,1,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,滅菌安全相關(guān)的藥害事件 美國(guó)：1971年3月，7個(gè)州8家醫(yī)院發(fā)生了405起敗血癥 中國(guó)：2006年8月，“欣弗”事件，涉及十幾個(gè)省，160多起嚴(yán)重不良反應(yīng)，8人死亡 注：引發(fā)藥害事件的產(chǎn)品均通過(guò)了無(wú)菌檢查,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,無(wú)菌檢驗(yàn)的局限性一： 無(wú)菌的定義 理論上：無(wú)菌沒(méi)有任何活的微生物 實(shí)際上：無(wú)法證明產(chǎn)品中沒(méi)有活微生物存在 無(wú)法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn) 檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷 無(wú)菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有其局限性 只進(jìn)行細(xì)菌和真菌的檢驗(yàn) 對(duì)結(jié)果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)” 培養(yǎng)

2、條件（如溫度和時(shí)間）是有限的 我們的工作環(huán)境及操作是在相對(duì)無(wú)菌的狀態(tài),滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,無(wú)菌檢驗(yàn)的局限性二： 產(chǎn)品污染率、無(wú)菌檢查抽樣量和無(wú)菌檢查 “通過(guò)”率，可以用如下數(shù)學(xué)公式表示： P=(1-q)n q：產(chǎn)品污染率 P：無(wú)菌檢查通過(guò)率 n：無(wú)菌檢查抽樣量 按照藥典規(guī)定的瓶抽樣量，假設(shè)該批產(chǎn)品的污染率為，則該批產(chǎn)品“通過(guò)”無(wú)菌檢查的概率為,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,我們看一下，當(dāng)固定污染率為0.1%，抽樣20瓶時(shí)，通過(guò)無(wú)菌檢查的通過(guò)率： (1-0.001)20=98.0% 檢出染菌的概率為2.0% 抽樣1000瓶時(shí)，通過(guò)無(wú)菌檢查的通過(guò)率： (1-0.001)1000=36.7% 檢出染菌的概

3、率為63.3% 抽樣3000瓶時(shí)，通過(guò)無(wú)菌檢查的通過(guò)率： (1-0.001) 3000=4.97% 檢出染菌的概率為95.03%,滅菌工藝驗(yàn)證的必要性,共識(shí)無(wú)菌檢查合格不能得出產(chǎn)品無(wú)菌的結(jié)論 滅菌產(chǎn)品的無(wú)菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過(guò)程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無(wú)菌保證體系 滅菌工藝的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件 滅菌工藝經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后，方可正式用于生產(chǎn),附：無(wú)菌產(chǎn)品檢測(cè)取樣的時(shí)機(jī)和位置,無(wú)菌灌裝產(chǎn)品 批開始、結(jié)束及重大故障和調(diào)整后 最多24小時(shí)為一批 USP 每天灌裝的產(chǎn)品應(yīng)分別做無(wú)菌檢驗(yàn) 最終滅菌產(chǎn)品 從滅菌柜中最冷點(diǎn)取樣 對(duì)經(jīng)不同滅菌柜滅菌的產(chǎn)品應(yīng)分別進(jìn)

4、行無(wú)菌檢驗(yàn),滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語(yǔ),3,1. 無(wú)菌保證值SAL： 中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、歐洲藥典都將最終滅菌產(chǎn)品的無(wú)菌保證水平規(guī)定為微生物污染概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一；采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品，其無(wú)菌保證水平為微生物污染概率不超過(guò)千分之一,4,2、D值： 在一溫度下，殺滅90%微生物（或殘存率為10%）所需的滅菌時(shí)間。 3、Z值： 降低一個(gè)lgD值所需升高的溫度，即滅菌時(shí)間減少到原來(lái)的1/10所需升高的溫度或在相同滅菌時(shí)間內(nèi)，殺滅99%的微生物所需提高的溫度。 4、 F值： 在一定滅菌溫度（T）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果與在參比溫度（T0）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。F值以

5、min為單位。 注：參比溫度121時(shí)為F0,170 時(shí)為FH。,滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語(yǔ),滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語(yǔ),5、過(guò)度殺滅法 F012 微生物殘存概率10-6 6、殘存概率法 8 F0 12 微生物殘存概率10-6 7、 無(wú)菌生產(chǎn)工藝 無(wú)菌保證一般只能達(dá)到10-3水平,滅菌工藝驗(yàn)證中的幾個(gè)常用術(shù)語(yǔ),8 滅菌率 指在某一溫度T()下滅菌lmin 所獲得的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間L LF0/FTD121/DT10(T121)/Z 9 標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間 系滅菌過(guò)程賦予一個(gè)產(chǎn)品121下的 等效滅菌時(shí)間 F0 F0=FT10(T121)/Z=t10(T121)/10,5,歐盟滅菌方法選擇的對(duì)策,歐盟199

6、9年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹 決策樹的作用是在考慮各種復(fù)雜因素的情況下輔助選擇最佳的滅菌方法,6,溶液劑型產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹,產(chǎn)品是否可以在121濕熱滅菌15分鐘,產(chǎn)品是否可以濕熱滅菌F08 分鐘，達(dá)到SAL 10-6,采用高壓滅菌鍋 12115分鐘,是,否,處方是否可以通過(guò)微生物滯留過(guò)濾器過(guò)濾,無(wú)菌配藥和灌封,采用濕熱滅菌 F08 分鐘,除菌過(guò)濾和無(wú)菌工藝相結(jié)合,是,否,是,否,7,非溶液劑型、半固體或干粉產(chǎn)品滅菌方法選擇的決策樹,產(chǎn)品是否可以在160干熱滅菌120分鐘,產(chǎn)品是否可以在另外一種時(shí)間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL 10-6,采用160干熱滅菌120分鐘

7、,是,否,產(chǎn)品是否可以用其他非干熱方法滅菌，如電離輻射，吸收最小劑量 25KGY,采用另一種替代時(shí)間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌達(dá)到SAL 10-6,是,否,產(chǎn)品是否可以使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的稍低輻射劑量滅菌（參見ISO11137）,采用最小輻射吸收最小劑量 25KGY進(jìn)行輻射滅菌,是,否,處方是否可以通過(guò)微生物滯留過(guò)濾器過(guò)濾,采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的輻射劑量滅菌,是,否,無(wú)菌配藥和灌封,除菌過(guò)濾和無(wú)菌工藝相結(jié)合,是,否,8,決策樹越往下，風(fēng)險(xiǎn)越大 需要提供的必要證據(jù)越多,10,滅菌工藝驗(yàn)證要求,驗(yàn)證內(nèi)容： 空載熱分布 滿載熱分布 熱穿透試驗(yàn) 微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)（殘存概率法） 滅菌前微生物污染水平-數(shù)量和耐熱性 -

8、過(guò)程控制,找出冷點(diǎn) 多個(gè)溫度探頭均勻/重點(diǎn)分布在腔室內(nèi)， 重復(fù)運(yùn)行代表性滅菌程序，記錄個(gè)點(diǎn)溫度 變化曲線，計(jì)算各點(diǎn)溫差 通過(guò)比較各點(diǎn)溫度與平均溫度的差異確定冷點(diǎn),11,空載熱分布試驗(yàn),找出裝載方式下的冷點(diǎn) 以空載試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ) 更接近實(shí)際情況,12,滿載熱分布試驗(yàn),熱穿透試驗(yàn),測(cè)定產(chǎn)品實(shí)際溫度和F0值 以熱分布（空載、滿載）試驗(yàn)結(jié)果為基 礎(chǔ)，進(jìn)一步確定實(shí)際樣品（或模擬樣品） 的冷點(diǎn). 重要標(biāo)準(zhǔn) 冷點(diǎn)F0 平均F02min,13,14,熱穿透試驗(yàn),注意： 同品種不同濃度考察不同濃度對(duì)熱穿透的影響 不同包裝規(guī)格進(jìn)行最大和最小包裝規(guī)格的試驗(yàn) 不同裝載量進(jìn)行最小和最大裝載量的試驗(yàn) 不同滅菌溫度進(jìn)行最高

9、溫度條件下的試驗(yàn),15,證明通過(guò)該工藝能殺滅一定污染量和D值的微生物 -生物指示劑 -根據(jù)D值計(jì)算接種量 -植入芽孢的產(chǎn)品放在冷點(diǎn)部位 -運(yùn)行滅菌程序后含芽孢的產(chǎn)品應(yīng)通過(guò)無(wú)菌檢查,微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn),以上試驗(yàn)一般應(yīng)連續(xù)進(jìn)行三次,空載、滿載熱分布試驗(yàn)考察滅菌 設(shè)備的特性和狀況 熱穿透和微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)考察滅 菌設(shè)備在執(zhí)行特定滅菌工藝時(shí)賦予產(chǎn)品的 F0值，以及對(duì)微生物孢子的實(shí)際殺滅效果。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控的原因 產(chǎn)品滅菌前微生物監(jiān)控是國(guó)際規(guī)范的要求：世界衛(wèi)生組織GMPl992 版第17.50 款規(guī)定，應(yīng)制定產(chǎn)品滅菌前微生物污染的控制標(biāo)準(zhǔn)，這一標(biāo)準(zhǔn)與所采用(滅菌)方法的有效性及熱原污染的風(fēng)險(xiǎn)相

10、關(guān)。 注射劑滅菌后的無(wú)菌保證值與滅菌前產(chǎn)品的微生物污染程度及污染菌的耐熱性有關(guān)，對(duì)滅菌前微生物污染的狀況進(jìn)行檢控是對(duì)產(chǎn)品作無(wú)菌評(píng)價(jià)的先決條件。 控制滅菌前微生物污染的程度是控制產(chǎn)品熱原污染的重要手段。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控的標(biāo)準(zhǔn) 目前歐洲一些大容量注射劑生產(chǎn)公司采用的標(biāo)準(zhǔn)如下： 每100ml 藥液中污染菌不得超過(guò)100 個(gè)。 在設(shè)定的滅菌程序下，污染菌的耐熱性(即D 值)不導(dǎo)致滅菌后產(chǎn)品微生物污染的概率大于106。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,監(jiān)控方法 (1)取樣 在正常生產(chǎn)過(guò)程中，從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)尾各取一瓶灌封好的產(chǎn)品作滅菌前微生物監(jiān)控檢查。應(yīng)當(dāng)使用事先滅菌并做好標(biāo)記的瓶子取

11、樣。 (2)試驗(yàn)方法 污染水平檢查：先用滅菌的5吐溫充分濕潤(rùn)0.45m 濾膜，然后定量過(guò)濾藥液，將此濾膜移至營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，在3035培養(yǎng)37 天，計(jì)數(shù)。 耐熱性檢查：另用一張0.45m 濾膜，經(jīng)滅菌的5吐溫充分濕潤(rùn)后，過(guò)濾生物負(fù)荷檢查所剩余的藥液樣品。將此濾膜轉(zhuǎn)移入裝有無(wú)菌的待監(jiān)測(cè)產(chǎn)品的試管中，在沸水浴上煮沸30min，然后在3035下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng)，觀察是否有耐熱菌生長(zhǎng)。,滅菌前產(chǎn)品的微生物控制,當(dāng)污染水平超標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)對(duì)污染菌進(jìn)行鑒別，調(diào)查污染菌的來(lái)源并取相應(yīng)糾正措施。當(dāng)耐熱性檢查發(fā)現(xiàn)藥液存在耐熱菌污染時(shí)，應(yīng)測(cè)定污染菌的D 值或采用定時(shí)沸騰法將它和已知生物指示劑的D 值作比較，然后

12、根據(jù)滅菌的F0 值及污染菌的耐熱性對(duì)產(chǎn)品無(wú)菌作出評(píng)價(jià)。 如果曝?zé)岷髽悠返臋z測(cè)結(jié)果為不長(zhǎng)菌，則說(shuō)明產(chǎn)品中無(wú)耐熱孢子,滅菌器溫度均勻度的標(biāo)準(zhǔn),USP 24 在1211中規(guī)定，干熱滅菌器在不低于250空載運(yùn)行時(shí)，腔室各點(diǎn)允許的溫差范圍在15。 USP 24提到： 在121下滅菌時(shí)，各測(cè)溫點(diǎn)之間的溫差允許在1之內(nèi)。 JB200012003中規(guī)定：大、小容量注射劑滅菌器的熱分布試驗(yàn)中，冷點(diǎn)溫度與腔室平均溫度之差1 ；熱穿透試驗(yàn)中，冷點(diǎn)F0與腔室平均F0之差2min.,干熱滅菌、除熱原的標(biāo)準(zhǔn),BP1993年版規(guī)定： 僅以滅菌為最終目的的干熱滅菌系統(tǒng)，必須保證其最小的FH值大于17060min。干熱除熱原必

13、須保證其暴露實(shí)際溫度和時(shí)間相當(dāng)于25030min。 說(shuō)明： 25030min除熱原效應(yīng)FH900 中國(guó)藥典2005規(guī)定： 160170 120min; 170180 60min； 250 45min（可除熱原） 說(shuō)明： 250 45min除熱原效應(yīng)FH1365。,隧道式滅菌干燥機(jī)除熱原的標(biāo)準(zhǔn),口服液瓶灌裝聯(lián)動(dòng)線隧道式滅菌干燥機(jī) JB20007.32004中規(guī)定： 口服液瓶、抗生素瓶在隧道高溫區(qū)300以上至少5min。除熱原效應(yīng)FH1276； 安瓿隧道式滅菌干燥機(jī)JB20002.32004中規(guī)定：安瓿在隧道高溫區(qū)300以上至少4min。除熱原效應(yīng)FH1021； 表冷式隧道干燥機(jī)標(biāo)準(zhǔn)：FH1365

14、（與藥典接規(guī)）,說(shuō)明,過(guò)去，很多人將流通蒸氣滅菌法誤認(rèn)為是終端滅菌法。其實(shí)流通蒸氣滅菌法應(yīng)以無(wú)菌生產(chǎn)工藝（除菌過(guò)濾，嚴(yán)格控制與藥液接觸的設(shè)備、器具和環(huán)境的微生物污染水平等）為基礎(chǔ)，流通蒸氣加熱只是無(wú)菌生產(chǎn)工藝的補(bǔ)充手段，不計(jì)算F0，微生物殘存概率10-3 流通蒸氣100加熱30分鐘，相當(dāng)于F0值0.24,滅菌器驗(yàn)證過(guò)程中曾遇到的幾個(gè)問(wèn)題,1、 濕熱滅菌柜腔室內(nèi)溫度上下分層 排氣不徹底； 疏水閥堵塞。 以前，我們?cè)诤贾菀患宜帍S的一臺(tái)老式滅菌柜的驗(yàn)證過(guò)程中曾遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題。 2、隧道式烘箱溫度控制顯示與驗(yàn)證儀溫度差異很大 測(cè)溫探頭質(zhì)量問(wèn)題； 測(cè)溫探頭位置（高度）。 我們?cè)诟魂?yáng)一家藥廠驗(yàn)證時(shí)曾遇到過(guò)

15、這個(gè)問(wèn)題。,滅菌器驗(yàn)證過(guò)程中曾遇到的幾個(gè)問(wèn)題,3、隧道式烘箱腔室溫度分布差異很大 部分加熱管損壞； 進(jìn)風(fēng)、回風(fēng)的調(diào)節(jié)問(wèn)題。 在寧波一家藥廠驗(yàn)證時(shí)曾遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題。,國(guó)內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺陷,無(wú)包裝規(guī)格 無(wú)裝載方式 未對(duì)每一種產(chǎn)品每一種包裝規(guī)格的每一種裝載方式進(jìn)行驗(yàn)證 采用留點(diǎn)溫度計(jì)監(jiān)測(cè)溫度 無(wú)溫度探頭校準(zhǔn)記錄 驗(yàn)證的滅菌工藝與實(shí)際工藝不一致 未驗(yàn)證最差滅菌條件 僅針對(duì)生產(chǎn)線進(jìn)行驗(yàn)證，未結(jié)合產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證 設(shè)定的驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)達(dá)不到無(wú)菌保證水平（SAL）10-6,國(guó)內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺陷,生物指示劑使用不規(guī)范 國(guó)內(nèi)缺乏某些無(wú)菌藥品生產(chǎn)必備的檢測(cè)儀器 D值測(cè)定儀 企業(yè)的微生物實(shí)驗(yàn)室能力薄弱 缺

16、乏專業(yè)人員 缺乏菌種分離鑒別的條件和能力 無(wú)菌生產(chǎn)工藝未進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝和微生物截流量試驗(yàn),注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,1、問(wèn)：洗烘灌聯(lián)動(dòng)線在正常運(yùn)行時(shí)，玻璃瓶通過(guò)隧道烘箱滅菌后即進(jìn)行灌裝，但當(dāng)灌裝機(jī)出現(xiàn)故障或不間斷檢修的情況下，受聯(lián)動(dòng)線的限制，必然會(huì)導(dǎo)致隧道烘箱內(nèi)的一部分玻璃瓶將處于高溫區(qū)，長(zhǎng)時(shí)間滯留時(shí)會(huì)不會(huì)對(duì)瓶本身產(chǎn)生影響？ 答：要看什么材質(zhì)的，可以做驗(yàn)證，烘洗后做耐酸耐堿試驗(yàn)。 2、問(wèn)：熱風(fēng)循環(huán)烘箱溫度時(shí)有失控現(xiàn)象，如何解決？ 答：可以檢查一下溫度傳感器是否失靈，電磁閥是否工作正常：一、更換溫度傳感器，二、更換溫度控制儀。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,3、問(wèn)：玻璃瓶在隧道烘箱里冷爆的原因和風(fēng)速有關(guān)

17、系嗎？ 答： 玻璃瓶爆裂，其原因就在于溫差或是外力擊打，此問(wèn)題中的原因是溫差，可能是風(fēng)速的原因，就是說(shuō)冷卻得不均衡，或是移動(dòng)過(guò)程中接觸到低溫的物體，尤其是熱傳導(dǎo)較快的金屬物體。再有就是所用玻璃瓶的質(zhì)量不很好，建議選用正規(guī)廠家生產(chǎn)的。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,4、在對(duì)濕熱滅菌器進(jìn)行熱分布、熱穿透的驗(yàn)證時(shí)，如果柜內(nèi)找到的冷點(diǎn)在3次驗(yàn)證中不同，該如何處理？答：一般來(lái)說(shuō)，空載熱分布的冷點(diǎn)應(yīng)該是在確定的位置周圍，否則就可能是設(shè)備、壓力、空氣置換不完全、蒸汽質(zhì)量等原因引起。對(duì)于裝載熱穿透，大容量注射劑（LVP，100ml）冷點(diǎn)位于產(chǎn)品的幾何中心和沿縱軸位于產(chǎn)品的底部，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。冷點(diǎn)的定位在小容量注射

18、劑中并不典型，因?yàn)槿芤杭訜岬乃俾蕩缀跖c滅菌器相同。還有，容器的方向也會(huì)影響冷點(diǎn)的位置，當(dāng)容器旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)時(shí)，可能不存在可辨別的冷點(diǎn)。如果裝載不變，容量相同，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷點(diǎn)仍然無(wú)法重現(xiàn)，則應(yīng)檢查設(shè)備、工藝、壓力、蒸汽質(zhì)量等方面可能存在的不確定性。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,5、熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是什么概念，是指實(shí)驗(yàn)室小批量樣品嗎？ 答：熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是指熱穿透性能與真實(shí)樣品一致的樣品，不是實(shí)驗(yàn)室小批量樣品。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,6、請(qǐng)問(wèn)滅菌前微生物污染水平和耐熱性（D值）的測(cè)試方法？ 答：微生物污染水平通常采用濾膜過(guò)濾法截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)并作微

19、生物計(jì)數(shù)。應(yīng)注意過(guò)濾的體積、截留微生物的數(shù)量，保證足夠的檢出率（足量的過(guò)濾量）和可計(jì)數(shù)性（截留的微生物太多就沒(méi)法計(jì)數(shù)了）。 每批產(chǎn)品都進(jìn)行的耐熱性測(cè)試并非D值測(cè)試，而是所謂沸騰試驗(yàn)一種定性試驗(yàn)。將截留了微生物的濾膜放入裝有同種產(chǎn)品藥液的試管中，進(jìn)行水浴煮沸15分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，對(duì)該藥液進(jìn)行無(wú)菌檢查，如陰性則通過(guò)，呈陽(yáng)性，說(shuō)明污染菌是耐熱菌，則需要進(jìn)一步測(cè)D值。99%以上的檢品是非耐熱菌。 D值測(cè)定相當(dāng)復(fù)雜，請(qǐng)參考藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（藍(lán)皮書，國(guó)家藥監(jiān)局編）第三篇第三章第一節(jié)，有詳細(xì)介紹。,附：D值測(cè)定法,生物指示劑耐熱性測(cè)定儀 在滅菌過(guò)程中形成矩形脈沖曲線，即升溫及降溫極快，能保持恒定的溫度，曝?zé)徇^(guò)

20、程容易計(jì)時(shí)。 假設(shè)條件 微生物存活數(shù)從N0到滅菌終點(diǎn)始終與曝?zé)釙r(shí)間呈線性關(guān)系（對(duì)數(shù)規(guī)則）。,方法一：不生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）,最可能數(shù)測(cè)定法 將一組樣品（至少10個(gè)樣本）置于設(shè)定滅菌溫度下，加熱到設(shè)定時(shí)間后，分別作無(wú)菌檢查。 當(dāng)滅菌溫度T為121時(shí)，可用下式計(jì)算D值 DTF0/lgN0-lg2.303lg(n/q) 式中：n樣品總數(shù) q曝?zé)崽幚砗鬅o(wú)菌樣品數(shù),方法一：不生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）,估算法 系列組（每組至少10個(gè)樣品），置于預(yù)定溫度下，按等差遞增的方式設(shè)置不同的曝?zé)釙r(shí)間，分別進(jìn)行熱處理，處理后的樣品放入無(wú)菌液體中適宜溫度下培養(yǎng)，記錄每組樣品中沒(méi)有微生物生長(zhǎng)的樣品數(shù)，按下表方式進(jìn)行排

21、列,選擇從全部生長(zhǎng)的最長(zhǎng)曝?zé)釙r(shí)間組（B）到顯示完全不生長(zhǎng)最短曝?zé)釙r(shí)間組（G）之間的數(shù)據(jù)計(jì)算D值。 首先計(jì)算出孢子完全殺滅時(shí)間t t=tk-d/2-(d/10f) 式中：tk陰性分?jǐn)?shù)范圍下限（全部樣品不長(zhǎng)菌所需的最短曝?zé)釙r(shí)間） d 等差值,方法一：不生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）,然后根據(jù)下式計(jì)算D值 Dt/(lgN0+0.2507) 假設(shè)N0105，其它實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如上表所示，則D值的計(jì)算為 t152/2-（2/1026）=8.8(min) D=8.8/(5+0.2507)=1.7(min),方法二：存活曲線法,測(cè)試兩個(gè)樣品（至少），在設(shè)定溫度下（如121）分別取兩個(gè)不同的曝?zé)釙r(shí)間，然后將熱處理后的樣品

22、及對(duì)照樣品（未經(jīng)熱處理的樣品）采用平皿計(jì)數(shù)法或經(jīng)薄膜過(guò)濾并置于適當(dāng)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)的方法對(duì)每個(gè)樣品中存活微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)（NS），將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值取常用對(duì)數(shù)（lg），對(duì)相應(yīng)的曝?zé)釙r(shí)間F0作圖，可得如圖所示的存活曲線,在存活曲線上，從微生物差值為一個(gè)對(duì)數(shù)單位的二個(gè)點(diǎn)分別作X軸和Y軸的平行線，在X軸上即可求得D值，也可用下面的公式計(jì)算 D121F0/（lgN0lgNS） 舉例：D值測(cè)定中曝?zé)釙r(shí)間為5min,而N0105，NS102，則 D1215/(lg105- lg102)=5/3=1.7(min),方法二：存活曲線法,從上圖中也可以看出，D值為存活曲線斜率的負(fù)倒數(shù)（1/K），因此D值可在存活曲線

23、的直線段，用未加權(quán)最小二次線性回歸分析法按下式求得 式中u曝?zé)釙r(shí)間 y曝?zé)釛l件下存活菌落數(shù)的平均值 n所得初驗(yàn)數(shù)據(jù)的組數(shù),注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,7、對(duì)于選擇殘存概率法最終滅菌的產(chǎn)品，如果滅菌前每批檢測(cè)微生物限度，而微生物限度檢測(cè)時(shí)間為72小時(shí)，而實(shí)際連續(xù)生產(chǎn)的生產(chǎn)周期遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于72小時(shí)，其檢測(cè)結(jié)果僅是對(duì)滅菌后產(chǎn)品無(wú)菌保證水平的參考嗎？答：顯然滅菌前微生物含量檢查的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于生產(chǎn)過(guò)程，其目的不是用于對(duì)當(dāng)批產(chǎn)品的中間控制。該檢查的意義主要有兩項(xiàng)： 第一，用于評(píng)價(jià)該批產(chǎn)品的無(wú)菌保證水平； 第二，長(zhǎng)期積累了多批滅菌前微生物含量的數(shù)據(jù)后，可以對(duì)生產(chǎn)系統(tǒng)在滅菌前的各工藝步驟的微生物污染狀況作整體的評(píng)估

24、，從而指示該生產(chǎn)體系是否有效地將微生物污染控制在很好的水平，是否需要進(jìn)行改進(jìn)等。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,8、請(qǐng)問(wèn)微生物種類、數(shù)量研究的方法？所需的設(shè)備？如果采用殘存概率法，是否在生產(chǎn)過(guò)程中必須對(duì)微生物水平進(jìn)行測(cè)定？ 答：微生物污染的程度即數(shù)量的檢查可以按照藥典收載的微生物限度檢查方法進(jìn)行； 微生物的種類可以從以下幾方面依次展開： 1）通過(guò)肉眼觀察菌落形態(tài)； 2）鏡檢形態(tài)和運(yùn)動(dòng)性； 3）一般生化試驗(yàn)：革蘭氏染色或3KOH試驗(yàn)； 4）生化鑒定（即API試驗(yàn)）鑒別到種。 采用殘存概率法時(shí)，應(yīng)該檢測(cè)產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平，包括污染菌的煮沸試驗(yàn)（如100，15分鐘）和微生物計(jì)數(shù)。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題

25、問(wèn)答,9、過(guò)度殺滅法是否確定不需進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？ 答：過(guò)度殺滅法的內(nèi)涵是產(chǎn)品中的微生物下降12個(gè)對(duì)數(shù)，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是證明微生物的殘存概率不大于10-6，故過(guò)度殺滅法可不進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。,注射劑生產(chǎn)常見問(wèn)題問(wèn)答,10、如何進(jìn)行藥液儲(chǔ)存周期驗(yàn)證，儲(chǔ)存周期起點(diǎn)、終點(diǎn)如何確定，使配制完成后滅菌前，還是過(guò)濾后滅菌前，取樣點(diǎn)如何設(shè)置，檢驗(yàn)方法及合格判定標(biāo)準(zhǔn)如何確定？ 答：進(jìn)行藥液儲(chǔ)存時(shí)間驗(yàn)證的目的是為了確保藥液的微生物水平控制在下道工藝要求范圍內(nèi)并確保對(duì)產(chǎn)品的無(wú)菌性和內(nèi)毒素等質(zhì)量指標(biāo)無(wú)不良影響。一般來(lái)講，配液完成后到無(wú)菌過(guò)濾前，或過(guò)濾完成后到滅菌前（終端滅菌產(chǎn)品）是考察的重點(diǎn)，方法和標(biāo)準(zhǔn)需要根據(jù)

26、自己產(chǎn)品的工藝特點(diǎn)確定。,討論1:隧道式滅菌干燥機(jī)的傳輸速度,提請(qǐng)注意審核一下你們注射劑工藝規(guī)程中，是否規(guī)定的干熱滅菌干燥機(jī)傳輸帶的運(yùn)行速度？沒(méi)有制定傳輸帶的運(yùn)行速度，滅菌除熱原的效果（時(shí)間）靠什么保證？ 再請(qǐng)大家審核一下你們以前做的驗(yàn)證方案或驗(yàn)證報(bào)告（包括委托專業(yè)公司進(jìn)行的驗(yàn)證），里面有沒(méi)有體現(xiàn)出“傳輸速度”這個(gè)關(guān)鍵的驗(yàn)證點(diǎn)呢？倘若這個(gè)點(diǎn)沒(méi)有出現(xiàn)在方案或報(bào)告中，你驗(yàn)證的是什么呢？,討論2：裝載熱分布和熱穿透合做試驗(yàn)的分析,濕熱滅菌柜驗(yàn)證時(shí)，裝載熱分布和熱穿透試驗(yàn)?zāi)闶欠珠_做還合在一起做的呢？當(dāng)你合在一起做時(shí)候，哪些探頭是用于熱分布的，哪些是用于熱穿透的，你標(biāo)注清楚了嗎？你合在一起做的目的描述了

27、嗎？對(duì)兩組數(shù)據(jù)分析了嗎？ 濕熱滅菌柜的測(cè)溫探頭的裝置方式，不同企業(yè)有時(shí)是不同的，有的是暴露在滅菌環(huán)境中，測(cè)空氣的溫度，有的則裝在模擬產(chǎn)品中，測(cè)滅菌產(chǎn)品內(nèi)部的溫度。也就是說(shuō)，有的和熱分布是一致的，有的和熱穿透試驗(yàn)是一致的，不同的安裝方式對(duì)于你制定滅菌程序時(shí)的影響你考慮了嗎？,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,齊二藥事件 不法商人王桂平偽造藥品生產(chǎn)許可證等證件，于年月將工業(yè)原料二甘醇假冒藥用輔料丙二醇出售給齊二藥?；?yàn)室主任陳桂芬等人未將檢測(cè)圖譜與“藥用標(biāo)準(zhǔn)丙二醇圖譜”進(jìn)行對(duì)比鑒別，并在發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)樣品“相對(duì)密度值”與標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重不符的情況下，將其改為正常值，簽發(fā)合格證，致使假藥“亮菌甲素注射液

28、”出籠并造成名患者使用該產(chǎn)品后出現(xiàn)急性腎功能衰竭并死亡。,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,“欣弗”事件 安徽華源生物藥業(yè)有限公司2006年6月至7月生產(chǎn)的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批準(zhǔn)的工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度，縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果。經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所對(duì)相關(guān)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明，無(wú)菌檢查和熱原檢查不符合規(guī)定。 工藝參數(shù)不得任意進(jìn)行更改,討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,甲氨蝶呤事件 上海華聯(lián)制藥廠在生產(chǎn)過(guò)程中，現(xiàn)場(chǎng)操作人員將硫酸長(zhǎng)春新堿尾液混于注射用甲氨蝶呤及鹽酸阿糖胞苷等批號(hào)藥品中，導(dǎo)致了多個(gè)批次的藥品被硫酸長(zhǎng)春新堿污染，造成重大

29、的藥品生產(chǎn)質(zhì)量責(zé)任事故 標(biāo)識(shí)、清場(chǎng)、工作態(tài)度、培訓(xùn),討論3：接二連三的注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么,完達(dá)山刺五加注射液事件 2008年7月1日，昆明特大暴雨造成庫(kù)存的刺五加注射液被雨水浸泡。完達(dá)山藥業(yè)公司云南銷售人員張某從完達(dá)山藥業(yè)公司調(diào)來(lái)包裝標(biāo)簽，更換后銷售。 正是這些被雨水浸泡過(guò)的產(chǎn)品，致使3名使用該藥品的患者死亡。 二次污染、貯存條件、標(biāo)簽管理,附件1：滅菌器驗(yàn)證流程,1. 首次驗(yàn)證 2. 偏差管理、變更控制 3. 再 驗(yàn) 證 4. 階段性的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,首次驗(yàn)證,用戶要求 URS（ User Requirement Specification ） 功能標(biāo)準(zhǔn)FDS（ Functional Des

30、ign Specification 設(shè)計(jì)確認(rèn)D Q （ Design Qualification ） 工廠測(cè)試FAT（ Factory Acceptance Test ） 現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試 SAT（ Site Acceptance Test ） 安裝確認(rèn)I Q（ Installation Qualification ） 運(yùn)行確認(rèn) O Q（ Operational Qualification ） 性能確認(rèn) P Q（ Performance Qualification ）,首次驗(yàn)證用戶要求 URS,1. 工藝描述 (產(chǎn)品,部件) 生產(chǎn)流程介紹、滅菌的工藝 、產(chǎn)品特性, 物料的特性、產(chǎn)量、滅菌的效果達(dá)到要求

31、, (Temp FO)等 2. 滅菌柜驗(yàn)證的主要合格標(biāo)準(zhǔn) 3. 一些指南的要求 4. 環(huán)境和安全要求 5. 技術(shù)要求及布局要求 機(jī)械部分的要求 電氣部分的要求 控制系統(tǒng)的要求 6. 介質(zhì)的要求,URS 的關(guān)注點(diǎn),對(duì)于自己列出的要求, 首先要自己判斷是否理解，是否合理 由于設(shè)備大都是按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)的, 必須確保供應(yīng)商對(duì)URS仔細(xì)閱讀,首次驗(yàn)證功能標(biāo)準(zhǔn) FDS,由供應(yīng)商提供 設(shè)備 控制系統(tǒng) 對(duì)驗(yàn)證的設(shè)計(jì)也是FDS的一部分 大多設(shè)備的FDS都是針對(duì)型號(hào)編寫的, 可以要求供應(yīng)商提供FDS/URS 符合表,首次驗(yàn)證設(shè)計(jì)確認(rèn) DQ,DQ 的參考資料: URS/ FDS/ 圖紙/ 法規(guī) 確保設(shè)計(jì)滿足URS和法規(guī)

32、的要求 對(duì)于FDS 和URS 的不符合項(xiàng),需要作出決定是整改還是接受 從DQ開始,所有的文件變更都是GMP檢查的范圍!,首次驗(yàn)證工廠測(cè)試 FAT,在出廠之前對(duì)設(shè)備進(jìn)行整體的測(cè)試 對(duì)制造文件的詳細(xì)檢查 材料(材質(zhì)證明) 焊接檢查 壓力容器證書 對(duì)于IQ/OQ 中一些無(wú)法檢查的項(xiàng)目,需要安排在FAT中進(jìn)行，如：一些控制功能的模擬, 一些挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn),首次驗(yàn)證現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試 SAT,設(shè)備在現(xiàn)場(chǎng)組裝完成后進(jìn)行的整體測(cè)試 確保系統(tǒng)能按設(shè)計(jì)要求正常運(yùn)轉(zhuǎn) 是對(duì)員工進(jìn)行培訓(xùn)的機(jī)會(huì) 開始準(zhǔn)備SOP 可以作為IQ 的準(zhǔn)備,首次驗(yàn)證安裝確認(rèn) IQ,文件的檢查 儀表與管道的檢查 介質(zhì)的檢查 設(shè)備主要特性及安全特性的檢查,首次驗(yàn)

33、證運(yùn)行確認(rèn)OQ,儀表的校準(zhǔn)（控制用儀表和記錄用儀表） LOOP 測(cè)試 安全檢查 報(bào)警測(cè)試 單項(xiàng)功能測(cè)試 整體性能測(cè)試 程序運(yùn)行 電子記錄和電子簽名的測(cè)試,首次驗(yàn)證性能確認(rèn) PQ,1 前提條件 滅菌柜 IQ、OQ 完成 程序及裝載的預(yù)測(cè)試完成 純蒸汽的PQ 第一第二階段完成 壓縮空氣的PQ完成 驗(yàn)證儀器的確認(rèn)完成 SOP 完成, 所用的程序和裝載方式確定 人員培訓(xùn)完成 所有的測(cè)試材料準(zhǔn)備完畢,首次驗(yàn)證性能確認(rèn) PQ,2. PQ 中的重要測(cè)試項(xiàng)目 空腔體溫度分布 最小裝載的溫度分布 最大裝載的溫度分布 中間裝載的溫度分布 (根據(jù)實(shí)際情況) 微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn) 泄漏率測(cè)試 Air Detector 測(cè)試

34、 對(duì)于每一種測(cè)試, 重復(fù)三次,滅菌驗(yàn)證的一些基本要求,驗(yàn)證用儀器必須提供校準(zhǔn)證書 熱電偶/電阻在使用前和使用后都必須進(jìn)行校準(zhǔn) 對(duì)于大容量的瓶子,熱電偶/電阻在瓶子中的位置必須進(jìn)行確認(rèn) 如果采用替代物質(zhì)進(jìn)行PQ, 必須進(jìn)行等同性測(cè)試 必須確定產(chǎn)品滅菌的接受標(biāo)準(zhǔn)F0值的范圍 對(duì)于濕熱滅菌柜,需要考慮平衡時(shí)間 對(duì)于收集的數(shù)據(jù),必須及時(shí)進(jìn)行分析,總結(jié),偏差管理和變更控制,對(duì)于驗(yàn)證過(guò)程中出現(xiàn)的偏差必須遵循偏差管理的流程 如果需要變更, 則還需要遵循變更的流程,再驗(yàn)證,滅菌的程序和裝載發(fā)生變化后,必須進(jìn)行再驗(yàn)證 滅菌柜使用一定周期后,必須對(duì)程序和裝載進(jìn)行再次確認(rèn). 通常為一年 再驗(yàn)證的策略是列出程序和裝載

35、的列表, 有選擇地對(duì)關(guān)鍵裝載進(jìn)行再驗(yàn)證,風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,幾個(gè)術(shù)語(yǔ)： 風(fēng)險(xiǎn)：是危害發(fā)生的可能性和嚴(yán)重性的組合。 風(fēng)險(xiǎn)管理：即系統(tǒng)性的應(yīng)用管理方針、程序?qū)崿F(xiàn)對(duì) 目標(biāo)、任務(wù)的風(fēng)險(xiǎn)分析、評(píng)價(jià)和控制。 風(fēng)險(xiǎn)分析：運(yùn)用有用的信息和工具，對(duì)危險(xiǎn)進(jìn)行識(shí) 別、評(píng)價(jià)。 風(fēng)險(xiǎn)控制：即制定減小風(fēng)險(xiǎn)的計(jì)劃和對(duì)風(fēng)險(xiǎn)減少計(jì) 劃的執(zhí)行，及執(zhí)行后結(jié)果的評(píng)價(jià)。,風(fēng)險(xiǎn)管理,有什么風(fēng)險(xiǎn)? 從哪兒來(lái)? 對(duì)什么有影響? 嚴(yán)重程度怎樣? 我們?nèi)绾螒?yīng)對(duì)?,風(fēng)險(xiǎn)管理的應(yīng)用程序,風(fēng)險(xiǎn)管理過(guò)程,風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,對(duì)危害源的鑒定和對(duì)接觸這些危害源造成的風(fēng)險(xiǎn)的分析和評(píng)估,1）什么時(shí)候出錯(cuò) 2）出錯(cuò)的可能性有多大 3）結(jié)果是什么（嚴(yán)重性）,風(fēng)險(xiǎn)控制,制訂降低和/或

36、接受風(fēng)險(xiǎn)的決定,1）風(fēng)險(xiǎn)是否在可接受的水平 以上？ 2）怎么才能降低、控制或消 除風(fēng)險(xiǎn) 3）在利益、風(fēng)險(xiǎn)和資源間合 適的平衡點(diǎn)是什么？ 4）作為鑒定風(fēng)險(xiǎn)控制結(jié)果而 被引入的新的風(fēng)險(xiǎn)是否處 于受控狀態(tài),風(fēng)險(xiǎn)通報(bào),風(fēng)險(xiǎn)回顧,決策制訂人及其他人員之間交換或分享風(fēng)險(xiǎn)及其管理信息,風(fēng)險(xiǎn)管理的過(guò)程結(jié)果應(yīng)結(jié)合新的知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行回顧,風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估,風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是基于對(duì)危害發(fā)生的頻次和危害程度這兩方面考慮而得出的綜合結(jié)論，評(píng)估結(jié)果需被量化。,發(fā)生的可能 第1級(jí):稀少(發(fā)生頻次小于每十年一次) 第2級(jí):不太可能發(fā)生(每十年一次) 第3級(jí):可能發(fā)生(每五年一次) 第4級(jí):很可能發(fā)生(每一年一次) 第5級(jí):經(jīng)常發(fā)生(幾乎每次都可能發(fā)生),嚴(yán)重程度 第1級(jí):可忽略 第2級(jí):微小 第3級(jí):中等 第4級(jí):嚴(yán)重 第5級(jí):毀滅性,風(fēng)險(xiǎn)指示值=危害嚴(yán)重性指數(shù)